Method Article

마우스에 있는 기종의 평가를 위한 일정한 압력의 밑에 폐 고정

DOI:

10.3791/58197

⸱

September 26th, 2019

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1Department of Respiratory Medicine, Juntendo University Graduate School of Medicine, Juntendo University, 2Pharmaceutical Planning Group, Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

여기에 제시된 폐 고정을 위한 유용한 프로토콜은 기종의 마우스 모델에서 폐 견본의 조직학적 평가를 위한 안정한 조건을 만드는. 이 모델의 주요 장점은 폐 붕괴 또는 디플레이션없이 동일한 일정한 압력으로 많은 폐를 고정 할 수 있다는 것입니다.

Abstract

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폐기종은 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD)의 중요한 특징입니다. 기종 마우스 모형을 관련시키는 연구 결과는 폐의 믿을 수 있는 조직학 견본을 생성하기 위하여 최적 폐 고정을 요구합니다. 주로 공기와 조직으로 구성된 폐의 구조 구성의 특성으로 인해 고정 과정에서 붕괴또는 수축 될 위험이 있습니다. 다양한 폐 고정 방법이 존재하며, 각각은 자신의 장점과 단점을 가지고 있습니다. 여기에 제시된 폐 고정 방법은 기종 마우스 폐 모델을 사용하여 연구를 위한 최적 조직 평가를 가능하게 하기 위하여 일정한 압력을 이용합니다. 주요 장점은 한 번에 동일한 조건으로 많은 폐를 고칠 수 있다는 것입니다. 폐 표본은 만성 담배 연기 노출 마우스로부터 수득된다. 폐 고정은 일정한 압력의 생산을 가능하게 하는 특수 장비를 사용하여 수행됩니다. 이 일정한 압력은 합리적으로 팽창 된 상태에서 폐를 유지합니다. 따라서, 이 방법은 담배 연기 유발 경증 기종을 평가하기에 적합한 폐의 조직학적 표본을 생성한다.

Introduction

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COPD는 사망의 주요 한 세계적인 원인 중 하나입니다1. 담배 연기는 COPD의 가장 중요한 원인이지만 병인의 메커니즘은 불완전하게 정의되어 있습니다. COPD는 공기 흐름의 점진적 제한 및 폐의 비정상적인 염증 반응을 포함하여 두 가지 주요 특성을 보여줍니다. 폐기장애는 COPD 환자의 폐에서 빈번하게 발생한다2. 폐기종의 병리학적 발견은 폐포 벽 파괴3을특징으로한다. 여러 동물 종은 생체 내에서 COPD 모델(즉, 개, 기니피그, 원숭이 및 설치류)을 생성하는데 사용되어 왔다.4. 그러나, 마우스는 COPD 모델의 구성에 가장 일반적으로 사용되고 있다. 이는 저렴한 비용, 유전자 변형 능력, 광범위한 게놈 정보 가용성, 항체의 가용성 및 다양한 마우스 균주를 사용하는 능력을 포함하여 많은 장점을 갖는다5. 현재, 인간 COPD의 전체 기능을 모방할 수 있는 마우스 모델은 없다; 따라서, 개별 연구원은 특정 COPD 연구에 가장 적합한 모델을 선택해야합니다6. 폐기종 마우스 모델은 현재 이용 가능한 많은 COPD 마우스 모델 중 하나입....

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Protocol

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다음 방법은 준텐도 대학 의과 대학의 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다. 2006년 6월 1일, 일본 과학위원회의 동물 실험의 적절한 수행에 대한 지침이 준수되었습니다. 이 방법에는 1) 마우스 해부, 2) 폐 퇴출 및 3) 특수 장비에 의한 폐 조직의 고정의 세 가지 주요 단계가 있습니다. 전형적으로, 폐 시편은 고정12,15,16,17,18의48 시간 후에 박베제처리된다.

