Method Article

샘플 추출 및 독 소 루비와 미토마이신 C 다음 약물 조합을 전달 나노 입자에 종양 방위 쥐의 동시 크로마 정량

DOI:

10.3791/56159

⸱

October 5th, 2017

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pharmaceutical Sciences, University of Toronto, 2Departments of Medical Biophysics and Radiation Oncology, University of Toronto, Ontario Cancer Institute, University Health Network

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

이 프로토콜에 설명 합니다 샘플 추출의 효율적이 고 편리한 분석 프로세스와 여러 약물, 독 소 루비 (DOX), 미토마이신 C (MMC) 및 심장 독성 DOX 대사 산물, doxorubicinol (DOXol), 생물학에서의 동시 결정 전 임상 유 방 종양 모델에서 샘플 시너지 약물 조합의 나노 제형으로 치료.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

조합 화학요법은 자주 사용 병원에서 암 치료; 그러나, 정상 조직에 관련 된 불리 한 효과 치료 혜택을 제한할 수 있습니다. 나노 기반 약물 조합 무료 약 조합 치료에 의해 발생 하는 문제를 완화 하기 위해 표시 되었습니다. 우리의 이전 연구는 그 두 항 암 약물, 독 소 루비 (DOX) 및 미토마이신 C (MMC)의 조합, 두 murine에 대 한 시너지 효과 생산 하 고 인간의 유방암 세포 생체 외에서. DOX 및 MMC 공동 로드 폴리머-지질 하이브리드 나노 입자 (DMPLN) 다양 한 경과 전송 펌프 multidrug 저항 및 유 방 종양 모델에 설명 된 향상 된 효능을 부여 하는 무시 됩니다. 기존의 솔루션 형태에 비해, DMPLN의 이러한 우수한 효능 DOX 및 MMC nanocarrier pln.로 활성화 하는 종양 세포 내 생체 이용률 증가 세포내 약물의 동기화 된 약물 동력 학에 기인 했다

약 동학 및 바이오-분포의 평가를 공동 관리 DOX 및 MMC 무료 솔루션에 나노 형태, 역 상 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC)는을 사용 하 여 간단 하 고 효율적인 다중 약물 분석 방법 개발. 달리는 플라즈마에 DOX 또는 MMC를 개별적으로 분석 하는 방법에 대 한 이전에 보고 된,이 새로운 HPLC 방법은 동시에 quantitate DOX, MMC 및 주요 심장 독성 DOX 대사 산물, 다양 한 생물 학적 행렬 ( 에서에서 doxorubicinol (DOXol), 수 예를 들어, 전체 혈액, 유 방 종양, 및 심 혼). 이중 형광 및 자외선 흡수 성 조사 4-methylumbelliferone (4-무) 다른 검출 파장 다중 약물 분석의 단계 검출을 위한 내부 표준 (윙하)으로 사용 되었다. 이 방법은 성공적으로 DOX 및 MMC 전체 혈액에 나노와 솔루션 접근 및 orthotopic 유 방 종양 murine 모델에서 다양 한 조직에 의해 전달의 농도 결정 하기 위해 적용 되었습니다. 제시 하는 분석 방법 약물 조합 중 나노 기반 배달의 전 임상 분석을 위한 유용한 도구입니다.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

