방법 논문

동굴 같은 신경 자극 및 쥐에 Intracavernous 압력의 녹음

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DOI:

10.3791/56807

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2018년 4월 23일

 ,  ,  , 
1Biomedical Laboratory and the Research Unit of Urology, Department of Clinical Research, University of Southern Denmark, 2Department of Surgery, University of Vermont, 3Research Unit of Urology, Department of Clinical Research, University of Southern Denmark, 4Department of Urology, Odense University Hospital

이 논문에서

요약

이 연구에서는 동굴 같은 신경 자극 신경 전극의 절연을 수행 하기 위한 기술과 간단한 수술에 설명 합니다 intracavernous 압력 측정 및 실리콘 접착제를 사용 하 여 복잡 한.

초록

해 면 신경 (CN)의 자극 및 intracavernous 압력 (ICP)의 측정 테스트 하 고 평가 하는 발기 부전 치료에 광범위 하 게 사용 되어 왔습니다. 그러나, 실험실, 사이 다를 사용 하는 방법 그리고 여전히 존재 하는 함정. 이 연구의 목표는 안정적이 고 재현 가능한 모델을 제공 하는 수술 기법을 설명 했다. Ischial tuberosity에 삽입 지점에서 ischiocavernosus 근육을 노출 하 여 최소한의 해 부와 발기 기능에 관련 된 구조를 부상 penile cru는 cannulated 수 있습니다. 리프팅 하 고 건조, 필요 없이 CN의 반복된 자극 전극 신경 복합물을 125 µ m 바이 폴라 실버 전극과 생체 실리콘 접착제를 사용 하 여 달성 되었다. 이 방법은 스트레칭과 신경 건조를 줄여 neuropraxia을 방지 하 고 전기 누설을 negating와 대체 통로의 자극을 방지 신경의 완전 한 격리를 제공 합니다.

서론

Vivo에서 연구 실험 동물에서 발기 기능에1의 선구적인 실험적인 작품으로 1863 년에 시작 했다. 통해 골반 신경의 개에 있는 증가 ICP를 유도 하기 위해 사용 되었다. 20 세기에 걸쳐 비슷한 실험 프로토콜은 개, 원숭이, 고양이, 토끼 같은 더 큰 동물에 사용 되었다. 쥐의 발기 기능을 평가 퀸 란 외. 19892에 의해 처음 개발 되었다. 메서드 수정 고 여러 다른 그룹34업데이트 이후는. 오늘, 쥐는 가장 널리 사용 되는 동물 모델 발기 부전의 병리학을 공부 하 고 새로운 치료 옵션을 평가 대 한. 절차의 주요 단계는 ICP에 있는 증가 유도 하 경 동맥 측정 ICP, penile cru cannulation 및 CN의 자극에에서 라인을 사용 하 여 조직의 혈압 기록 포함 됩니다. 여러 연구자 모델 정제는, 비록 그 재현성 유지 문제, 그리고 가변 결과 다른 실험실에 의해 보고 되었습니다. 여러 함정 아직도 지속 한다.

이전 기사5,6,7,,89,10 동굴 몸 cannulation 위한 성 기의 degloving로 전체 성 기 노출의 사용을 설명 합니다. 이것은 조작으로 최적의 접근 하 고 파괴 해 부 구조, 발기 기능에 필수적인 부상 발생. CN의 해 부 잘 설명된10,11, 했지만 신경의 자극 실험 결과 영향을 미칠 수 있는 여러 요인으로 인해 최적입니다. CN 자극 기술은 신경 주위 위치 후크 바이 폴라 전극에 당기 및 건조 각 자극 하기 전에 신경 주위 조직에서 신경 운동 포함 됩니다. 이 신경 손상 및 전기 전류 누설, 저하 응답 또는 대체 경로 예를 들어, 골반 바닥 근육, 방광의 자극을 통해 ICP에 거짓 증가 그리고 위장의 다양 한 학위를 이어질 수 있습니다. 로12. 이러한 모든 요소는 재현성을 제한합니다.

우리의 연구 기간 동안 우리는 깊이 마 취의 종류는 ICP에 심대한 영향을 미칠 다는 것을 관찰. 사용 하는 마 취약은 나트륨 pentobarbital, 케 타 민/xylazine 또는 케 타 민/midazolam 주입, 또는 isoflurane/산소 흡입.

