방법 논문

Deformability 및 Ektacytometry에 의해 혈액이 질 레드 셀 측정

DOI:

10.3791/56910

⸱

2018년 1월 12일

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pediatrics, Saint Louis University School of Medicine, 2Molecular and Clinical Nutrition Section, Digestive Diseases Branch, National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney Diseases, 3Molecular and Clinical Hematology Branch, National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney Diseases, 4Sickle Cell Branch, National Heart, Lung and Blood Institute, National Institutes of Health, 5Edward A. Doisy Department of Biochemistry and Molecular Biology, Saint Louis University School of Medicine, 6Red Cell Physiology Laboratory, New York Blood Center

* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

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여기 선물이 레드 셀 deformability 및 세포질이 ektacytometry에 의해 측정 하는 기법. 이러한 기술은 붉은 세포 deformability의 일반적인 조사 및 혈액 질병 낫 세포 빈 혈 등 혈액 순환에 견고 하 고 변형 세포의 존재에 의해 특징의 특정 조사에 적용 됩니다.

초록

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감소 레드 셀 deformability 여러 가지 장애의 특징입니다. 어떤 경우에 결함이 deformability의 범위는 질병의 심각도 또는 심각한 합병증의 발생을 예측할 수 있습니다. Ektacytometry를 사용 하 여 레이저 회절 viscometry 적혈구 증가 전단 응력 또는 적용된 전단 응력의 상수 값에 삼투성 기온 변화도의 deformability를 측정. 그러나, 직접 deformability 측정은 견고 하 고 변형 세포의 존재에 의해 특징은 이기종 혈액을 측정 하는 때 해석 하기 어려운. 이것은 전단 응력 및 명백한 deformability에 과장 된 감소에 의해 표시 하는 왜곡 된 회절 패턴에서 결과 제대로 정렬 경직 된 세포의 무 능력 때문. 왜곡의 정도 측정 혈액에서 적혈구의이 성분의 지표를 제공합니다. 낫 세포 빈 혈,이 헤모글로빈 농도는 적혈구의 헤모글로빈 구성 반영 경직 된 셀의 비율으로 상관 된다. Deformability 측정, 삼 투 그라데이션 ektacytometry 삼 투 취약성 및 적혈구의 수 분 상태에 대 한 정보를 제공 합니다. 이러한 매개 변수는 또한 겸 상 적혈구 환자에서 적혈구의 헤모글로빈 구성 반영. Ektacytometry 세포의 인구에 있는 deformability를 측정 하 고, 따라서, 정보를 제공 하지 deformability 또는 개별 적혈구의 기계적 특성에. 관계 없이, 여기 설명의 목표 deformability 및 혈액의 세포이 측정을 위한 편리 하 고 안정적인 방법을 제공입니다. 이러한 기술을 시간적 변화, 질병의 진행 및 여러 가지 장애에 치료 적 개입에 대 한 응답을 모니터링 하는 데 유용 수 있습니다. 낫 세포 빈 혈 하나 잘 성격을 나타낸 예입니다. 레드 셀 deformability이 측정의 관심은 다른 잠재적인 장애 혈액 저장, 당뇨병, 변형 체 감염, 철 분 결핍, 그리고 막 결함으로 인해 용 anemias 포함 됩니다.

서론

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Ektacytometry 레드 셀 deformability 전단 응력 (파스칼 (Pa)에서 측정 되는) 또는 중간 osmolality 중단에 변경에 대 한 응답에서의 편리한 측정을 제공 합니다. 레드 셀 deformability의 관련 매개 변수는 최대 신장 인덱스 (이 최대), 증가 전단 응력 및 전단 응력 ½ 레드 셀의 최대 deformability (SS ½)의 측정, 절반 최대한 달성 하는 데 필요한 전단 응력 deformability입니다. 1 삼 투 그라데이션 ektacytometry 여러 가지 유익한 매개 변수가 있다. 이러한 신장 인덱스 최소 (이 분), 표면 볼륨 비율의 측정 (O 분) 발생을 osmolality 등 삼 투 취약성의 측정입니다. 이 맥스와는 (O (이 최대)) 발생 osmolality 막 유연성 및 셀 영역에 정보를 제공 합니다. 삼투성 기온 변화도의 마 팔에서 절반 최대한 신장이 하이퍼로 표현 됩니다. 이 하이퍼와 osmolality를 발생, O 하이퍼, 헤모글로빈 농도 의해 결정 되는 붉은 세포의 세포내 점성에 대 한 정보를 제공 합니다. 2 , 3 이기종 혈액에서 측정 deformability sickled ....

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프로토콜

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이 연구에 모든 과목 했다 헬싱키의 선언 및 국가 학회 건강 기관 검토 위원회의 승인 프로토콜에 따라 서 면된 동의.

