외상 환자 중 사망의 중요한 원인 인 통제되지 않는 출혈은 쥐 모델에서 표준 간 열화를 사용하여 모델링 할 수 있습니다. 이 모델은 일관된 혈액 손실, 생존을 가져오고 지혈제를 검사 할 수있게합니다. 이 기사에서는이 중요한 모델을 수행하기위한 단계별 프로세스를 제공합니다.
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이 논문에서
요약
초록
통제되지 않는 출혈은 외상 환자들 사이에서 예방 가능한 사망의 중요한 원인입니다. 우리는 일관된 출혈, 혈역학 적 변화 및 생존을 가져 오는 간혹 열상 을 통한 통제되지 않는 출혈의 쥐 모델을 개발했습니다.
마우스는 간장의 좌측 중간 엽의 표준화 된 절제를 시행한다. 기계적 개입없이 출혈이 허용됩니다. 지혈제는 연구자의 관심에 따라 전처리 또는 구조 요법으로 투여 할 수 있습니다. 출혈하는 동안 왼쪽 대퇴 동맥 라인을 통한 실시간 혈역학 모니터링이 수행됩니다. 마우스를 희생시키고, 출혈량을 정량화하고, 혈액을 추가 분석을 위해 수집하고, 장기를 상해 분석을 위해 수확합니다. 실험 설계는 여러 동물을 동시에 시험 할 수 있도록 기술되어 있습니다.
통제되지 않는 출혈의 모델로서 간 출혈이 존재한다.주로 쥐와 돼지 모델에서의 문헌. 이 모델 중 일부는 혈역학 모니터링을 사용하거나 출혈을 정량화하지만 일관성이 부족합니다. 현재의 모델은 출혈이 통제되지 않은 혈류 역학의 메커니즘을 더 연구하기 위해 트랜스 제닉 라인과 높은 처리량 메커니즘을 사용하는 이점을 제공하는 생쥐 모델에서의 혈액 손실, 실시간 혈류 역학 모니터링의 정량화를 통합합니다.
서론
외상은 전 세계 젊은이들 사이에서 사망 및 장애를 유발하는 주요 원인입니다. 1 통제되지 않는 출혈은 중상을 입은 외상 환자들 사이의 주요 사망 원인입니다. 출혈 외상 환자의 관리는 외과 적 출혈의 통제와 소생술 및 분실 된 혈액의 대체 등 두 가지가 있습니다.
출혈성 쇼크의 동물 모델은 외상 연구의 초석이었으며 외상성 / 출혈성 쇼크의 병리 생리학 및 치료의 평가에 사용될 수 있습니다. 동물 모델의 3 , 4 충격은 통제 된 출혈과 통제되지 않는 출혈의 두 가지 방법으로 광범위하게 달성 할 수 있습니다. 5 , 6 통제 된 출혈은 일정한 혈압을 제거하기 위해 또는 일정한 혈압 (고정 압력)을 얻기 위해 혈액 제거에 의해 수행됩니다. 동안se 모델은 출혈성 쇼크의 기전 및 면역 변화의 평가에 유용하며, 지혈제 시험에 적용 가능하지 않으며 외상 후 출혈의 임상 시나리오를 모방하지 않는다. 이 정도면, 우리는 쥐 모델에서 지혈 변화와 응고 인자를 시험 할 수있는 통제되지 않는 출혈 모델을 개발....
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프로토콜
마우스는 특정 병원균이없는 상태에서 피츠버그 대학 (미국 펜실베니아 피츠버그)과 미국 국립 보건원 (NI, 베데스다, MD, 미국) 동물 보호 지침에 따라 12 시간의 명암 사이클과 자유 접근 표준 사료 및 물. 모든 동물 실험은 피츠버그 대 (University of Pittsburgh)의 동물 연구 및 관리위원회 (Animal Research and Care Committee)가 정한 지침에 따라 승인되고 실시되었습니다.
1. 외과 분야 및기구 설정
- 수술 전에 모든 수술기구, 봉합사, 거즈, 면봉 어플리케이터, 튜빙 및 튜빙 커넥터를 소독하십시오.
- 외과 용기구, 봉합사, 거즈 및 면봉 어플리케이터를 오토 클레이브에서 소독하십시오. 에틸렌 옥사이드로 튜빙 및 튜빙 커넥터를 소독하십시오.