아직 그것은 종종 심각한 부작용 및 약물 저항으로 인해 제한 된 효능 및 다른 요인1,2,3관련 된 화학 요법 많은 암에 대 한 기본 치료 양식 적임 이다. 화학 요법의 결과 개선 하기 위해, 약물 조합 regimens 겹치지 독성, 약물 행동, 그리고 크로스 비 약물 저항4,5 의 다른 메커니즘 같은 고려 사항에 따라 병원에 적용 된 , 6. 임상 시험에서 더 나은 종양 응답 속도 종종 관찰 되었다 약물 조합을 순차적 마약 배달7,8의 처방에 비해 관리 동시에 사용 하 여. 그러나, 무료 약물 형태 중 최적의 바이오-분포, 인해 여러 약물의 동시 주입 치료 효과9,,1011를 능가 하는 저명한 정상 조직의 독성을 발생할 수 있습니다. Nanocarrier 기반 약물 전달 약 동학 및 바이오-캡슐화 된 약물, 종양을 대상으로 축적12,,1314강화의 배포 변경 표시 되었습니다. 우리의 최근 기사에서 검토 한 결과, 나노 공동 시너지 약물 조합 로드은 설명 했다 때문에 그들의 통제 시간적 및 공간적 공동 배달의 무료 약물 조합에 의해 발생 하는 문제를 완화 하는 기능 종양 조직에 여러 약물,4,,1516세포 암에 대 한 시너지 약물 효과 활성화. 그 결과, 우수한 치료 효능 및 낮은 독성 두 전 임상 및 임상 연구4,,1718에서 입증 되었습니다.

우리의 이전 체 외에 연구 발견 두 항 암 약물, 독 소 루비 (DOX) 및 미토마이신 C (MMC), 조합의 여러 유 방 암 세포 라인에 대 한 시너지 효과 생산 하 고, 또한, 공동 DOX 및 MMC 내에서 로드 폴리머-지질 하이브리드 나노 입자 (DMPLN) 다양 한 다중 약물 내성 관련된 경과 펌프 (예: P-당단백질과 유 방 암 저항 단백질)19,,2021극복. Vivo에서, DMPLN에 활성화 DOX 및 종양 사이트 MMC의 공간 일시적인 공동 배달 암 세포 내에서 약물의 증가 생체 이용률 DOX 대사 산물 doxorubicinol (DOXol)22의 형성의 검토에 의해 표시 된 대로. 결과적으로 DMPLN 종양 세포 apoptosis, 종양 성장 억제, 그리고 장기간된 호스트 생존 DOX 및 MMC 조합 또는 자주 DOX 배합22,,2324, 무료에 비해 향상 된 25.

공동는 nanocarrier에 의해 전달 하는 약물의 실제 금액을 분석 하는 것이 효과적인 나노 제형 설계에 대 한 중요 합니다. 많은 방법이 플라스마 수준 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC)만 사용 하 여 단일 DOX 또는 MMC 복용량의 또는 질량 분석 (MS)26,,2728 와 함께에서 분석 하도록 개발 되었습니다. , 29 , 30 , 31 , 32 , 33 , 그러나 34., 이러한 방법 들은 시간과 조합 치료에 대 한 허무로 많은 수의 생물 학적 샘플 (때로는 약물 대사 산물 등) 여러 약물의 분석을 위해 별도로 준비를 해야. DOX 및 MMC의 강한 플라스마 단백질 바인딩 뿐만 아니라 붉은 혈액 세포는 또한 바인딩 많은 항 암 약35,36집중 하 큰 용량을가지고. 따라서, 플라즈마 분석 DOX 또는 MMC에 대 한 실제 혈액 약물 농도 난독 처리할 수 있습니다. (그림 1) 현재 작업에 설명 합니다 간단 하 고 강력한 동시에 추출 하 고 quantitate DOX, MMC 및 전체 혈액 및 다양 한 조직 ( DOX 대사 산물 doxorubicinol (DOXol) 역 상 HPLC를 사용 하 여 여러 약물 분석 방법을 예를 들어, 종양). 그것은 성공적으로 적용 되었다는 orthotopically에는 약 동학 및 바이오-DOX 및 MMC의 분포 뿐만 아니라 무료 솔루션 또는 나노 형태 (즉, DMPLN 및 자주 DOX)를 통해 약물 전달 후 DOXol의 형성을 결정 하 정 맥 (i.v.) 후 murine 유 방 종양 마우스 모델을 이식 주입22.

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Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

모든 동물 실험 동물 관리 위원회의 대학 건강 네트워크 온타리오 암 연구소에 의해 찬성 하 고 캐나다 위원회 동물 관리 지침에 따라 실시 했다.

