이 프로토콜은 고립 된, 관류 쥐 심장에서 심장 간질 유체를 수집하는 방법을 설명합니다. 관상 정맥 유출 물 관류 액으로부터 간질 혈관 유출 물을 물리적으로 분리하기 위해 관류 액 Langendorff가 반전되고 심장 표면에 형성된 유액 (간질 액)이 부드러운 라텍스 캡을 사용하여 수집됩니다.
이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.
방법 논문
고립 된 랫트 심장으로부터의 간질과 투과 물 수집을위한 역전 된 심장 모델
* These authors contributed equally
이 논문에서
요약
초록
현재의 프로토콜은 고립 된, 염분 - 관류 쥐 심장에서 심장 transudate (CT)의 수집을 가능하게 독특한 접근 방식을 설명합니다. Langendorff 기술에 따라 심장의 격리 및 역류 관류 후 심장은 거꾸로 된 위치로 거꾸로 뒤집히고 좌심실에 삽입 된 풍선 카테터로 기계적으로 안정화됩니다. 그런 다음 얇은 라텍스 캡 (이전에 랫트 심장의 평균 크기와 일치하도록 캐스트)이 심 외막 표면 위에 배치됩니다. 라텍스 캡의 배출구는 실리콘 튜브에 연결되어 있으며, 심장의 기저부 아래 10cm 떨어진 원위 구멍이있어 약간의 흡입력을 생성합니다. 심 외막 표면에서 지속적으로 생성 된 CT는 추후 분석을 위해 얼음 냉각 바이알에 수집됩니다. 관상 동맥 정맥 유출 물 관류 액의 0.1-1 %를 차지하는 대조군과 경색 심전도에서 CT 생성 속도는 17 ~ 147 μL / min (n = 14)이었다. 프로테옴 분석 및 높은 perfo액상 액체 크로마토 그래피 (HPLC)는 수집 된 CT가 넓은 범위의 단백질과 푸린 일 대사 산물을 함유하고 있음을 보여주었습니다.
서론
심장 마비 (HF)는 전 세계적으로 인간의 주요 사망 원인입니다 1 . HF는 심근염, 허혈성 심근 손상, 좌심실 재 형성으로 인해 종종 발생하며 심장 수축 기능 및 환자의 삶의 질이 점진적으로 악화됩니다. 심장학 및 심장 수술의 진보가 HF 사망률을 현저히 낮추었지만, 심각한 병적 상태를 수반하는 불가피하게 진보적 인 질병 과정의 일시적인 지연 기 (delayers)로 작용할뿐입니다. 따라서 현재 유효한 치료법이 부족하여 HF를 예방하거나 심지어 역전시킬 수있는 새로운 분자 표적을 확인해야 할 필요성이 강조됩니다. 여기에는 세포 외 기질의 변화, 조절되지 않은 심장 면역 반응, 심장 및 비 - 심장 세포 간의 상호 작용이 포함됩니다 2 .
심장 세포가 direc에 노출되는 미세 환경부상당한 심장의 면역 및 재생 반응을 형성합니다. 격리 된 식염수 - 관류 심장에서 CT는 생리 및 병태 생리 조건 3 , 4 , 5 모두에서 간질 유체 공간 ( 즉, 미세 환경)에서 파생 된 ....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
프로토콜
모든 실험은 현지 규제 기관 ( LANUV of Nordrhein-Westfalen, Germany)의 승인을 받아 동물 용 지침에 따라 수행되었습니다. 동물에게 표준식이 요법을 공급하고 수돗물을 자유롭게 섭취 하였다. 실험의 각 단계에 필요한 모든 장비 및 화학 물질은 Table of Materials에 나와 있습니다.
1. 라텍스 캡과 심실 내 풍선의 준비
- 쥐 심장 (300-350g의 몸무게)의 평균 크기와 일치하는 밀링 머신을 사용하여 알루미늄 몰드를 만드십시오. 극 미세 (10/0) 에머리 종이로 곰팡이를 연마하십시오.
참고 : 몰드의 상세한 메트릭은 그림 1A에 나와 있습니다. - 알루미늄 몰드의 목 부분을 밀링 기계에 수직으로 고정하여 라텍스 캡을 준비하십시오.
참고 : 밀링 머신은 금형을 천천히 회전시킵니다. 대안으로, 전기 모터가 사용될 수있다. li> - 50 mL 유리 비이커에 20 mL의 액체 라텍스 (상업적으로 구입, 재료 표 참조)를 붓습니다.
- 주형의 전체 몸체가 라텍스 ....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
결과
반전 심장 모델은 격리 된 재관류 된 래트 심장 ( 그림 1A -C )에서 심장 간질 전달체의 수집을 가능하게합니다. 100 cmH 2 O의 일정한 압력에서 관류 할 때, 간질 유체 형성 속도는 고립 된 심장에서 관상 동맥 정맥 유출 물의 0.1-1 %에 해당하는 17 ~ 147 μL / min 범위였다.