1.는 ektacytometer 설정

  1. 낮은 높은 osmolar polyvinylpyrrolidone (PVP) 솔루션을 청소 솔루션에서 튜브를 연결 합니다. 높은 osmolar 솔루션을 낮은 osmolar 솔루션 0 osmolar 튜브와 500 osmolar 튜브를 연결 하는 주의 해야 합니다.
    참고: 7.25-7.45 25 ° C에서의 pH와 점성 37.0 ±에서 27.0와 33.0 centipoise (cP) 사이 낮은 osmolar PVP 솔루션 킬로그램 (mOsm/kg) 당 35 및 55 milliosmoles 사이 osmolality 있어야 0.5 ° c. 높은 osmolar PVP 솔루션 37.0 ° 764, 804 mOsm/kg, 25 ° C에서 7.25-7.45의 pH와 27.0 ~ 33.0 cP의 점도 측정 사이 osmolality 있어야 0.5 ° c.
  2. 컵에 밥이 완전히 인하 됩니다 확인 하십시오. 소프트웨어를 시작 하 고 프라임 컴퓨터 (하드웨어 확인| IO 계측). 악기 못쓰게 주기 완료 허용. 주기가 완....

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결과

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이 원고에 설명 된 ektacytometry 결과 어떤 조건 든 지에 레드 셀 deformability 측정을 사용할 수 있습니다. ektacytometer의 일반 설정의 회로도 그림 1에 표시 됩니다. 적혈구의 균질 인구는 그림 2와 같이 신장 인덱스를 계산 하는 데 사용할 수 있는 전단 응력을 증가에 대응 한 타원형 회절 패턴을 생산할 예정 이다. 회절 패턴 왜곡 이기종 혈액 샘플 엄밀한 적혈구 변형 세포와 제대로 정렬 및 구형 패턴 오버레이 다이아몬드 결과 타원 모양의 회절 패턴을 생성 하지 않는 때문에 발생 합니다. 이 왜곡 된 패턴은 점점 감지 카메라 이득 큰 회절 패턴 크기에 그림 3과 같이 생성 하 조정. 동종 혈액 인구, 건강 한 지원자에서 볼 때 다른 회절 크기 측정 다른 deformability.......

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토론

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Ektacytometry 기법 설명 간단 하 고 잘 자동화, 유효 하 고 재현 가능한 결과 보장 있습니다. 그럼에도 불구 하 고, 몇 가지 중요 한 단계가 존재 한다. 혈액의 적절 한 온도 제어는 중요 하다. 8 시간 이상 실 온에서 보관 SS ½에 영향을 미칠 수 있습니다 값. 34 기계의 온도 37 ° C에서 안정적인 확보도 중요 하다, 중단 매체의 점도 온도 의존. 혈액 않는 이들은 관심의 실험적인 매개 변수 감소 deformability 비 산소 또는 부분적으로 산소 샘플에서 발생을 피하기 위해 완벽 하 게 산소 되어야 한다. 35 의 관점에서의 계측, 악기의 적절 한 청소 중요 하다 되도록 거기 아무 PVP 튜브 또는 밥의 진입점에 남은 그것 건조 및 블록 유체 흐름에 따라 악기를 통해 강화 됩니다. 이러한 세부 사항에 주의 정확한 결과 홍보 하 고 좋은 실행 조건에 악기를 계속 것입니다.

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공개 사항

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저자는 공개 없다.

감사의 글

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이 작품은 교내 프로그램 연구는 국립 연구소의 당뇨병, 소화 및 신장 질환 및 국가 심 혼, 폐 및 혈액 연구소 건강의 국가 학회에 의해 지원 되었다. 본 계약 작가의 전적인 책임 하 고 반드시 국립 보건원의 공식 의견을 대표 하지는 않습니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
LoRRca MaxSis 표준 버전메카트로닉스LORC109000
LoRRca MaxSis Osmoscan메카트로닉스LORC109001
폴리비닐피롤리돈 용액(PVP) 0mOsm메카트로닉스QRR030910
폴리비닐피롤리돈 용액(PVP) 500mOsm메카트로닉스QRR030930
폴리비닐피롤리돈 용액(PVP) 5mL 바이알메카트로닉스QRR030901
X 클린메카트로닉스QRR010946
P1000 MilliporeSigmaZ646555
P200MilliporeSigmaZ646547
P200 필터 팁MidSciAV200-H
P1250 필터 팁MidSciAV1250-H
KimwipesMidSci8091
1.5 mL 에펜도르프 튜브MidSciAVSS1700
15 mL 원추형 바이알MidSciC15R

참고문헌

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Bessis, M., Mohandas, N., Feo, C. Automated ektacytometry: a new method of measuring red cell deformability and red cell indices. Blood Cells. 6 (3), 315-327 (1980).
  2. Clark, M. R., Mohandas, N., Shohet, S. B. Osmotic gradie....

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재인쇄 및 허가

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