1. 마우스 해부

  1. 마우스의 체중을 측정한 다음 투여할 펜토바르비탈의 양을 결정합니다.
  2. 체중의 70 mg/kg의 복용량에 펜토 바르 비탈 내부를 주입하고 발가락 핀치에 대한 반응이 없는 상태에서 마취를 확인하십시오.
  3. 피부와 근육에 침투 할 때까지 45 ° 각도로 바늘을 주입하십시오. 플런저를 그리고 공기 진공을 확인한 다음 펜토바르비탈을 주입합니다.
  4. 반사 운동이 없는 상태에서 마취를 확인하십시오.

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Results

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앞서 설명한 바와 같이, 확장된 일정한 압력을 생성하는 특수 장비는 세 부분으로 나눌 수있다(도 3A). 하부는 폐 샘플을 삽입하는 지점입니다(도4A). 폐는 캐뉼라(20 G)를 통해 3방향 스톱 콕을 이용하여 포르말린 흐름의 끝까지 연결된다(도4B). 압력은 하부 용기와 상부 용기 사이의 고정제의 상이한 표면 수준에서 생성된다(그림5). 압력 차이는 25 cmH2O; 그러나 높이 조절 노브를 사용하여 압력은 25-30 cmH2O 범위 내에서 조정할 수 있습니다(그림 5). 펌프는 튜브를 통해 하부 및 상부 용기를 연결합니다(그림

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Discussion

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여기에 제시 된 설치류 폐에 대한 고정 절차는 소설이 아닙니다. 그러나 이 시스템에는 몇 가지 장점이 있습니다. 첫째, 한 번에 동일한 조건으로 많은 폐 (최대 20)를 해결할 수 있습니다. 독성 병리학 의 사회는 중력 주입을 위한 압력이 22-25 cmH2O22에서변화한다는 것을 말합니다. 특히, 여러 연구는 25 cmH2O13, 19,23,24,25,26,27의 압력에서 폐 고정을 수행했습니다. , 현재 시스템

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Disclosures

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저자는 선언할 경쟁적인 이해관계가 없습니다.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

이 작품은 JSPS KAKENHI 교부금 번호 26461199 (T. 사토)와 환경 및 성별 특정 의학 연구소, 준텐도 대학 의학 대학원, 그랜트 번호 E2920 (T. 사토)에 의해 부분적으로 지원되었습니다. 이 파동은 현재의 방법의 설계와 원고 작성에 아무런 역할이 없었다.

....

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
10 % 포르말린 (포르말린 중성 완충 용액)Wako060-01667
구부러진 집게HammacherHSC187-11
캐뉼라, 크기 20GTerumoSR-FS2032
캐뉼라, 크기 22GTerumoSR-OT2225C폐
HammacherHSC184-10
Kimtowel일본 종이 크레시아 (Kimberly Clark)61000
Kimwipe일본 종이 크레시아 (Kimberly Clark)62011
하부 용기 (아크릴 유리 재료)도쿄 사이언맞춤형압력 장비 부품
롤러 펌프닛신 사이언티픽 코퍼레이션NRP-75폐 배출 펌프
기계 롤러 펌프 RP-2000Eyela (도쿄 Rikakikai Co. Ltd)160200압력 설비 펌프
실리콘 튜브 Ø 9 mmSansyo94-0479압력 설비 부품
Somnopentyl (64.8 mg/mL)Kyoritsu SeiyakuSOM02-YA1312펜토바르비탈
나트륨 수술용 가위HammacherHSB014-11
봉합사, 크기 0NescosutureGA01SW
주사기, 1mL테루모SS-01T
주사기, 바늘 테루모SS-01T2613S
주사기 10mL테루모SS-10ESZ
삼방향 마개테루모TS-TR1K01
상부 용기(아크릴 유리 소재)도쿄 사이언맞춤형압력 기기 부품
겸자 스 스

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Vogelmeier, C. F., et al. Global strategy for the diagnosis, management, and prevention of chronic obstructive lung disease 2017 report. GOLD Executive Summary. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 195 (5), 557-582 (2017).
  2. Pauwels, R. A., Rabe, K. F.

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