1. 생물학 견본 준비

  1. 전체 혈액, 주요 기관, 수집 하 고 포함 하는 약물의 정 맥 (i.v.) 관리 후 정해진된 시간 포인트에서 종양을 유 정립 (예를 들어, DMPLN, 자주 DOX)
    1. 준비 포함 하는 약물 배합 유 방 종양 베어링 마우스 i.v. 주입.
    2. 흡입 가능 2 %isoflurane 밀폐 챔버에 제공 하 여 지정 된 시간-포인트 (예를 들어, 15 분)에서 마우스를 anesthetize.
    3. 마 취 마우스의 뒷면을 통해 지속적으로 공급 하는 2% isoflurane nosepiece는 코를 넣어.
      참고: 마우스 겪 습 깊은 마 취 되도록 부드럽게 대 타 마우스와 어떤 꿈 틀 운동에 대 한 보고의 앞 팔.
    4. 가슴 및 복 부 지역 70% 에탄올을 사용 하 여 철저 하 게 청소 한 다음 heparinized 1 mL 주사기 23 G 바늘을 사용 하 여 깊은 마 취 쥐에 심장 펑크의 터미널 절차 수행.
    5. 레이블이 나트륨으로 전체 혈액 수집 덤플링을 플라스틱 튜브를 살포 하 고 부드럽게 코팅된 덤플링을 튜브 벽의 접촉으로 온다 수집된 전 혈 되도록 튜브 소용돌이. 전체 혈액의 50 µ L의 최소를 수집 합니다. 얼음에 샘플을 항상 유지
    6. 그것을 확보 하 고 복 부 구멍이 위와 집게의 쌍을 사용 하 여 마우스의 흉 곽을 열고 마우스의 모든 4 개의 사지를 테이프. 창 자 쪽으로 이동 하 고 위쪽으로 문맥을 충분히 노출 간 밀어. 혈액의 배수 장치를 위한 포털 정 맥을 잘라.
    7. Perfuse 25g 바늘 10 mL 주사기를 사용 하 여 마음을 통해 차가운 0.9% 염 분의 50 mL와 함께 전체 마우스 몸.
      참고: 포털 혈관에 주사기를 지도 대 한 90 °에 바늘을 벤드.
    8. 소비 기관에는 다음과 같은 순서: 심장, 폐, 간, 비장, 신장. 그런 다음, 마우스의 오른쪽 유 방 지방 패드에 절 개가 위를 사용 하 여 주변 결합 조직에서 유 방 종양을 구분 합니다. 1.5 mL 폴 리 프로필 렌 튜브에 모든 장기를 개별적으로 수집 하 고 신속 하 게 액체 질소에 그들을 동결.
      ​ 참고: 쓸 개는 간에 서 분리.
    9. 나중 HPLC 분석까지-80 ° C 냉동 고에서 4 ° C 및 삭제 조직 전체 혈액 저장.
  2. 추출 DOX, MMC 및 생물 학적 행렬에서 DOXol.
    1. 그리고 모든 냉동된 해 부 조직을 신속 하 게 무게 13 mL 둥근 바닥 원뿔 관으로 그들을 전송. 얼음에 샘플을 유지 가능한 약물 대사 또는 저하를 방지 하려면
    2. 튜브에 1-5 mL의 얼음 세포 세포의 용 해 버퍼를 추가.
      참고: 사용 하는 버퍼의 볼륨 1 g: 5 mL (w/v);의 조직-버퍼 비율에 따라 조직 무게에 따라 달라 집니다. 작은 기관, 심장, 비장, 등에 대 한 비율은 1 g: 2 mL.
    3. 업 다운 스트로크 모션 균질 전기 손 균질 화기를 사용 하 여 18000 rpm의 속도로 얼음에 조직 샘플을 사용 하 여.
      참고: 완료 된 균질 필요 미만 15의 짧은 균질 화 과정의 약 3-5 반복 각 짧은 균질 사이 얼음 냉각 하는 조직 이어서 s.
    4. 증류수 이온된 (DDI) H 2 O, 70% 에탄올, 그리고 DDI H 2 O 사이 상호 오염을 피하기 위해 각 조직 샘플을 균질 화기의 10 m m 톱니 생성기 프로브 세척.
    5. 조직 homogenate 또는 폴 리 프로필 렌 마이크로 원심 튜브 1.5 mL와 5 스파이크에 전체 혈액의 전송 50 µ L µ L를 내부 표준 (윙하) 4-methylumbelliferone (4 무) (2000 ng/mL) 튜브에의.
      참고: 4-무 솔루션 메탄올 여기에 준비 했다.
    6. 전체 혈액 이나 조직 homogenate 포함 된 튜브에 얼음 추출 용 매 추가 250 µ L.
      참고: 추출 용 매로 구성 되어 60% 이기 (ACN)와 40% 염화 아세테이트 (5mm)의 pH를 조정 하는 ph 3.5 = 0.05% 개미 산을 사용 하 여. 1:5 (v/v) 샘플을 사용 하 여: 볼륨 비율을 용 매 추출.
    7. 적극적으로 소용돌이 혼합물 2 분, 10 분 및 다른 미리 냉장된 신선한 마이크로 원심 관으로 표면에 뜨는 피펫으로 200 µ L 4 o C에서 g 포스 x 3000에서 원심 분리기.
    8. Evaporate 상쾌한 빛 으로부터 보호와 질소 가스의 느린 스트림 아래 60 ° C에서.
    9. 얼음 처럼 차가운 메탄올, 30 s 및 다른 5 분의 4 ° C에서 3000 x g에서 원심 분리기에 대 한 적극적으로 소용돌이의 100 µ L 말린된 잔류물을 다시 구성
    10. HPLC 유리병 삽입에는 상쾌한을 전송 하 고 샘플 튜브 사출 autosampler 트레이.

