방법 논문

순환 종양 세포 시각화 폐 조직에 대 한 폐 식민 분석 결과의 설립

DOI:

10.3791/56761

⸱

2018년 6월 16일

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1The Institute of Basic Medical Sciences, College of Medicine, National Cheng Kung University, 2Department of Biochemistry and Molecular Biology, College of Medicine, National Cheng Kung University, 3Trauma Office, Children's National Health System

이 논문에서

요약

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

순환 종양 세포 (CTCs) 암 전이 동안 폐 식민을 촉진 역할을 해독 하는 동물 모델 필요 합니다. 여기, 우리가 설립 하 고 성공적으로 수행는 vivo에서 시험의 구체적으로 테스트를 폐 식민 CTCs에 고분자 fibronectin (polyFN) 어셈블리의 요구.

초록

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전이 암 사망의 주요 원인입니다. 순환 종양 세포 (CTCs) 암 전이, 폐 식민 CTCs에 의해 비판적으로 공헌 한다 폐 전이성 프로세스 초기에 홍보에 역할을 적극적으로 조사 되었습니다. 따라서, 동물 모델은 유일한 접근 전이의 전체 조직의 프로세스를. 우리는 vivo에서 폐 식민 분석 결과 설립 문제가 혈관 넘쳐 흐름 CTCs의 기여를 조사 하기 위한 이전 실험 설계에서 발생, 그 긴 장기 형광 세포 추적 프로그램, carboxyfluorescein 그리고 에스테 르 succinimidyl (CFSE), 일시 중단 된 종양 세포를 사용 폐 관류 폐 제거, confocal 영상 및 정량화 이전 비 특히 갇혀 CTCs를 수행 했다. CTC 표면에 고분자 fibronectin (polyFN) 전이성 종양 조직의 최종 설립에 폐 식민 중재 발견 되었습니다. 여기, 특히 polyFN 어셈블리 CTCs에 폐 식민 넘쳐 흐름의 요구 사항을 테스트, 단기 수행 있는 폐 식민 분석 실험 중단 루이스 폐 암 세포 (LLCs) 안정적으로 FN-shRNA (shFN)를 표현 하거나 출 격-shRNA (shScr)와 20 미리 레이블이 CFSE의 μ M C57BL/6 쥐로 정 맥 주사 했다. 우리는 성공적으로 마우스 폐를 식민지로 shFN LLC는 세포의 능력 shScr LLC 셀에 비해 현저 하 게 점감 되었다 설명 했다. 따라서,이 단기 방법론 특히 식민지 폐 순환 내 CTCs의 능력을 보여 주기 위해 널리 적용할 수 있습니다.

서론

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전이 암 죽음1,2의 주요 원인입니다. 기본 조직에서 파생 하는 종양 세포에에서 순환을 입력 하 고 전에 그들은 다양 한 hematogenous 도전, 예를 들면, anoikis, 면역 공격, 및 혈압 또는 기하학적 구속 조건에서 전단 응력으로 인해 손해 생존 식민지 먼 장기 전이3,4,,56의 성공을 지시 된 중요 한 단계를 수 있습니다. 순환 종양 세포 (CTCs) 특성화 및 종양 악성 종양, 전이, 암 환자7,8 의 생존 율과 이러한 특성을 상호 활발 한 노력에 현재 되었습니다 따라서, , 9. 암 전이의 과정 vivo에서 이벤트를 구체적으로 묘사, 동물 모델은 유일한 접근 전이10,11,12의 전체 조직의 프로세스를 .

CTCs 먼 장기1,2의 식민지를 포함 하 여 여러 개의 셀룰러 이벤트를 통해 전이성 종양 조직 된다. 그러나, 가장 일반적으로 사용 되 전이 분석 실험13,,1415 먼 장기의 CTC 식민지를 관찰 하는 방법을 제공 하지 않습니다. 따라서,는 vivo에서 분석 결과 디자인 CTC 식민 시각화에 대 한 긴급 하 게 필요 합니다. 하지만 여러 vivo에서 비보 전 짧은 기간 폐 식민 분석 실험 설계 되었습니다, 문제 및 단점 남아 있습니다. 예를 들어, 녹색 형광 단백질 (GFP) 동안-overexpressing 종양 세포에서 사용 된 분석 실험22,23, 안정적 transfect 아래에서 충분 한 GFP 형광 강도 종양 세포를 복제 하는 시간이 걸립니다 현미경입니다. 마찬가지로, 비록 GFP 표현 종양 세포를 대체 하 긴 기간 셀 추적 CFSE와 종양 세포의 얼룩 과도 고용 된 남아 CFSE 표시 된 종양 세포 부착 여부를 판단 하기 어렵거나 단지 내 존재는 삭제 먼 장기16,17의 맥 관 구조.