여기 우리가 간단한 수술 방법에 설명 하 고 실험 프로토콜의 표준화 지원 데이터를 제공.

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프로토콜

동물 기관 지침에 의하여 남쪽 덴마크의 대학 동물 보호 시설에 보관 되어 있었다. 모든 동물 실험 관리 및 실험 동물의 사용에 대 한 국립 보건원의 가이드에 따라 실행 되었다. 이것은 급성, 비 생존 수술 절차입니다.

1. 튜빙, 전극, 및 수술에 대 한 악기의 준비

  1. 다음 microsurgical 악기를 사용 하 여: 수술가 위, 각도 마이크로 위, 조직 집게, 뒤 몽 # 7의 쌍 및 #5 곡선된 마이크로 집게, 마이크로 바늘 홀더, 및 견인 기.
    참고: 이것은 급성 절차, 악기 할 살 균 될 필요가 없습니다. 사용 후, 청소 하 고 70% 에탄올과 팁을 닦아냅니다.
  2. 70% 에탄올에 튜브를 담근 다 고 다음 살 균 0.9% 물을 사용 하기 전에 100 U/mL 헤 파 린과 NaCl. 튜빙 시스템으로 기포를 도입 하지 않으려면 가득 남겨 주세요.
  3. ICP 측정에 대 한 카 테 터를 만들기 위해 폴 리 에틸렌 (PE)-50 튜브의 20-30 cm 길이 조각 잘라. 튜빙 꺾는 압력을 줄이기 위해 가능한 한 짧게 인지 확인 합니다.
  4. 바늘 중간에 중단 될 때까지 한 무 균 24 G 바늘 사이드-투-사이드 벤드. 경사 penile cru로 삽입에 대 한 PE 튜브의 선단부를 조각을 연결 합니다. 다른 절반 압력 트랜스듀서에 대 한 연결 허브에 삽입 합니다. Heparinized 염 (100 U/mL)로 시스템을 채우십시오.
  5. 바이 폴라 테 플 론 코팅된 전극 수 있도록, 컷된 2 125 µ m은 동등한 길이 전선. 테이프의 조각을 사용 하 여 테이블의 가장자리에 철사를 연결 하 여 함께 스레드 합니다. 그 후, 검은 접시 전극을 연결 합니다.
  6. 테 플 론에 작은 절 개를 만들고 전극의 끝에서 테 플 론 코팅의 4-5 m m 길이 #5 마이크로 집게를 사용. 메스 칼의 무딘 가장자리 끝 여 걸 만들고 심지어 길이를 메스로 팁을 잘라.
  7. 전극 끝이 약간 검은 접시의 가장자리 위쪽으로 가리키는 후크 확장 테이프. 10 s 하 고 포장 접착제 거품 후크 로부터 1-2 mm 전극 주위에 대 한 플라스틱 접시에 실리콘 접착제를 혼합.
  8. (그림 1) 사용 하기 전에 약 5 분 동안 건조 하실 수 있습니다. 스트립은 자극에 대 한 연결 허용을, 다른 끝에 긴 섹션에서 테 플 론.
    참고: 다시는 선단부에 후크를 하 고, 함께 전극 여러 번 재사용할 수 있습니다.

2입니다. 동물의 준비

  1. 동물을 마비, 후 복 부, 목, 및 회음부의 아래쪽 절반을 면도. Povidone-요오드 세 번 뒤 70% 알코올로 동물 스크럽. 부정사 위치에 온수 외과 패드에 쥐를 놓습니다. 수 의사 눈 연 고를 적용 하 고 마 취 코 콘 캐리어로 2.5 %isoflurane 및 0.8 L/min 산소로 전환.
    참고: Isoflurane 마 취의 수락 가능한 수준을 달성 하기 위해 산소의 수준을 조정 합니다.

3. presurgical 준비

  1. 운영 현미경 전체 수술 절차를 수행 하십시오: 20 X 3.15 X에서에서까지 확대는 충분. 장갑을 사용 하 고는 수술을 통해 깨끗 한 환경을 유지. 장소는 드 레이프에 쥐입니다.