2. 작업 매개 변수 및 HPLC 계측

  1. 일관 재현성 준비 HPLC 이동 상
    1. HPLC 급 H 2 O 졸업된 실린더를 사용 하 여 500 mL를 측정.
    2. HPLC 급 이기 (ACN)는 별도 졸업된 실린더를 사용 하 여의 500 mL를 측정.
    3. 신중 하 게 H 2 O의 500 mL의 각 trifluoroacetic 산 (TFA) (주의)의 0.5 mL를 추가 및 H 2 O의 모바일 단계를 ACN ACN 0.1%를 포함 하 고 TFA, 각각.
      참고: TFA 부식성 이며 독성이 고 실험실 연기 후드 처리 합니다. 모든 용 매 혼합물 상 온에서 준비가.
    4. 0.45 μ m와 나일론 멤브레인 필터를 통해 필터 모바일 단계 기 공 크기와 깨끗 한 HPLC 저수지 병으로 그것을 전송.
  2. DOX, MMC, 및 DOXol 및 윙하 4-무의 동시 검출 설정 HPLC 계측.
    1. 그라데이션 펌프, 드 gasser, 자동 샘플러, 포토 다이오드 배열 검출기와 다중 λ 형광 검출기에 스위치.
    2. 16.5% H 2 O 모바일 단계 구성의 초기 조건 입력 (0.1 %TFA) 83.5 %ACN (0.1 %TFA) (v/v).
    3. 310에 하나씩 두 개의 채널에 UV 검출기를 설정 4-뮤 (윙하)에 대 한 nm와 다른 360에서 mmc nm.
    4. Λ ex에 하나씩 두 개의 채널에 형광 검출기를 설정 / λ em 365/445 = 4-뮤와 λ ex에서 다른에 대 한 nm / λ em = 480 nm/560 nm DOX와 DOXol, 각각.
    5. 한 isocratic 1.0 mL/분의 유량을 설정
    6. 기준선 설립에 대 일 분 동안 실내 온도에 사전 설치 된 역 상 C 18 열 (4.6 mm x 250 m m, 5 µ m) equilibrate.
  3. 약물 (DOX, MMC, DOXol 및 4-무)를 별도 그라데이션 모바일 단계 상태를 사용 하 여.
    1. 자동 샘플러를 사용 하 여 추출 하 고 다시 집중 견본의 주입 15 µ L.
    2. 점차 초기 모바일 위상 조건 변경 (프로토콜 단계 2.2.2 참조) 100 %ACN (0.1 %TFA) 18 분 이상 자동된 그라데이션 펌프를 사용 하 여.
      참고: 분리 과정에서 4 개 채널 (2 개의 UV 흡수 및 2 개의 형광) 표시 동시에 한 약 복합 표시 각 채널 (2.2.3 및 2.2.4 프로토콜 단계 참조).
    3. ACN의 100%를 유지 (0.1 %TFA) 1 분을 1 분 이내 초기 모바일 위상 조건으로 다음 돌아가기
    4. 다시 초기 모바일 단계와 1.5 mL/min의 유량에서 4 분에 대 한 다음 샘플 주입에 대 한 열을 조건.