CTCs의 표면에 고분자 fibronectin (polyFN) 전이성 종양 조직18,,1920,21,22의 마지막 설립에 비판적으로 기여할 발견 되었습니다. . 여기, 우리가 수행 단기 폐 식민 분석 실험 중단된 루이스 폐 암 셀 (LLCs)에서 안정적으로 표현 하는 FN-shRNA (shFN) 또는 출 격-shRNA (shScr) 고 미리 CFSE와 C57BL/6 쥐로 정 맥 주사 했다. 2-3 일 후, 마우스 폐 처음 confocal 현미경 검사 법 및 폐 식민지 LLCs의 정량화를 버퍼링 하는 인산 염 (PBS)를 완전히 복종 되기 전에 맥 관 구조 내에서 연결 되지 않은 CTCs 제거와 함께 끼얹는다 했다. 우리가 명확 하 게 보여주었다 폐 식민지 shFN LLCs의 숫자와 종양 혹 shScr LLCs, 실질적으로 식민과 CTCs에의 성장 촉진에 CTCs에 polyFN 어셈블리의 역할을 확실 한지 알아보는 비해 크게 감소 했다 그는 폐입니다. 우리의 연구 영장 추가 암 전이에서 polyFN의 역할에 대 한 조사.

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프로토콜

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모든 실험 쥐에 우리의 연구소 (관리 및 실험 동물의 사용, NCKU 의학 대학에 대 한 가이드)의 지침에 따라 수행 했다.

1. 악기, 문화 미디어, 및 요리 준비

  1. 시작 하기 전에 실험 프로토콜, 메 마른 외과 봉합, 1 mL 주사기 26 G/0.5 c m 바늘 (대 한 꼬리 정 맥 주사), 얻을 3 mL 주사기 24 G/3 c m 바늘 (대 한 폐 관류), Dulbecco의 수정이 글 미디어 (DMEM), 트립 신-EDTA 솔루션 (5 g/L 트립 신 및 0.53 m m), 소 태아 혈 청 (FBS), 1 x PBS (137 m NaCl m, 2.7 m m KCl, 10mm 나2포4및 1.8 m m KH2포4), 그리고 6 cm 문화 요리.

2. 준비 및 서 스 펜 션에 종양 세포의 복구

  1. 살 균 Dulbecco의 수정이 글 미디어 (DMEM) 10% 또는 20% 포함 된 준비 FBS 갓 추가 2mm L-글루타민, 1 x PBS, 0.05% 트립 신-EDTA.
  2. 10% 보충 DMEM 셀 문화 37 ° C에서 FBS 문화 접시에 70-80% 합류 있을 때까지 그들을 성장 하 고.
  3. 뒤에 두 세척 살 균 1 x PBS의 2 mL와 함께 요리에서 문화 미디어 (DMEM)를 제거 합니다.
  4. 0.05%의 1 mL를 추가 모든 세포를 철저 하 게 요리에 트립 신-EDTA. 즉시 솔루션의 800 μ를 제거 하 고 요리에만 200 μ를 떠나. 30에 대 한 37 ° C에서 요리를 품 어 s (셀 유형)에 따라 1 분 및 일시 중단된 상태에서 세포의 대부분은 때까지 기다립니다.
  5. 신선한 DMEM 1 mL을 추가 10% 포함 된 트립 신 하 고 적극적으로 효소 활동을 중지 하는 요리에 직접 FBS 플라스틱 셀 서 스 펜 션 아래로 단일 세포 현 탁 액을 준비 하는 1000 µ L 피 펫과.
  6. 접시에서 1.5 mL microcentrifuge 튜브 셀을 전송 하 고 162 x g 3 분에 실 온에서 셀 아래로 회전.
  7. 상쾌한 발음 하 고 resuspend 종양 세포 1.5 mL 20 %FBS 및 이상 끝 포함 된 DMEM 회전 2 h 37 ° C에서에 셀.
    참고: 경우 매체 복구 하는 동안 노란색, 교환 20% 포함 된 신선한 매체와 오래 된 매체 FBS.

