방법 논문

경색 지역의 중간 동맥 폐색 기술 및 시각화를 사용하여 마우스의 허혈성 뇌졸중 및 허혈 - 재관류 유도

DOI:

10.3791/54805

⸱

2017년 2월 2일

 ,  , 
1Department of Biochemistry and Molecular Biology, Miller School of Medicine, University of Miami, 2Miller School of Medicine, University of Miami, 3Jerzy Kukuczka Academy of Physical Education

이 논문에서

요약

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우리는 실리콘으로 코팅된 봉합사를 사용하여 중대뇌동맥의 폐색에 의해 유도된 뇌졸중의 마우스 모델을 설명합니다. 이 프로토콜은 영구적인 폐색 또는 일시적인 허혈을 유도한 후 재관류

를 유도하는 데 적용할 수 있습니다.

초록

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뇌혈관 질환은 전 세계적으로 널리 퍼져 있으며 뇌졸중을 포함한 여러 유형의 질환을 포함합니다. 조직 손상에 대한 뇌졸중의 영향을 연구하고 치료 개입의 효과를 평가하기 위해 다양한 종에 대한 여러 실험 모델이 개발되었습니다. 여기에는 완전 전역 뇌허혈, 불완전 전체 허혈, 국소 뇌 허혈 및 다초점 대뇌 허혈이 포함됩니다. 이 프로토콜에 설명된 모델은 중대뇌동맥 폐색(MCAO)을 기반으로 하며 국소 허혈 범주와 관련이 있습니다. 이 기술은 엄격하게 정의된 반구 영역에서 일관된 국소 허혈을 일으키며 다른 방법보다 덜 침습적입니다. 설명된 절차는 여러 유전적 변이의 가용성과 행동 및 신경 결핍 평가를 돕기 위해 마우스에 대해 표준화된 많은 수의 테스트를 고려하여 마우스에서 수행됩니다.

서론

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심혈관 질환의 연구, 뇌졸중과 같은 생체 내 모델의 사용에 의존한다. 허혈, 약물의 독성 및 / 또는 치료 가능한 의미를 이해하기 위해, 처리 군 사이의 비교 연구를 가능하게하는 질환의 적합한 표준화 된 신뢰성 및 재현성이 모델을 사용할 필요가있다. 이 논문에서는, 트랜스 제닉 마우스 표준화 평가 모델의 다수의 가용성 주어진 쥐를 사용한다. 실험 허혈성 뇌졸중과 같은 복구 다음 모터와 행동 적자를 평가하는 점수를 긁어하면, 2 1 개발되었다.

여러 허혈성 뇌졸중 모델은 전체 글로벌 대뇌 허혈, 불완전 글로벌 허혈, 다 초점 대뇌 허혈 및 국소 뇌허혈로 사용할 수 있습니다. 후자의 그룹은 또한 환자의 가장 일반적인 뇌졸중의 범주입니다. 이브의 대부분국세청은 또는 중간 대뇌 동맥 (MCA) 가까이에서 색전이나 혈전 성 폐색의 형성에 의해 시작됩니다. 이러한 매개 변수를 감안할 때, 밀접하게 제시된 모델은 인간의 뇌졸중 질환의 원인을 모방하고 관련성이 높은 3 얻어진 결과를 만든다. 그럼에도 불구하고, 인간의 질병 치료에 동물 모델에서 발견의 번역은 어려운 것으로 입증되었습니다. 지....

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프로토콜

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모든 절차는 건강 (NIH) 지침의 국립 연구소에 따라 마이애미 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)의 대학에 의해 승인되었다. 멸균 장비 및 무균 기술의 사용이 필요합니다.

1. 폐색 봉합 준비

  1. 25g과 25 사이의 마우스에 대한 0.23 mm - - 체중 35g (20) 사이의 마우스에 대해 0.21 mm 직경의 봉합사를 사용합니다. MCAO 절차에 대한 봉합사의 종류의 선택은 동물의 체중에 따라 다르다.
  2. 실버 펜을 사용하여 실리콘 코팅 된 선단부터 9mm의 봉합사를 표시한다. 이 삽입 길이에 대한 지침을 제공합니다.

수술 2. 준비

  1. 실험실 마취 시스템을 이용하여, 산소와 혼합하여 이소 플루 란 마취 마우스. 상업 시스템에 2에서 5와 산소의 흐름을 설정에서 이소 플루 란을 사용 (재료 표 참조). surger에 동물 이동Y면과 코 콘을 사용하여 마취를 유지 (1.5 설정을 사용 이소 플루 란 - 2 2.5과 산소의 흐름을).
    1. 초당 2 호흡을 헐떡없이 - 마우스 호흡 속도가 약 1이 있는지 확인합니다. 또한, 동물 수염 자극 반응과 페달 반사 (발가락 핀치)를 발생....

