Murine 콜린 불충분 한, Ethionine 보충 (CDE) 다이어트 만성 간 상해의 모델

Jully Gogoi-Tiwari; Julia Köhn-Gaone; Corey Giles; Dirk Schmidt-Arras; Francis D. Gratte; Caryn L. Elsegood; Geoffrey W. McCaughan; Grant A. Ramm; John K. Olynyk; Janina E.E. Tirnitz-Parker

doi:10.3791/56138

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방법 논문

Murine 콜린 불충분 한, Ethionine 보충 (CDE) 다이어트 만성 간 상해의 모델

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DOI:

10.3791/56138

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2017년 10월 21일

Jully Gogoi-Tiwari¹ , Julia Köhn-Gaone¹ , Corey Giles² , Dirk Schmidt-Arras³ , Francis D. Gratte¹^,⁴ , Caryn L. Elsegood¹ , Geoffrey W. McCaughan⁵^,⁶^,⁷ , Grant A. Ramm⁸^,⁹ , John K. Olynyk¹⁰^,¹¹ , Janina E.E. Tirnitz-Parker¹^,¹²

¹School of Biomedical Sciences & Curtin Health Innovation Research Institute, Curtin University, ²School of Public Health & Curtin Health Innovation Research Institute, Curtin University, ³Institute of Biochemistry, Christian-Albrechts-University, ⁴School of Veterinary and Life Sciences, Murdoch University, ⁵Centenary Institute of Cancer Medicine and Cell Biology, The University of Sydney, ⁶Royal Prince Alfred Hospital, ⁷A.W. Morrow Gastroenterology and Liver Centre, ⁸QIMR Berghofer Medical Research Institute, ⁹Faculty of Medicine and Biomedical Sciences, The University of Queensland, ¹⁰Fiona Stanley and Fremantle Hospitals, ¹¹School of Medical and Health Sciences, Edith Cowan University, ¹²School of Medicine and Pharmacology, University of Western Australia

이 논문에서

요약

여기는 콜린 결핍 및 ethionine 보충 (CDE) 다이어트의 먹이로 쥐에 만성 간 상해를 유발 하는 일반적인 방법에 설명 합니다. 상태 모니터링, 간 관류, 절연 및 보존 설명합니다. 6 주 시간 코스 간 부상, pathohistology, 섬유 증, 염증, 간 조상 세포 응답에 대 한 알릴 수 있다.

초록

만성 간 질환, 바이러스 성 간염, 알코올 성 간 질환, 비 알코올 지방산 간 질환 등 지속적인 염증, 진보적인 파괴 및 간 실질, 간 조상 세포의 재생을 특징으로하는 확산, 그리고 섬유 증입니다. 모든 만성 간 질환의 말기 간 경 변, 간세포 암 종 개발을 위한 주요 위험 요소 이다. 공부 하 고 규제 하는 질병 개시, 설립, 및 진행 하는 프로세스, 여러 동물 모델에서에서 사용 됩니다. 여기는 콜린 결핍 및 ethionine 보충 (CDE) 마우스 모델의 불충분 한 콜린 차 우와 0.15% DL ethionine 보충 하는 식 수와 6 주 오래 된 남성 C57BL/6J 쥐 먹이 포함 6 주 시간 과정에 설명 합니다. 동물 건강 및 일반적인 몸 무게 손실 곡선의 모니터링은 설명 했다. 프로토콜 이후 혈 청 분석에 대 한 심장 찔린 하 여 CDE 취급 간 및 혈액 컬렉션의 총 검사를 보여 줍니다. 다음, 간 관류 기술과 표준 평가 대 한 다른 간 엽의 컬렉션은 포함 하 여, 표시 간 조직학 평가 되며 고 오신 또는 시리우스 레드 stainings, 간 세포 인구의 immunofluorescent 검색 뿐만 아니라 transcriptome 간 microenvironment의 프로 파일링. 이 마우스 모델은 염증 성 공부, fibrogenic, 및 간 조상 세포 역학 만성 간 질환을 통해 유도 하 고 테스트 이러한 프로세스 조절 수 있습니다 잠재적인 치료 에이전트를 사용할 수 있습니다 적합 합니다.

서론

간 본문의 가장 큰 선 대사 기관 이며 많은 복잡 한 기능을가지고 있다. 간장에 대 한 주요 역할 소화, 대사, 해독, 혈액 플라스마 단백질 구성 요소 및 주민 대 식 세포 또는 Kupffer 세포 중재 면역의 생산 필수 영양소의 저장 포함 됩니다. 간 최대 총 질량의 70-90% 손실 됩니다 경우에 재생성 중대 한 기능이 있다. 급성 간 상해의 경우 본 부분 hepatectomy 또는 아 세트 아미노 펜 중독, 다음과 같은 높은 조정된 프로세스¹에 손상을 복구 하 나머지 건강 한 hepatocytes 확산. 그러나,는 hepatocytes 만성 장기 바이러스 감염, 알코올 또는 무알코올 지방 간 질병, 부상 하는 염증 성 microenvironment 트리거 섬유 증 운전 간장 방사상 세포의 활성화와 cholangiocytes 또는 hepatocytes²^,³^,^,⁴⁵으로 차별화 하는 잠재력을 가진 간 조상 세포 (LPCs)의 확산. 정확한 기원을 LPCs, 간 재생, 그리고 hepatocarcinogenesis에 그들의 공헌의 분화 운명 강렬한 토론의 주제 그리고 가장 가능성이 부상 심각도 및 컨텍스트²에 따라 달라 집니다. 초기 재생 관련 이벤트의 순서는 또한 논쟁 적으로 토론, 간장 방사상 세포 활성화 및 매트릭스 리 모델링은 LPC 선호 틈새⁶, 다른 사람들의 세대에 대 한 필수적인 몇 가지 조사와 보고서 LPC 확장 및 소위 Ductular 반응 트리거 fibrogenesis⁷필요 됩니다. 질병의 진행을 조절 하는 모든 기본 요소를 이해 하 고 궁극적으로 환자⁸에 대 한 새로운 치료 전략을 개발 하는 시도에 상해 및 재생의 특정 측면을 연구 하는 수많은 동물 모델을 확인 하 고 있습니다.

콜린 결핍 및 ethionine 보충 (CDE) 식이 모델 원래 쥐에 사용 하기 위해 개발 되었고 나중 쥐⁹^,¹⁰만성 간 부상 유도 대 한 수정. 콜린의 식이 결핍 결과 장애인된 어셈블리 및 아주 저밀도 지 단백질의 분 비. DL-ethionine hepatocarcinogen와 결합,이 처방 리드 로드, 지속적인 염증, 섬유 증 periportal, LPC 응답 과도 한 간 지방 및 간세포 암 개발¹¹^,^{12 장기}. 그러나 다른 마우스 긴장 염증, fibrogenic 및 LPC의 특유 한 본을 전시 하는 중요 한 것은,, 응답 역학¹³. 이 프로토콜 만성 간 부상 감 응 작용에 가장 일반적으로 사용 하는 C57BL/6J 쥐 근 친 마우스 변형을 설명합니다.

만성 간 질환 연구, 일반적인 분석 포함 되며 오신 뿐만 아니라 시리우스 레드 얼룩 콜라겐 증언, immunohistochemical, 또는 간장 세포 인구의 immunofluorescent 탐지를 시각화 하 여 조직학 평가 그리고 복잡 한 성장 인자와 사이토카인 네트워크¹⁴^,¹⁵^,^,¹⁶¹⁷ 를 통해 유도 세포 변화를 총괄 하는 간 microenvironment의 transcriptomic 분석 ^, ¹⁸.