3. 형광 착 색 및 Carboxyfluorescein Succinimidyl 에스테 르 (CFSE)에 종양 세포의 분석

  1. 정지에서 세포 복구, 후 Trypan 파랑 Neubauer 챔버 titrating 복용량을 얼룩이 지기 형광 세기에 적절 한 실행 가능한 핸드폰 번호를 계산 하 고 꼬리 정 맥 주입.
  2. 3 분 및 resuspend 수송과 셀의 1 mL에 1 x PBS, 실내 온도 3 분 162 x g에서 원심 분리 뒤 소독에 대 한 실 온에서 162 x g에서 셀 아래로 회전 합니다.
  3. 500 µ L 10를 포함 하는 1 X PBS의 수송과 셀 resuspend %FBS 0, 5, 10, 20, 또는 40 µ M CFSE 복용량 적정을 위한 37 oC 어둠 속에서 10 분 동안에 세포 현 탁 액을 품 어 고.
  4. 3 분 동안 실 온에서 162 x g에서 셀 아래로 회전 하 고 1% 포함 된 DMEM의 4 mL와 수송과 셀 resuspend FBS. 이 세척 단계 세 번 더 반복 합니다. 마지막 세척에 대 한 혼자 DMEM의 4 mL와 수송과 셀 resuspend
  5. 꼬리 정 맥 주입 또는 형광 활성화 셀 정렬 (FACS) 단일 셀의 형광 강도 계량 분석 CFSE 표시 된 셀을 대상 합니다.
    참고: 얼음 FACS 분석 또는 꼬리 정 맥 주사를 수행 하기 전에 셀을 계속.

4. 폐 식민 분석 결과

  1. 20 µ M CFSE와 함께 표시 하는 셀을 준비 (3.4 통해 단계 3.1 참조).
    참고: 종양 세포, FACS 분석에서 적정 결과에 따라 라벨 CFSE의 작업 복용량 결정 (단계 3.3 참조).
  2. 4-6 주 꼬리 워밍업-오래 된 남성 C57BL/6 마우스 (6 쥐) 마우스 꼬리 혈관을 팽창 하는 마우스-의해-마우스 기준 5-10 분 위한 할로겐 램프로.
  3. 철저 하 게 혼합 하 고 (5 x 106 셀/mL의 최종 셀 밀도)와 세포 현 탁 액에서 모든 거품을 피하고 1 mL (26Gx1/2) 주사기 CFSE 표시 된 종양 세포를 발음.
  4. 신중 하 게 주사 1 x10 마우스 restrainer에 제기 해야 하는 마우스 꼬리 정 맥으로 DMEM의 200 µ L에서6 CFSE 표시 된 종양 세포.
    참고: 동안 주입, 바늘 꼬리 정 맥의 루멘에 직접 배치 됩니다 경우 종양 세포 한다 쉽게 배달 순환으로 주사기에 하드 밀어 필요 없이. 경우를 통해 종양 세포를 밀어, 그들은 있다 가장 가능성이 되었습니다 주입 꼬리 정 맥 이외의 피하 공간으로.
  5. 쥐를 두 그룹으로 CFSE 표시 된 종양 세포를 정 맥으로 받은 분할: 하나의 그룹 confocal 현미경 검사 법 이어서 폐 관류를 받게 될 것 이다 및 ImageJ 정량화 폐 식민 분석 결과 다른 것에서 남아 있을 것입니다 혼자 4-5 장기적인 폐 식민 주 시험.
  6. 20, 38, 또는 45 h와 시간 과정 및 복용량 의존 적정 하는 동안 정 맥으로 주입 하는 1 x 106 종양 세포, anesthetize 50-75 mg/kg zoletil 50, 잘 허용 하 고 적절 한 anesthetizer23와 종양 방위 쥐.
    참고: 사용 하 여 수 의사 마 취에서 건조를 방지 하기 위해 쥐의 눈에 연 고.
  7. 경도 수술가 위로 잘라 피부와 가슴 지역에서 복 부 피하 조직. 수술가 위 및 심 혼 및 폐를 완전히 노출 하는 집게와 흉 막 캐비티를 엽니다.
    참고: 혈관을 절단 하지 않도록 주의 해야 합니다.
  8. 뛰어난 베 나 정 맥 (SVC) 및 열 등 한 베 나 정 맥 (IVC) 폐 관류 동안 관류 솔루션의 역류를 방지 하기 위해 불 임 수술 봉합을 묶어.
  9. 좌 심 실 벽 균열 (약 2-4 m m) 폐 로부터 관류 솔루션을 배출 하 여 수술가 위로 잘라.
  10. 3 mL 주사기 1 x PBS를 우 심 실에 삽입 하 고 폐는 완전히 창백 하는 붉은 색에서 돌 때까지 폐 관류 동안 지속적인 흡입 물기 솔루션을 제거 합니다.