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결과

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폐색 봉합의 삽입 경로는 그림 1에서 설명된다. MCAO 봉합사는 ICA 용 분기로, 폐색 영역으로 라우팅 될 것이다. MCA의 성공적인 폐쇄는 TTC 염색으로 표시 조직 손상으로 이어질 것입니다. 그림 2 (90 분 또는 24 시간 이후 폐쇄,도 2b에 염색) 가짜 치료 동물 (그림 2A) 및 60 분 MCAO 허혈 재관류 동물에서의 염색의 이미지를 제공합니다. 스트로크 량을 결정하기 위해, 먼저 반대측의 전체 영역에서 동측의 비 - 경색 영역을 감산함으로써, 눈금자 촬상 방법에 포함하여 각 섹션의 선 영역을 구한다. 이 계산은 상용 소프트웨어 또는 개방 소스 소프트웨어를 사용하여 수행 될 수있다. 그 후, 슬라이드 1 mm 두께의 것을 각각의 조각은 고려에 대한 행정 볼륨을 계산하고 fo를 스트로크 볼륨을 요약모든 조각을 r에. 이 과정은 다른 .......

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토론

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상술 MCAO 방식의 성공적인 이용은 뇌 혈류 해부학의 이해에 크게 의존한다. 봉합의 정확한 위치 인한 직접적인 시각적 단서의 부족으로 분별하기 어려운 때문에 반복 연습 조사 연구에 사용하기 전에 절차를 습득하는 것이 중요하다. 스트로크 볼륨은 일관된 결과를 보장하기 위해 분석되어야한다. 레이저 도플러 시스템의 첨가는 혈류의 성공적인 폐색을 결정하는 데 도움이되고 절차가 정확하게 수행되도록 주기적으로 사용되어야한다. 폐색 영역으로 봉합 MCAO 라우팅하는 동맥을 조작함으로써 용이하게 될 수있다. 는 ECA / ICA가 / 아래 왼쪽에있는 봉합사를 안내하고 않도록 약간 집게와 분기 (2-3 ㎜) 위에있는 ICA에 대한 눌러 분기 통과 만되면, MCA에 봉합 안내에 도움 pterygopalatine 동맥으로가는. 또한, 베개 이동 단계 3.3 PU 배치lling 아래 위로 매듭 및 삽입을 쉽게하기 위해 동맥을 배향에 도움이 될 수 있습니다 오른쪽. 프로토콜의 나머지 단계는 실체 현미경 하에서 미세을 포함하고 매우 간단합니다. 90.......

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공개 사항

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저자에게는 경쟁이나 이해 상충이 없습니다.

감사의 글

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우리 실험실에서 이 모델을 처음 확립한 Dr. Lei Chen(뉴욕 마운트 시나이의 Icahn School of Medicine)에게 감사드립니다. HL126559, DA039576, MH098891, MH63022, MH072567, DA027569 및 NSC 2015/17/B/NZ7/02985에서 부분적으로 지원됩니다. Luc Bertrand 박사는 미국심장협회(American Heart Association)의 박사후 연구원(16POST31170002)의 일부 지원을 받고 있습니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
MCAO 봉합사 0.23 mmDoccol702345PK5Re
MCAO 봉합사 0.21 mmDoccol702145PK5Re
실버 펜스테이플503205
마취 기계Vetequip901806
외과 용 가위정밀 과학 도구14558-09
외과 겸자 스트레이트 팁파인 과학 도구00108-11
수술 겸자 각진 팁미세 과학 도구00109-11
스프링 가위미세 과학 도구15000-08
나일론 봉합Braintree scintificSUT-S 104
폐쇄 봉합사VWR95057-036
IsofluranePiramal
2,3,5- 트리 페닐 테트라 솔륨 클로라이드FisherSci50-121-8005
브레인 블록Braintree scintificBS-A 5000C
저온 유지 장치블레이드 VWR89202-606
옵션 :
Periflux 레이저 도플러 시스템PerimedPeriflux 5000
모니터링 장치PerimedPF 5010 - LDPM
사

참고문헌

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Cuomo, O., et al. Antithrombin reduces ischemic volume, ameliorates neurologic deficits, and prolongs animal survival in both transient and permanent focal ischemia. Stroke. 38 (12), 3272-3279 (2007).
  2. Wauquier, A., Melis, W., Janssen, P. A.

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재인쇄 및 허가

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TTC

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