우리는 약리 시 약 전체 셀 패치 클램프 기록 하는 동안 관리 될 수 및 그것의 성공에 대 한 중요 한 기능의 다양 한 측면을 강조 퍼프 기술을 설명 합니다.
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방법 논문
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우리는 약리 시 약 전체 셀 패치 클램프 기록 하는 동안 관리 될 수 및 그것의 성공에 대 한 중요 한 기능의 다양 한 측면을 강조 퍼프 기술을 설명 합니다.
약리학 관리 전체 셀 패치 클램프 두뇌 조각에서 녹화를 할 때 주로 사용 됩니다. Electrophysiological 녹음 중 약물 응용 프로그램의 가장 좋은 방법 중 하나는 두뇌 조각에서 신경 활동에 약리 시 약의 효과 연구 하는 데 사용할 수 있습니다 퍼프 기술입니다. 퍼프 응용 프로그램의 가장 큰 장점은 그 녹음 사이트 약물 농도 증가, 따라서 방지 막 수용 체의 둔감. 퍼프 응용 프로그램의 성공적인 사용 주의 다음과 같은 요소를 포함: 약물의 농도, 퍼프 micropipette, 퍼프 micropipette 기록, 신경의 끝 및 기간 사이의 거리의 매개 변수 및 퍼프는 운전 압력 (평방 인치 당 파운드 psi). 이 문서에서는 피 감마-aminobutyric 산 (GABA) 전 두 엽 피 질 조각의 뉴런에 의해 유도 된 전체 셀 전류를 기록 하기 위한 단계별 절차를 설명 합니다. 특히, 마가, 등 다른 두뇌 지역 그리고 다른 준비, 세포 배양 등 사소한 수정 같은 절차를 적용할 수 있습니다.
패치 클램프 기술, 뉴런의 전기 신호를 조사 하기 위한 기본 도구는 1970 년대1,2에서 개발 되었다. 이 기술의 주요 장점은 어떻게 특정 치료에 지식을 제공 한다는 것입니다 (예를 들어, 약리) 신경 기능 또는 실시간으로3채널을 변경할 수 있습니다. 전체 셀 두뇌 조각에서 녹음 하는 동안 신경 기능 약리학 평가 기록 되 고 신경에 촉진제 또는 특정 수용 체의 길 항 제와 같은 약물의 응용 프로그램을 필요 합니다. 이 메서드는4신경 생리 적 및 병 적인 속성을 더 잘 이해 하는 특정 약물의 응용 프로그램에 따라 발생 하는 신경 변경 식별 수 있습니다. 약리학 관리 중 관류5 또는 퍼프6을 통해 수행할 수 있습니다, 비록 후자의 우수한 기술입니다. 특히: (i) 응용 프로그램을 빠르게 퍼프 증가 약물 농도 수준으로 기록 된 신경 주위를 막 수용 체의 탈 감 작 예방; (ii) 부풀어 약물의 볼륨이 매우 낮은, 따라서 뇌 조각;에 관리 화학 물질의 어떤 바람직하지 않은 효과 감소 시키는 목욕 솔루션에는 효과가 거의 되도록....
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동물 주택 및 모든 동물 실험 동물 관리의 국립 연구소에 의해 설립에 대 한 지침에 따라 남 중국 사범 대학에서 동물 연구에 대 한 윤리 위원회에 의해 승인 절차에 따라 실시 했다 건강.
1. 준비의 솔루션
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퍼프 기술은 특정된 뉴런의 표면에 특정 수용 체에 약물의 효과 연구 하는 연구자를 수 있습니다. 이 문서에서는, 우리는 GABA 수용 체에 의해 중재 전류에 초점. 그림 1 에서는 퍼프와 녹음 micropipettes. 퍼프, 실제에 의해 생성 된 실제 압력의 기록 된 신경 세포에 어떤 영향을 제거 하 고 자당 퍼프 (그림 2A) 컨트롤로 사용 됩니다. GABA 퍼프 (블랙)에 의해 유도 된 응답 그림 2B와 같이 실제 워시 아웃 (블루)으로 초기 상태를 복구할 수 있습니다 하는 동안 보고 된10, picrotoxin와 같은 GABA 수용 체 억제제에 의해 막힐 수 있다. 특히,는 실제도 자당 퍼프 유도 응답,.......
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퍼프 응용 프로그램은 널리 postsynaptic 수용 체 기능3,,47, 평가 하는 데 사용 됩니다 하지만 각 실험에 정확한 컨트롤을 요구 한다. 여기에 나온 전 두 엽 피 질 뇌 조각에서 Ipsc (즉, eIPSCs)을 유도 하는 GABA 퍼프 전체 셀 패치 클램핑 관련 절차를 설명 합니다. 기록 전극의 저항은 약 5 m ω, 퍼프 micropipettes의 팁 직경에 대해 2-5 µ m. 퍼프 압력은 4-6 psi 사이:이 범위는 중요 한, 높은 압력 낮은 압력 귀 착될 수 있다 하는 동안 신경 손상 발생할 수 있습니다로 postsynaptic GABA 수용 체의 활성화 부족입니다. 에 대 한 기록 하는 뉴런에 퍼프 micropipette의 끝에서 수평 거리는 20-40 µ m (1-2 신경의 직경), 그리고 퍼프 micropipette 슬라이스 표면 사이의.......
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저자는 공개 없다.
저자는 다음 단체를 감사 하 고 싶습니다: 국가 자연 과학 재단의 중국 (31171018, 31171355), 과학 및 기술 부의 광 (2013KJCX0054), 자연 과학 재단의 광 동성 ( 2014A030313418, 2014A030313440), 광저우 과학 및 기술 관리국 (201607010320).
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| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 유리 붕규산 마이크로 피펫 | 셔터 기기 | BF150-86-10 | 외경 1.50mm; 내경 0.86mm |
| 마이크로 피펫 풀러 | 셔터 기기 | 모델 P-97 | 플레밍/브로우 마이크로피펫 풀러 |
| Micromanipulators | 셔터 악기 | MP-285 | |
| 컴퓨터 제어 증폭기 | 분자 장치 | Multiclamp 700B | |
| 디지털 수집 시스템 | Molecular Devices | Digidata 1440A | |
| 이미징 카메라 | Nikon | 2115001 | 검사 장비 |
| 현미경 | 니콘 | 이클립스 FN1 | |
| 마스터 8 | A.M.P.I. | Master-8 펄스 자극기 | |
| Vibratome Slicer | Leica | VT 1000S | |
| 면도날 | 질레트 | 74-S | FLYING EAGLE |
| 비디오 모니터 | Panasonic | WV-BM 1410 | |
| 502 Glue | Deli | 7146 | Cyanoacrylate Glue |
| 연동 펌프 | Shanghai JIA PENG Corporation | BT100-1F | |
| 비디오 카메라 | 올림푸스 아메리카 의료 | OLY-150 | |
| 전사 피펫 | Biologix | 30-0138A1 |
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