5. confocal 현미경 이미징 및 식민지 화 하는 폐 종양 세포의 분석

  1. 흉 막 캐비티에서 지금 창백 폐를 제거 하 고 멀리 외과 시저 및 집게24기도 및 결합 조직 인 대를 절단 하 여 5 개의 돌출부를 분리.
  2. 폐 엽의 배치에 대 한 두 개의 막대 사이의 공간을 가진 reticulate 텍스처를 생산 하기 위해 들 것 같은 폐 홀더 같이 그림 3B 에서 나일론 봉합 와인딩 하 여 약 2 개의 금속 막대를 준비 합니다. 6 cm 접시에 폐 소유자를 설정 합니다.
    참고: 폐 홀더 confocal 현미경의 대물 렌즈 아래 폐 엽을 안정 시키기 위해 사용 됩니다.
  3. 별장 및 폐 소유자의 reticulate 텍스처에 폐 엽을 수정. 표지 및 1 x PBS와 폐 엽을 축 축 하 게.
  4. 제목 6 cm 문화 접시 폐 엽 폐 식민지 종양 세포를 기록 하는 형광 이미지를 캡처 confocal 현미경 검사 법을 폐 소유자를 은닉.
  5. 이미징, 렌즈를 사용 하 여 (5 X, MPLN, 나: 0.1, WD: 20, 공기).
  6. NIBA (여기/방출, 470-495 nm/510-550 nm)을 필터 바퀴를 회전 하 고 488 nm 레이저를 사용 하 여 폐 엽에 형광 점의 이미지를 명확 하 게 시각화 CFSE를 자극.
  7. R690 (MaiTai HP DeepSee 레이저)에 대 한 필터 휠을 회전 2.0 스캔 µs/픽셀 스캔 속도 및 HV, 이득 및 오프셋 최적화 수준.
  8. 10 현미경 소프트웨어를 사용 하 여 형광 이미지 (512 x 512 픽셀) 캡처 µs/픽셀 스캔 속도.
  9. 계량 하 고 앞에서 설명한21로 ImageJ GraphPad 소프트웨어를 사용 하 여 미세한 이미지를 통계적으로 분석.

6. 장기 폐 식민 분석 실험

참고: 4.1 4.5 통해 단계를 반복 합니다.

  1. 4-5 주 동안 종양 세포 접종 후 쥐를 희생 하 고 1 ~ 2 일 동안 Bouin의 유체25 그들의 폐를 고치십시오.
  2. 계량 하 고 통계 분석 소프트웨어21쥐 폐에서 종양 작은 혹.

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결과

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Vivo에서 폐 식민 분석 결과 수행 하기 전에 일시 중단 된 종양 세포에 polyFN 중재 폐 식민지 그리고/또한 전이, 촉진에 넘쳐 흐름 여부를 테스트 하려면 그림 1A 에서 볼 수 있듯이 우리가 먼저 적정 다른 CFSE, 세포 투과성 covalently 세포내 포함 하는 아민 분자26,27 일시 중단 된 종양 세포에 변화 하 고 꽤 긴 시간 동안 셀에 남아 형광 화합물 농도 우리는 그 종양 세포에 그림된 그림 1B와 복용량 의존 방식에서 CFSE와 효과적으로 표시 했다 발견. CFSE 라벨 6에서 그림 1 c에 나와 있는5 LLC 셀/mL는 거의 20 µ M로에 대 지...