4. Ischiocavernosus 근육 ICP 측정에 대 한 해 부

  1. 메스, 바로 위를 사용 하 여 및 Dumont #7 곡선 1 cm 수직 수 있도록 마이크로 겸 중간 선 경의 기지의 수준에서 시작 하 고 확장 하향 (그림 2A)에 피부 절 개 5 m m 옆. 면봉을 사용 하 고 신중 하 게 음 낭 (그림 2B)에 근 막 측면을 분리. 근 막 해 부, 후 견인 기를 부착 하 고 목화-밀고-스왑 ischial tuberosity (그림 2C)를 찾을 수와 함께 만져.
  2. Ischiocavernosus 근육 시각까지이 이때의 지방 조직 중간을 통해 해 부 (그림 3A). 뒤 몽 #7 곡선된 마이크로 집게의 쌍을 사용 하 여 고 경도 근육을 분리. Tunica albuginea 밝은 흰색 구조 (그림 3B)으로 표시 됩니다. Using 마이크로 집게와 마이크로 시저, 적절 하 게 그것의 과정 (그림 3C)를 보러 tunica albuginea 노출.
  3. 시스템 설정의 교정, 후 penile cru (그림 4)를 병렬 실행 하는 회음부에 피부를 통해 튜브를 삽입 합니다. 자리에 라인을 두고 절 개를 염 분으로 촉촉한 유지.

5. CN 자극에 대 한 해 부

  1. 2cm 낮은, 중간 피부를 사용 하 여, 첫째, 메스, 그리고 똑 바른가 위 및 마이크로 집게의 쌍을 통해 복 부 절 개를 확인 합니다. 교육에 따라 근 막 통해 일치 하는 절 개를 만드는 알바와 기본 근육 조직을 노출 방광과 전립선.
  2. 견인 기를 사용 하 여 좋은 노출을 달성. 주요 골반 신경 절 (MPG)의 명확한 시각화를 지방 조직에서 전립선을 목화-팁 면봉을 사용 하 여 및 CN, 전립선 (그림 5)의 dorsolateral 부분에서 실행.
  3. MPG와 CN의 시각화, 후 신중 하 게 각 마이크로 위 (그림 6a) 2-5 m m는 MPG에 말 초 신경 overlying 근 incise. #5 마이크로 집게를 사용 하 여, 신경의과 4 m m 긴 부분 (그림 6b), 무료 밑 양쪽에 조직 확산와 신경 (그림 6c)에서 9-0 봉합을 슬라이드.
  4. 신경 신경 (그림 7b) 주위 양극 전극의 갈고리의 배치를 촉진 하기 위하여 봉합 (그림 7a)의 도움으로 약간 상승 합니다. 보조 믹스는 인슐린의 팁 2-구성 요소 실리콘 접착제 신경 5 미 드라이 바늘 갈고리와 신경 (그림 7 c, d) 주변 지역에 접착제를 적용 하자. 접착제를 건조 수 있도록 약 1 분 동안 전극에 약간 당겨서 신경 높은 유지.
  5. 견인 기, 어떤 철수 또는 전극의 왜곡을 피하기 위해 오른쪽에 견인 기 제외를 제거 합니다. 절 개를 통해 식 염 수에 담가 염 분 및 누워 거 즈와 노출 된 장기를 젖은.

6. 동굴 몸 Cannulation ICP 측정에 대 한

  1. 견인 기를 사용 하 여 tunica albuginea의 시각화를 복원 합니다. Cru를 왜곡할 것 이다 그것으로 견인 기 ischiocavernosus 근육에 연결 되었는지 확인 합니다.
  2. 바늘을 연결 하 고 tunica albuginea에 도입 하기 전에 heparinized 염 분으로 튜브를 플러시. 계속 뻗어, Dumont #7 곡선된 마이크로 집게를 사용 하 여 한 손으로 tunica albuginea (비 지배적인), 삽입 지점에 원심 tunica albuginea 및 overlying 근육의 나머지 부분을 잡고. 다른 지배적인 손에 바로 마이크로 집게와 바늘을 잡고 고 있는지 그것을 소개 하 동굴 몸 (그림 8)의 코스와 함께 병렬.
  3. 동굴 몸으로 바늘 5-8 밀리미터를 밀어. 튜브를 플러시를 누르고 cru에 테스트 라인 (그림 9). 아무 누출 확인 합니다. 테이프 라인에 실수로 당기를 방지 하기 위해 테이블에 튜브를 고정 시킵니다. 견인 기를 제거 합니다.