- 수술 분야
- 물 순환 가열 패드를 켜고 37 ° C로 설정하십시오. 외과 의사를 배치하십시오.칼 파란색 패드를 그 위에 올려 놓고 외과 용 파란색 패드 위에 멸균 드레이프를 놓습니다.
- 멸균 드레이프 위에 모든 멸균 도구를 엽니 다. 이 단계에서 멸균을 피하기 위해 멸균 장갑을 사용하십시오. <....
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결과
간 열상 모델은 생쥐에서 재현성 있고 일관된 출혈을 초래합니다. 그림 1A 는 0.02 g 표준 편차로 얻을 수있는 lacerated 간장의 일관된 무게를 보여줍니다. lacerated 간 무게에 일관성이 생쥐와 다른 소생 프로토콜과 같은 다른 실험 설정에서 모델을 재현하는 기능을 허용합니다. 뿐만 아니라 표준 오차가 0.01g 인 열상 간암의 재현 가능한 무게는 동물 모델에서 얻기가 어려운 통제되지 않은 출혈에 대한 표준 모델을 제공합니다.
모델에서 다른 치료 프로토콜의 출혈 효과의 유효성 확인은 그림 1B 에 나와 있습니다. 마우스는 헤파린 (혈액 손실에 대한 양성 대조군으로서 66 단위), 또는 항 섬유소 용해성, 트라 넥 삼산 (TXA)으로 전처리되었다음성 대조군.......
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토론
여기에 설명 된 쥐 간 열공 모델은 제어 할 수없는 출혈의 안정적이고 일관된 모델을 제공합니다. 이 모델은 수행하기 쉽지만 세심한 고려가 필요한 중요한 단계가 있습니다. 이 모델의 가장 기술적으로 어려운 부분은 혈역학 모니터링과 유체 / 약물 투여를위한 대퇴 혈관의 삽입입니다. 신경의 해부 및 동맥 절개 / venotomy 동안주의를 기울여야합니다. 특히 생존 모델의 경우 신경 마비와 가능한 마비를 피하기 위해 혈관 절개시 신경을 만지지 않는 것이 중요합니다. 동맥 절개 및 venotomy는 선박의 섬세한 취급을 필요로합니다. 우발적 인 혈관 횡단을 방지하기 위해 미세 혈관 가위의 사용을 권장합니다.
간 열상이 기술적으로 어렵지는 않지만 재현성 있고 일관된 출혈을 보장하기 위해서는 모델 부분에서 일관성을 유지하는 것이 중요합니다.마우스. 우리의 모델은 인공 호흡 보조제를 인공 호흡기로 시험 할 목적으로 개발되었으므로 중요한 배치 고려 사항은 포장 또는 기계적 지혈 효과를 피하.......
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공개 사항
저자는 선언 할 재정상의 경쟁 이익이 없습니다.
감사의 글
이 원고의 작업은 Hemostasis and Vascular Biology (P3HVB)의 Vascular Medicine Institute 파일럿 프로젝트 프로그램과 AAST Research Fellowship에서 닐 박사에게 자금을 지원하여 지원되었습니다. 이 연구는 R35 GM119526-01 및 UM1HL120877-01의 미국 국립 보건원 연구비 지원에 의해 지원됩니다.
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재료
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| 수술용 가위 | Fine Science Tools | 14068-12 | |
| 지혈 Fine | Science Tools | 13009-12 | |
| microscissors | Fine Science Tools | 15000-08 | |
| 0.8 mm 곡선 집게 | Fine Science Tools | 11009-13 | |
| 봉합사 릴 6-0 | Fine Science Tools | 18020-60 | |
| 봉합사 4-0 실크(바늘 포함 | Owens Minor | K188H | |
| 거즈 4 x 4 | 모든 글로벌 공급업체 | ||
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참고문헌
- Chang, R., Cardenas, J. C., Wade, C. E., Holcomb, J. B. Advances in the understanding of trauma-induced coagulopathy. Blood. 128 (8), 1043-1049 (2016).
- Kutcher, M. E., et al. A paradigm shift in trauma resuscitation: evaluation of evolving massive transfusion practices. JAMA surgery. 148 (9), 834-840 (2013).
- Tsukamoto,....
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