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토론

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긴 기간 폐 식민 분석 실험, 단기 우리 고용 여기 먼 장기에 폐 식민 CTCs에 의해 vivo에서 평가 하는 방법론 명확 하 게 발표 하 고 식민지에서 CTCs에 조립 하는 polyFN의 특정 역할 분화와 함께 폐에 넘쳐 흐름 및 전이성 프로세스18,19,,2021다음 주도. 비록 장기 셀 추적기 CFSE 3 일전 폐 관류에 대 한 정 맥 주입된 CTCs를 추적 하 고 양적으로 충분 한 녹색 형광을 유지 하는 셀 라벨, 그건 직접 확인할 수 종양 세포 배 루멘 내 위치 여부 이미 혈관에서 extravasated. 이 문제, 빨간색 형광을 해결 하기 위해 rhodamine 활용 된 dextran lectins endothelia에에 비 특정 바인딩 할 수 있는 폐 관류

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공개 사항

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저자는 공개 없다.

감사의 글

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저자 박사 Ming 분 장 및 양 나중 Hsin 쳉 그들의 기술 지원에 감사 하 고 싶습니다. 이 작품만 사역의 과학 및 기술에 의해 지원 되었다 (대부분-103-2325-B-006-009, 대부분-104-2325-B-006-001, 대부분-105-2325-B-006-001, 및 MOST-106-2320-B-006-068-MY3)의 보건 및 복지 (MOHW106-TDU-B-211-144004). 우리는 또한 그들의 다 광자 공초점 현미경에 대 한 국립 쳉 쿵 대학, 의학 대학의 핵심 연구소에서 지원에 대 한 감사.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
Material
소 세럼 알부민 ( BSA)Cyrusbioscience (Taipei, Taiwan)101-9048-46-8
Bouin's FluidMCC(Medical Chemical Corporation)/POISON456-A-1GL
CFSE Proliferation Dyeebiosciences65-0850-85성명: Carboxyfluorescein succinimidyl ester
Dulbecco's Modified Eagle Media (DMEM) (Gibco)ThermoFisher Scientific12100-061
에틸렌디아민테트라아세트산 (EDTA)Cyrusbioscience (타이페이, 대만)101-6381-92-6준비된 트립신-EDTA 용액( 최종 농도: 0.53mM) 
태아 소 혈청 (FBS)(Gibco)ThermoFisher Scientific10437-028
Lewis lung carcinoma (LLC)ATCC, Manassas, VA, USACRL-1642
L-Glutamine, USP (Gibco)ThermoFisher Scientific21051-024
염화칼륨 (KCl)Cyrusbioscience (타이페이, 대만)101-7447-40-7준비된 1X PBS (최종 농도: 2.7mM)
인산칼륨 일염기성 (KH2PO4)Cyrusbioscience (타이페이, 대만)101-7778-77-0준비된 1X PBS (최종 농도: 1.8mM)
나트륨 염화물(NaCl)Cyrusbioscience(대만 타이베이101-7647-14-5준비된 1X PBS(최종 농도: 137mM)
산나트륨이염기성(Na2HPO4)Cyrusbioscience(대만 타이베이)101-10039-32-4준비된 1X PBS(최종 농도: 10mM)
Trypan BlueSigma AldrichT61460.5g과 100mL 1X PBS
혼합TrypsinSigma AldrichT4799준비된 트립신-EDTA 용액 (최종 농도: 5g/L)
Zoletil 50Virbac1X PBS로 희석하기 위해 
NameCompany카탈로그 번호Comments
Equipment
Compact 탁상용 원심분리기 2420KUBOTA Co.2420
배양 접시 (6cm)무석 NEST 생명 공학 Co.
일회용 주사기 (바늘 포함)Perfect Medical Industry Co.24G/3 cm;3 ml & 26G/0.5 cm;1 ml
엔드 오버 엔드 믹서C.T.I YOUNG CHENNTS-20부유 세포 회수용 
FACSCalibur (FACS)BD biosciences
ForcepsDimeda10.102.14
Forma Direct Heat CO2 인큐베이터Thermo Fisher Scientific Inc.HEPA CLASS 100
마우스 억제기 (원통형 억제기 15-30 gm)Stoelting51338
다광자 컨포칼 현미경 BX61WIOlympusFV1000MPE
Neubauer 계수실Marienfeld-Superior640010
수술용 가위Dimeda08.370.11
수술용 봉합사 UNIK 외과 봉합사 MFG. CO.NO. 0034블랙 브레이드 실크; 비흡수성(25YD; U.S.P. 4/0)
1.5mL 마이크로 원심분리기 튜브Wuxi NEST Biotechnology Co.
15 mL Greiner 튜브Greiner bio-one188271
)인705001615001