3. HPLC 유효성 검사

  1. DOX, MMC 및 DOXol, 및 4-뮤 (윙하) 작업 기준 준비.
    1. DOX 및 MMC 마약 가루 (주의)와 신선한 작은 종이 (3 x 3 인치 2) 무게에 4-무의 무게 별도로 1 mg.
      Note 모든 항 암 제 약물 흡입 또는 섭취에 급성 독성 및 생식 세포 변이 일으킬 수 있는 건강 위험으로 간주 됩니다. 그들은 장갑 및 마스크와 함께 신중 하 게 처리 되어야 합니다.
    2. 개별 1.5 mL 새로운 폴 리 프로필 렌 마이크로 원심 튜브로 전송 무게 DOX, MMC 및 4-무.
    3. 추가 meth의 1 mLanol와 DOX 및 MMC의 1 mg/mL 농도를 간단히 소용돌이.
    4. DOXol (주의) 하 고 소용돌이 간단히 DOXol의 1 mg/mL 농도의 사전 무게 1 mg를 포함 하는 유리병에 메탄올의 1 mL을 추가.
      참고: DOXol 심장 독성 대사 산물 이며 신중 하 게 처리 해야 합니다.
    5. DOX, MMC, DOXol 및 4-뮤로는 새로운의 준비 재고 솔루션의 피 펫 20 µ L 1.5 mL 폴 리 프로필 렌 마이크로 원심 튜브를 분리 하 고 각 약물의 20 µ g/mL의 작업 표준을 메탄올의 980 µ L을 추가.
    6. 희석 20 µ g/mL DOX, MMC 및 50의 작업 표준을 얻기 위해 메탄올을 사용 하 여 DOXol의 ng-DOX, MMC, 및 DOXol에 대 한 20 µ g /mL 및 2000 ng/mL 윙하 4-무.
    7. 메탄올 증발 방지, 직접 빛을-20에 게 노출을 피하기 위해 알루미늄 호 일 전체 튜브 포장 파라핀 영화 취재의 좁은 조각 작업 솔루션의 튜브의 뚜껑을 봉인 ° c.
  2. 선형성, 정밀, DOX, MMC 및 생물 학적 행렬 (즉, 전체 혈액 및 종양 homogenate)에 DOXol의 정확도 결정. DOX 및 DOXol의 작업 표준의
    1. 동시에 스파이크 5 µ L (50 ng/mL-20 µ g/mL), MMC (1000 ng/mL-16 µ g/mL), 및 빈 전 혈 또는 폴 리 프로필 렌 마이크로 원심 튜브에서 조직 homogenate의 50 µ L로 4-뮤 (2 µ g/mL) 마약 화합물에 대 한 5-2000 ng/mL 및 4-뮤 (윙하)에 대 한 200 ng/mL에서 배열 하는 표준 농도 곡선을 구하는.
    2. 프로토콜 1.2에서 설명한 약물 추출 분석 결과 수행.
    3. DOX와 DOXol의 낮은, 중간 및 높은 농도 사용 (50, 500, 및 2000 ng/mL) 및 MMC (100, 1000, 2000 ng/mL) 내부와 통해 하루 정밀도 정확도 대 한.
      참고: 신선한 표준 농도 분석 당일 준비.
  3. 샘플의 분석
    1. 자동 샘플러를 사용 하 여 샘플의 주사 15 µ L.
    2. 점차 모바일 단계 0 ~ 18 분 이상, 증가 간격 동안 ACN의 구성 변경.
    3. 후 18 분, 1 분에 대 한 모바일 위상 상태를 개최
    4. 다음 2 분 동안 초기 상태로 반환 다음 다시 다음 주입 하기 전에 4 분 equilibrate.
    5. 각 샘플을 실행 후 다음과 같이 그들의 보존 기간으로 약 화합물의 봉우리 표시 됩니다 참고: MMC, DOXol, 4-뮤 (윙하)와 DOX.
    6. HPLC 소프트웨어를 사용 하 여 약 화합물의 곡선 (AUC)에서 피크 지역 통합.
    7. 개별 약물 화합물 및 윙하 (공식 1) 사이의 AUC 비율을 계산 하 고 동일한 추출 절차에 따라 준비 하는 표준 곡선을 사용 하 여 DMPLN 배합에 DOX, MMC 및 DOXol의 약물 농도 결정.
      figure-protocol-1
    8. 그 아군된 생물 샘플의 추출 물에서 메탄올을 사용 하 여 재구성 하는 약물 농도 비교 하 여 약 복구 비율 (식 2)를 계산 표준 (" 깔끔한 ") 솔루션 메탄올에서 마약.
      figure-protocol-2

