구슬 눈물 Cytokine 프로 파일의 분석에 대 한 다중 분석 결과 기반으로

요약

눈물 영화 cytokines의 분석은 다양 한 안구 질환을 공부에 도움이 됩니다. 비드 기반 다중 분석 간단 하 고 민감한 고 작은 볼륨으로 샘플에서 여러 대상의 테스트를 활성화. 우리가 눈물 영화 cytokine 사용 하 여 프로 파일링에 대 한 프로토콜을 설명 하는 여기 비드 다중 분석 결과 기반으로.

초록

눈물 영화 윤 활, 영양 및 원본 셀에 대 한 보호를 제공 하는 눈의 외부 표면을 커버 하는 지질, 단백질과 미네랄의 복잡 한 혼합물 이다. 눈물의 분석 예측, 진단, 및 각종 눈 질병의 예 후에 대 한 생체의 식별에 대 한 신흥 지역 이다. 눈물은 쉽게 접근할 수 있는 하 고 그들의 컬렉션은 비 침략 적 이다. 따라서, 발전 기술 여러 analytes 단백질 또는 대사 산물 구성과 연관의 병 적인 조건에 변화를 공부 하는 눈물에서의 식별에 대 한 굴지를 얻고 있다. 눈물 cytokines 안구 표면 상태를 공부에 대 한 이상적인 생체 이며 또한 건조 눈 질병 및 vernal 결막염 같은 다른 안구 표면 질환의 메커니즘을 이해에 도움이. 비드 기반 다중 분석 실험의 높은 감도와 적은 양의 샘플에서 여러 analytes를 감지 기능이 있다. 우리가 눈물 샘플 컬렉션의 표준화 된 프로토콜을 설명 하는 여기, 추출 및 cytokine 구슬을 사용 하 여 프로 파일링 분석 기반 다중 분석 결과.

서론

눈물 눈물 동맥 액세서리 땀 샘에 의해 생산 하 고 눈의 외부 표면 코트. 눈물 영화 외부 지질 층 및 수용 성 단백질을 포함 하는 내부 수성 층의 구성, mucins과 막 바인딩된 mucins. 눈물 미생물 침입 방지, 영양분을 공급 하 고 눈 표면에 윤 활을 제공 합니다. 눈물은 공기와 각 막에 산소 수송을 위한 조직 간의 인터페이스 역할을 합니다. ¹ 눈물 영화 단백질, 탄수화물, 지질, 전해질의 구성 되어 있습니다. 눈 및 조직의 질병 눈물 단백질 사이 협회 같은 당뇨병 mellitus, vernal 결막염, 건조 한 눈 질환, 녹 내장, 갑 상선 관련 orbitopathy 및 암 여러 연구에서 발견 되었습니다. ^{2 , 3 , 4} 눈물 샘플을 microcapillary 관에 의해 수집 될 수 있습니다 또는 눈물 흐름 스트립 (Schirmer 스트립). 또한, Schirmer의 시험 각 막 굴절 수술 클리닉, cytokine 분석 분석 실험의 결과 사용할 수 있습니다에서 수행 하는 표준 절차입니다. 비-침략 적 샘플 컬렉션, 생물 표본의 접근성 및 다양 한 생리 및 병리학 조건 ....

프로토콜

이 연구에 사용 되는 프로토콜 탄 딱 셍 병원, 싱가포르의 기관 검토 위원회에 의해 승인 했다.

1. Cytokine 분석 눈물

1. 눈물의 컬렉션:
   1. 주제는 검사의 자에 편안 하 게 앉아 고 머리 받침에 대 한 자신의 머리를 물어.
   2. 주제 조회, 신중 하 게 (Whatman 여과 지 no. 41의 만든) Schirmer 스트립을 열고 및 스트립의 둥근된 끝에 눈의 열 등 한 fornix 놓고 5 분 동안 눈을 지시를 요구 하십시오. 수집 하는 동안 눈물 눈 표면 접촉을 최소화 하기 위해 주의 걸릴. ³⁰
   3. 스트립을 제거 하 여 살 균 1.5 mL microcentrifuge 튜브에 자신의 눈을 열어 주제 요청. 즉시 전송 튜브 실험실 또는 상점에서-80 ^o C cytokine 프로 파일링 테스트까지.
2. 눈물 흐름 스트립에서 눈물 샘플의 차입:
   1. 눈물 흐름 스트립 (표준화 테스트할 눈물의 양)을 0.5 c m의 길이로 잘라 멸 균 1.5 mL microcentrifuge 튜브에.
   2. 추가 30 µ ....

결과

눈물 샘플 눈물 흐름 스트립을 사용 하 여 4 건강 한 주제의 8 눈에서 수집 된 고 cytokine 레벨 위에서 언급 한 프로토콜을 사용 하 여 분석 했다. 모든 과목은 남성 및 4 명의 과목의 연령은 36, 42, 44, 52 년 각각. 안구 표면 상태 및 건조 눈 질병에 따라 임상 시험 (눈물 영화 휴식 시간, Schirmer의 시험, 각 막 얼룩, conjunctival 얼룩, 뚜껑/meibomian 동맥 검사, 각 막 눈물과 시각적 표시 증상과)에 의해 평가 되었다는 국제 건조 눈 워크숍, 2007 지침 및 과목의 어떤 징후와 건조 안과 질환의 증상을 보여주었다. ³¹

분석 41 cytokines에서 31 cytokines에에서 검색 된 모든 눈물 샘플, IL-17A, MIP 1β 및 TNF-α에서에서 발견 되었.......

토론

Cytokines는 작은 세포 분 비 단백질 면역 반응을 조절 하는 강력한 면역 변조기. ³² 눈물 샘플 눈과 프로필 질병 pathogenesis의 메커니즘을 이해, 눈 건강의 상태를 확인 하는 데 도움이 cytokine에 대 한 연구의 다양 한 병 적인 조건에 관련 된 다양 한 cytokines의 식 프로필 질병의 심각도, 진단 및 진행입니다. ^{2 , 5} 더 낮은 단백질 농도 및 작은 샘플 볼륨 눈물 cytokine 단면도의 분석에 대 한 같은 ELISA 분석 실험의 사용을 제한 하는 전통적인 방법의 주요 과제는. ³³ 비드 기반 다중 분석 ELISA에 비해 뚜렷한 장점이 있는 immunoassays는. 비드 기반 다중 분석 여러 analytes의 분석에 대 한 작은 샘플 볼륨을 요구 하 고 매우 민감한, 생물 학적 체액에서 단백질의 pi.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Milliplex MAP 인간 사이토카인 / 케모카인 자기 비드 패널 -1 키트	Merck, USA	HCYTOMAG-60K-41
Flexmap 3D luminex 기기	Luminex Corp, 미국
xPonent 소프트웨어	Luminex Corp, 오스틴, 텍사스, 미국
RBX발전기 소프트웨어	BIO-RAD, 프랑스
Bio-Plex Manager 6.1	BIO-RAD, 프랑스
플레이트 셰이커	코닝, 미국
TECAN Microplate Washer	Tecan, 스위스	HydroSpeed
Vortex Genie 2	Scientific Industries Inc, 미국	G560E
피펫	Mettler Toledo, CA, USA
1.5ml 마이크로 원심분리기 튜브	Axygen, USA	MCT-150-C
Schirmer 눈물 흐름 테스트 스트립	Eye Care and Cure, USA	101657
Flexmap 3D Calibration Kit	Luminex Corp, Austin, TX, USA	40-028
Flexmap 3D Verfication Kit	Luminex Corp, Austin, TX, USA	40-029
안구 검사 의자

텍사스주 오스틴