참고문헌

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Massague, J., Obenauf, A. C. Metastatic colonization by circulating tumour cells. Nature. 529 (7586), 298-306 (2016).
  2. Lambert, A. W., Pattabiraman, D. R., Weinberg, R. A. Emerging Biological Principles of Metastasis. Cell. 168 (4), 670-691 (2017).
  3. Mohme, M., Riethdorf, S., Pantel, K. Circulating and disseminated tumour cells - mechanisms of immune surveillance and escape. Nat Rev Clin Oncol. 14 (3), 155-167 (2017).
  4. Steinert, G., et al. Immune escape and survival mechanisms in circulating tumor cells of colorectal cancer. Cancer Res. 74 (6), 1694-1704 (2014).
  5. Mahauad-Fernandez, W. D., Okeoma, C. M. Cysteine-linked dimerization of BST-2 confers anoikis resistance to breast cancer cells by negating proapoptotic activities to promote tumor cell survival and growth. Cell Death Dis. 8 (3), e2687(2017).
  6. Maheswaran, S., Haber, D. A. Circulating tumor cells: a window into cancer biology and metastasis. Curr Opin Genet Dev. 20 (1), 96-99 (2010).
  7. Yu, M., et al. RNA sequencing of pancreatic circulating tumour cells implicates WNT signalling in metastasis. Nature. 487 (7408), 510-513 (2012).
  8. Adams, D. L., et al. Mitosis in circulating tumor cells stratifies highly aggressive breast carcinomas. Breast Cancer Res. 18 (1), 44(2016).
  9. Baccelli, I., et al. Identification of a population of blood circulating tumor cells from breast cancer patients that initiates metastasis in a xenograft assay. Nat Biotechnol. 31 (6), 539-544 (2013).
  10. Malladi, S., et al. Metastatic Latency and Immune Evasion through Autocrine Inhibition of WNT. Cell. 165 (1), 45-60 (2016).
  11. Spiegel, A., et al. Neutrophils Suppress Intraluminal NK Cell-Mediated Tumor Cell Clearance and Enhance Extravasation of Disseminated Carcinoma Cells. Cancer Discov. 6 (6), 630-649 (2016).
  12. Pattabiraman, D. R., et al. Activation of PKA leads to mesenchymal-to-epithelial transition and loss of tumor-initiating ability. Science. 351 (6277), aad3680(2016).
  13. van der Weyden, L., et al. Genome-wide in vivo screen identifies novel host regulators of metastatic colonization. Nature. 541 (7636), 233-236 (2017).
  14. Obenauf, A. C., et al. Therapy-induced tumour secretomes promote resistance and tumour progression. Nature. 520 (7547), 368-372 (2015).
  15. Genovese, G., et al. Synthetic vulnerabilities of mesenchymal subpopulations in pancreatic cancer. Nature. 542 (7641), 362-366 (2017).
  16. von Horsten, S., et al. Stereological quantification of carboxyfluorescein-labeled rat lung metastasis: a new method for the assessment of natural killer cell activity and tumor adhesion in vivo and in situ. J Immunol Methods. 239 (1-2), 25-34 (2000).
  17. Reymond, N., et al. Cdc42 promotes transendothelial migration of cancer cells through beta1 integrin. J Cell Biol. 199 (4), 653-668 (2012).
  18. Cheng, H. C., Abdel-Ghany, M., Elble, R. C., Pauli, B. U. Lung endothelial dipeptidyl peptidase IV promotes adhesion and metastasis of rat breast cancer cells via tumor cell surface-associated fibronectin. J Biol Chem. 273 (37), 24207-24215 (1998).
  19. Huang, L., et al. Protein kinase Cepsilon mediates polymeric fibronectin assembly on the surface of blood-borne rat breast cancer cells to promote pulmonary metastasis. J Biol Chem. 283 (12), 7616-7627 (2008).
  20. Chang, Y. H., et al. Secretomic analysis identifies alpha-1 antitrypsin (A1AT) as a required protein in cancer cell migration, invasion, and pericellular fibronectin assembly for facilitating lung colonization of lung adenocarcinoma cells. Mol Cell Proteomics. 11 (11), 1320-1339 (2012).