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Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

두 항 암 약물, DOX MMC, 뿐만 아니라 DOX 대사 산물, DOXol, 동시에 형광 및 자외선 감지기는 윙하도 4-무를 사용 하 여 동일한 적용 된 그라데이션 HPLC 조건 하에서 어떤 생물 학적 간섭 없이 감지 했다. DOX, MMC, DOXol 및 4-무 잘 보존 시간 mmc 5.7 분, DOXol 위한 10.4 분, 4-뮤, 10.9 분 및 DOX (그림 2)에 대 일 분 서로에서 분리 했다. 전체 혈액에 각 약물 및 다양 한 조직 상관 관계 계수 (R2) 0.98에서 1.00 (그림 3 및 표 1)에 이르기까지 함께 농도 선형성을 보였다. DOX, DOXol 및 MMC의 정량 (LLOQ)의 하한값은 10 ng/mL, 10 ng/mL 및 100 ng/mL 전 혈 및 25 ng/mL...

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Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

한 번에 단일 약물의 탐지를 가능 하 게 다른 컬럼에 방법에 비해, 현재 HPLC 프로토콜은 동시에 변경 하는 필요 없이 동일한 생물학 매트릭스에 세 약 화합물 (DOX, MMC, 및 DOXol)을 quantitate 수 모바일 단계입니다. 약 동학 및 바이오-2 나노 기반 약물 전달 시스템의 배포를 확인 하려면이 준비 및 분석 방법은 성공적으로 적용 (즉, 자주 DOX와 DMPLN)22. 이후 PEGylated 나노 연장 시간의 오랜 기간 동안 높은 혈액 약물 농도 결과로 로드 된 약물의 전신 순환 (> 24 h), 설명된 컬럼에 메서드는 큰 규모의 샘플 분석을 위한 비용 효율적인 전 임상 연구22나노 공동 로드 약물 조합. 무료 DOX 솔루션 및 자주 DOX 그림 4A 의 약 동학은 설치류

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Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

저자는 없고 경쟁 금융 관심사 이해 충돌 있다.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

저자는 기꺼이 HPLC, 캐나다 건강 연구 (CIHR) 캐나다 유 방 암 연구 (CBCR) 연구소에서 운영 보조금에 대 한 자연 과학 및 공학 연구 (NSERC) 위원회 캐나다에서 장비 부여를 인정 X.Y. 우, 얼라이언스 그리고 R.X. 장 하 토니 장 토론토 대학 장학금.