7입니다. CN의 자극

  1. 녹음 프로그램 (예를 들면, 스파이크 2) 두 intracavernous 고 평균 동맥 압력 기록 지속적으로 실행.
  2. CN 자극에 대 한 자극 (예를 들어, SD9 잔디 악기, 재료의 표참조)에 다음 매개 변수를 설정: 1.5 mA, 16 Hz, 3 V, 전압 및 펄스 폭의 1 분의 최소 자극의 5 양 적용 50 s에서 주파수에 현재 stimulations 사이 휴식.
    참고: 첫 번째 stimulations 저하 응답 (그림 10)에 보통 결과.

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결과

사용 권장된 자극 설정으로이 프로토콜의 흡입 마 취와 isoflurane 2.0% 산소 0.8 L/min, 생성 해야 결과 그림 11 및 그림12와 같이 있는 여러 다시 다시 75-80 mm Hg. 그림 13 사이 stimulations 보여 줍니다 같은 안정적인 응답 응답 20 분 자극 73-77 m m Hg. ICP 측정에 대 한 테스트 라인에서 안정적인 튜브 홍 조와 cru (그림 9)에 활용 하 여. 신속한 응답 기준선을 다시 잘 배치 라인의 특징 이다. Tunica albuginea의 무결성이 손상 되 면 테스트는 낮은 피크 압력 및 기준선 홍 조 및 도청, 후에 다시 느린 응답 및 감소 응답 때 발생할 자극 (

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토론

이 연구의 주 목표 penile cru cannulation ICP 녹음의 단순화 된 수술 기법 및 통해에 대 한 CN의 격리를 설명 했다. 수술을 단순화 하는 ICP의 증가의 재현 녹음 CN 자극 제공 동굴 시체의 해 부에 대 한 수정 도입 했습니다. 1 cm 수직 피부 절 개를 만져 서 ischial tuberosity 지침으로 사용 하 여 음 경의 기지에 측면 우리 달성 ischiocavernosus 근육과 tunica albuginea의 좋은 노출을. 이 절차는 빨리 (15 분이 하) 보다는 문학과 원인 최소한의 조직 장애2,3,4에 설명 된.

CN의 현재 사용 된 기술은 포함 연결, 해제, 그리고 각 통해 전에 CN의 건조 적용된10. 이 기술은 조건 각 자극에 ...

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공개 사항

저자는 공개 없다.

감사의 글

저자 아무 승인 있다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
Adson 집게Fine Science Tool11006-12
Dumont #7 집게Fine Science Tool11271-30
Dumont #5 집게Fine Science Tool11273-20
ToughCut Mayo 가위Fine Science Tool14110-15
미니어처 Vannas 스프링 가위Fine Science Tool15006-09
울트라 파인 헤모스탯파인 사이언스 도구13020-12
Crile 헤모스탯파인 사이언스 툴13004-14
Kwik-Sil 접착제세계 정밀 기기KWIK-SIL
테플론 코팅 실버 와이어 0.125 mm세계 정밀 기기AGT0510
탄성 와이어 견인기맞춤 제작
메스 블레이드Fine Science Tool10023-00
PE-50 튜빙Warner Instruments64-0753
23 G 바늘Kruuse121272
SD-9 사각 펄스 자극기Somatco1077/183
혈압 변환기 및 케이블World Precision InstrumentsBLPR2
Raucotupf 면 팁 애플리케이터Lohmann-Raucher11966
Pro-ophta 안구 스틱Lohmann-Raucher16515
NaCl 0,9 % 100 mL지역 약국
헤파린지역 약국
25 mL 주사기Odense 대학 병원
수의사 안연 - Viscotears지역 약국
은선 Science Products GmbH, 하이델베르크, 독일
실리콘 접착제 Kwik-Sil, World Precision Instruments, 미국
플로리다주 새러소타

참고문헌

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