  21. Wang, Y. J., et al. Pterostilbene prevents AKT-ERK axis-mediated polymerization of surface fibronectin on suspended lung cancer cells independently of apoptosis and suppresses metastasis. J Hematol Oncol. 10 (1), 72(2017).
  22. Cheng, H. C., Abdel-Ghany, M., Pauli, B. U. A novel consensus motif in fibronectin mediates dipeptidyl peptidase IV adhesion and metastasis. J Biol Chem. 278 (27), 24600-24607 (2003).
  23. Hsu, Y. Y., et al. Thrombomodulin is an ezrin-interacting protein that controls epithelial morphology and promotes collective cell migration. FASEB J. 26 (8), 3440-3452 (2012).
  24. Arlt, M. J., Born, W., Fuchs, B. Improved visualization of lung metastases at single cell resolution in mice by combined in-situ perfusion of lung tissue and X-Gal staining of lacZ-tagged tumor cells. J Vis Exp. (66), e4162(2012).
  25. Shi, Y., Parhar, R. S., Zou, M., Al-Mohanna, F. A., Paterson, M. C. Gene therapy of melanoma pulmonary metastasis by intramuscular injection of plasmid DNA encoding tissue inhibitor of metalloproteinases-1. Cancer Gene Ther. 9 (2), 126-132 (2002).
  26. Parish, C. R. Fluorescent dyes for lymphocyte migration and proliferation studies. Immunol Cell Biol. 77 (6), 499-508 (1999).
  27. Quah, B. J., Warren, H. S., Parish, C. R. Monitoring lymphocyte proliferation in vitro and in vivo with the intracellular fluorescent dye carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester. Nat Protoc. 2 (9), 2049-2056 (2007).
  28. Migone, F. F., et al. In vivo imaging reveals an essential role of vasoconstriction in rupture of the ovarian follicle at ovulation. Proc Natl Acad Sci U S A. 113 (8), 2294-2299 (2016).
  29. Itkin, T., et al. Distinct bone marrow blood vessels differentially regulate haematopoiesis. Nature. 532 (7599), 323-328 (2016).
  30. Jiang, M., Qin, C., Han, M. Primary breast cancer induces pulmonary vascular hyperpermeability and promotes metastasis via the VEGF-PKC pathway. Mol Carcinog. 55 (6), 1087-1095 (2016).
  31. Aceto, N., et al. Circulating tumor cell clusters are oligoclonal precursors of breast cancer metastasis. Cell. 158 (5), 1110-1122 (2014).
  32. Zheng, Y., et al. Expression of beta-globin by cancer cells promotes cell survival during blood-borne dissemination. Nat Commun. 8, 14344(2017).
  33. Chen, X., et al. Retinoic acid facilitates inactivated transmissible gastroenteritis virus induction of CD8(+) T-cell migration to the porcine gut. Sci Rep. 6, 24152(2016).
  34. Saranchova, I., et al. Discovery of a Metastatic Immune Escape Mechanism Initiated by the Loss of Expression of the Tumour Biomarker Interleukin-33. Sci Rep. 6, 30555(2016).
  35. Ahmed, M., et al. An Osteopontin/CD44 Axis in RhoGDI2-Mediated Metastasis Suppression. Cancer Cell. 30 (3), 432-443 (2016).
  36. Hoffman, R. M. In vivo imaging of metastatic cancer with fluorescent proteins. Cell Death Differ. 9 (8), 786-789 (2002).
  37. Mendoza, A., et al. Modeling metastasis biology and therapy in real time in the mouse lung. J Clin Invest. 120 (8), 2979-2988 (2010).
  38. Meacham, C. E., Morrison, S. J. Tumour heterogeneity and cancer cell plasticity. Nature. 501 (7467), 328-337 (2013).
  39. Wagenblast, E., et al. A model of breast cancer heterogeneity reveals vascular mimicry as a driver of metastasis. Nature. 520 (7547), 358-362 (2015).
  40. Nguyen, D. X., Bos, P. D., Massague, J. Metastasis: from dissemination to organ-specific colonization. Nat Rev Cancer. 9 (4), 274-284 (2009).
  41. Ragelle, H., et al. Chitosan nanoparticles for siRNA delivery: optimizing formulation to increase stability and efficiency. J Control Release. 176, 54-63 (2014).