CT의 단백질 함량은 bicinchoninic acid (BCA) 분석으로 측정했을 때 1.08 ± 0.40 mg / mL (n = 6) 인 것으로 나타났습니다. 일차원 겔 전기 영동 분석 (SDS-PAGE)은 심장 투과액에 존재하는 광범위한 단백질을 나타냅니다 ( 그림 2A ). 허혈 / 재.......
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
토론
반전 심장 모델은 잘 확립 된 Langendorff 심장 관류 기술 12를 기반으로하며, 심장을 거꾸로 뒤집은 상태로 고정시키고 견고한 심실 내 풍선 카테터를 사용하여이 위치를 유지함으로써 수행됩니다. 이러한 방법으로 심장 간질 누출은 관상 정맥 유출 물 관류 액으로부터 물리적으로 분리되어 심장의 기저부로부터 중력에 의해 떨어질 수있다. CT는 전체 심장 표면에 놓인 얇고 유연한 라텍스 캡을 사용하여 지속적으로 수집 할 수 있습니다.
이 방법은 Langendorff 장치의 비용 외에도 최소한의 비용으로 쉽게 수행 할 수 있습니다. 그럼에도 불구하고 일부 단계는 기술적으로 재현 가능하고 안정적인 결과를 얻기 위해 중요합니다. 여기에는 라텍스 캡이 심장의 모양에 적절하게 맞춰지고 심방의 표면의 약 90 %가 커버되며 안면이 커버되지 않습니다. 시간에서 exc연장 된 허혈은 심장 신진 대사를 변화시키고 심장 투과의 형성 위험을 감수하면서 .......
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
공개 사항
저자는 경쟁적인 금전적 이해 관계가 없다고 선언합니다.
감사의 글
이 연구는 NSFC 81570244, FoKo 23/2013 및 SFB 1116 / B01 및 뒤셀도르프 심혈관 연구소 (CARID)가 자금을 지원했습니다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 라텍스 솔루션 | ProChemie | Z-Latex LA-TZ | http://kautschukgesellschaft.de/%E2%80%A8z-latex-la-tz |
| 알루미늄 금형 | 홈 메이드 | - | 리버스 하트 모델 |
| 범용 오븐 | Memmert | UNB 400 | 리버스 하트 모델 |
| 라텍스 풍선 | 휴고 삭스 | 사이즈 4 | 리버스 하트 모델 |
| 밀링 머신 | Proxxon | MF70 | 역 심장 모델 |
| 염화나트륨 | 시그마 | SZBD0810V | 화학 물질 |
| 탄산수소 | 나트륨 로스 | 68852 | 화학 물질 |
| 염화칼 | Merck | 49361 | 화학 물질 |
| 황산 마그네슘 헵타 하이드레이트 | Merck | 58861 | 화학 물질 |
| 인산 이수소 | 칼륨 Merck | 48731 | 화학 물질 |
| D (+) - 포도당 무수 | Merck | 83371 | 화학 물질 |
| 염화칼슘 이수화물 | Fluka | 21097 | 화학 물질 |
| 저울 | VWR | SE 1202 | 계량 화학 물질 |
| 이중 증류수 | Millpore | - | 용해 화학 물질 |
| 의료 압력 변환기 | Gold-Langendorff | 장치 | |
| 의료 플로우 프로브 | 천음속 | 3PXN | Langendorff 장치 |
| 가열 순환 욕조 | Haake | 나3 ; DC1 | Langendorff 장치 |
| 실험실 및 진공 튜브 | Tygon | R-3603 | Langendorff 장치 |
| 동물 연구 유량계 | Transonic | T206 | Langendorff 장치 |
| PowerLab 데이터 수집 장치 | AD 기기 차트 | 7.1 | Langendorff 장치 |
| LabChart 데이터 수집 소프트웨어 | AD 기기 | 차트 7.1 | Langendorff 장치 |
| 연동 펌프 | Glison | MINIPULS 3 | Langendorff 장치 |
| 유리 물 기둥 | 집에서 만든 | - | Langendorff 장치 |
| 수조 보호제 | VWR | 462-7000 | Langendorff 장치 |
| 멸균 일회용 필터 (0.2 µ m) | Thermo Scientific | 595-4520 | Langendorff 장치 |
| 혈액 가스 분석기 | 라디오미터 | ABL90 FLEX PLUS | 가스 분석기 |
| 70% 에탄올 | VWR UN1170 | 청소 튜빙 | |
| 100% 에탄올 | Merck | 64-17-5 | 클리닝 튜빙 |
| Wistar Rats | Janvier-Animals | ||
| 스테인리스 가위 | AESCULAP | BC702R | 수술 기구 |
| 스테인리스 가위 | AESCULAP | BC257R | 수술 기구 |
| 큰 집게 | AESCULAP | - | 수술 기구 |
| 8m/m 스테인리스 집게 | F.S.T | 11052-10 | 수술 기구 |
| 극상(10/0) 에머리 종이 | 3M | 051111-11694 | 역 심장 모델 |
참고문헌
- Henkel, D. M., Redfield, M. M., Weston, S. A., Gerber, Y., Roger, V. L. Death in heart failure: a community perspective. Circ Heart Fail. 1 (2), 91-97 (2008).
- Limana, F., et al. Myocardial infarction induces embryonic reprogrammi....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재인쇄 및 허가