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
독소루비신 Polymed Theraeutics111023항암제
Mitomycin CPolymed Theraeutics060814항암제
Doxorubicinol (DOXol)토론토 연구 화학물질D558020
4-Methylumbelliferone 나트륨 염의 대사산물 Sigma-AldrichM1508내부 표준
Myristic AcidSigma-Aldrich544-63-8   폴리지질 하이브리드 나노입자용 재료
폴리옥시에틸렌 (100) 스테아레이트스펙트럼M1402폴리지질 하이브리드 나노입자용 재료
폴리옥시에틸렌 (40) 스테아레이트시그마-알드리치P3440폴리지질 하이브리드 나노입자용 재료
Pluronic F68 (PF68)BASF Corp.9003-11-6폴리 지질 하이브리드 나노 입자
재료 초음파 (UP100H)Hielscher, 초음파 기술NA나노 입자 준비
수조 (ISOTEMP 3016HS)Fisher ScientificNA나노 입자 준비
Liposomal Doxorubicin  (케일릭스)Janssen약국에서 구매 Princess Margaret Hospital임상적으로 승인된 나노 입자 제형 
HPLC 등급 메탄올Caledon Chemicals6701-7-40HPLC 이동상 구성
HPLC 등급 H2OCaledon Chemicals8801-7-40HPLC 이동상 조성
HPLC 등급 아세토니트릴 Caledon 화학물질 1401-7-40HPLC 이동상 조성
Trifluoroacetic 산시그마 - 알드리치302031HPLC 이동상 조성
0.45 μ m 나일론 멤브레인 여과지WhatmanWHA7404004HPLC 이동상 준비
1cc 플라스틱 주사기Becton, Dickinson and Company2606-309659처리 주입
5cc 플라스틱 주사기Becton, Dickinson and Company2608-309646조직 수집
30G 1/2 바늘Becton, Dickinson and Company305106치료 주입
25G 5/8 바늘Becton, Dickinson and Company305122조직 컬렉션
멸균 0.9% 식염수토론토 대학 하우스 브랜드1011조직 관류
13 ml 둥근-바닥 원뿔형 튜브 SARSTEDT62.515.006프로리프롤렌, 조직 균질화
알파 최소 필수 배지(MEM) Gibco12571063Cell medium
1 x 인산염 완충액 식염수Gibco10010023조직 균질화
Triton X-100Sigma-AldrichX100-100 ML조직 균질화
Formic acidCaledon Chemicals1/5/3840추출 용매를 위해 pH 조정
헤파린 나트륨 스프레이 플라스틱 튜브Becton, Dickinson and Company367878혈액 채취
분석 계량 저울 싸토리우스 CPA225DNA
pH 미터 Fisher Scientific13-637-671Accumet BASIC
Vortex MixterFisher Scientific02-215-365원하는 속도로 샘플 볼텍싱
1.5 ml  마이크로 원심분리기 튜브Fisherbrand2043-05408129Prolyprolene
모델 1000 균질화기Fisher Scientific08-451-672조직 균질화
원심분리기 5702REppendorf5702R추출 준비
가열식 증발기 시스템Glas-ColNA샘플 재구성
HPLC 나사산 바이알DIKMA5320HPLC 샘플 주입
HPLC 스크류 캡과 PTFE 화이트 실리콘 격막DIKMA5325HPLC 샘플 주입
HPLC 폴리프로필렌 인서트   Agilent Technologies5182-0549최대 볼륨 250 μ l, HPLC 샘플 주입
Xbridge C18 ColumnWaters Corporation186003117약물 분석
그라디언트 펌프 Waters CorporationW600약물 분석
자동 샘플러Waters CorporationW2707약물 분석
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멀티 λ 형광 검출기 Waters CorporationW2475약물 분석
EMPOWER 2Waters CorporationNA데이터 분석 소프트웨어
과학자MicromathNA약동학 분석
Female Balb/c MiceJackson Laboratory001026In vivo
EMT6/WT 유방암 세포Ian Tannock 박사 제공; 온타리오 암 연구소NAIn vivo
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