  42. Chu, V. T., et al. Increasing the efficiency of homology-directed repair for CRISPR-Cas9-induced precise gene editing in mammalian cells. Nat Biotechnol. 33 (5), 543-548 (2015).
  43. Wirtz, D., Konstantopoulos, K., Searson, P. C. The physics of cancer: the role of physical interactions and mechanical forces in metastasis. Nat Rev Cancer. 11 (7), 512-522 (2011).
  44. Joyce, J. A., Pollard, J. W. Microenvironmental regulation of metastasis. Nat Rev Cancer. 9 (4), 239-252 (2009).
  45. Sanchez-Laorden, B., et al. BRAF inhibitors induce metastasis in RAS mutant or inhibitor-resistant melanoma cells by reactivating MEK and ERK signaling. Sci Signal. 7 (318), ra30(2014).
  46. Torchiaro, E., et al. Peritoneal and hematogenous metastases of ovarian cancer cells are both controlled by the p90RSK through a self-reinforcing cell autonomous mechanism. Oncotarget. 7 (1), 712-728 (2016).
  47. Wan, J., et al. Establishment of monoclonal HCC cell lines with organ site-specific tropisms. BMC Cancer. 15, 678(2015).
  48. Ye, Y., Liu, S., Wu, C., Sun, Z. TGFbeta modulates inflammatory cytokines and growth factors to create premetastatic microenvironment and stimulate lung metastasis. J Mol Histol. 46 (4-5), 365-375 (2015).
  49. Morales, M., et al. RARRES3 suppresses breast cancer lung metastasis by regulating adhesion and differentiation. EMBO Mol Med. 6 (7), 865-881 (2014).
  50. Stone, J. P., et al. Mechanical removal of dendritic cell-generating non-classical monocytes via ex vivo lung perfusion. J Heart Lung Transplant. 33 (8), 864-869 (2014).
  51. Vettorazzi, S., et al. Glucocorticoids limit acute lung inflammation in concert with inflammatory stimuli by induction of SphK1. Nat Commun. 6, 7796(2015).
  52. Urade, Y., Yoshida, R., Kitamura, H., Hayaishi, O. Induction of indoleamine 2,3-dioxygenase in alveolar interstitial cells of mouse lung by bacterial lipopolysaccharide. J Biol Chem. 258 (10), 6621-6627 (1983).
  53. Hong, G., et al. Through-skull fluorescence imaging of the brain in a new near-infrared window. Nat Photonics. 8 (9), 723-730 (2014).
  54. Liu, Q., Guo, B., Rao, Z., Zhang, B., Gong, J. R. Strong two-photon-induced fluorescence from photostable, biocompatible nitrogen-doped graphene quantum dots for cellular and deep-tissue imaging. Nano Lett. 13 (6), 2436-2441 (2013).
  55. Peti-Peterdi, J., Burford, J. L., Hackl, M. J. The first decade of using multiphoton microscopy for high-power kidney imaging. Am J Physiol Renal Physiol. 302 (2), F227-F233 (2012).
  56. Duda, D. G., et al. Malignant cells facilitate lung metastasis by bringing their own soil. Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (50), 21677-21682 (2010).
  57. Gupta, G. P., et al. Mediators of vascular remodelling co-opted for sequential steps in lung metastasis. Nature. 446 (7137), 765-770 (2007).
  58. Kosaka, N., et al. Neutral sphingomyelinase 2 (nSMase2)-dependent exosomal transfer of angiogenic microRNAs regulate cancer cell metastasis. J Biol Chem. 288 (15), 10849-10859 (2013).
  59. Hoshino, A., et al. Tumour exosome integrins determine organotropic metastasis. Nature. 527 (7578), 329-335 (2015).
  60. Jaskelioff, M., et al. Telomerase deficiency and telomere dysfunction inhibit mammary tumors induced by polyomavirus middle T oncogene. Oncogene. 28 (48), 4225-4236 (2009).
  61. Si, L. L., Lv, L., Zhou, W. H., Hu, W. D. Establishment and identification of human primary lung cancer cell culture in vitro. Int J Clin Exp Pathol. 8 (6), 6540-6546 (2015).
  62. Weng, D., et al. Metastasis is an early event in mouse mammary carcinomas and is associated with cells bearing stem cell markers. Breast Cancer Res. 14 (1), R18(2012).

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