왼쪽된 심 방 협 유발 쥐에서 그룹 2 폐 동맥 고혈압과 폐 정 맥 Arterialization

요약

왼쪽된 심 방 협 (라스)은 그룹 2 폐 고혈압 (PH) 및 폐 정 맥 arterialization 기본 메커니즘 연구는 소설 외과 기술입니다. 여기, 선물이 폐 정 맥 arterialization를 일으키는 원인이 되 고 쥐에서 PH를 알 맞도록 하는 티타늄 클립을 사용 하 여 좌 심 수축 하는 프로토콜.

초록

승 모 판 협 착 증 유발 폐 정 맥 arterialization 및 그룹 2 폐 고혈압 (PH)의 기계 장치는 명확 하지 않습니다. 그룹 2의 설치류 모델이 없을 PH, 승 모 판 협 착 증 (MS), 질병 메커니즘 및 잠재적인 치료 전략의 조사를 촉진 하기 때문. 우리는 폐 정 맥 혼잡 유발 폐 정 맥 arterialization 및 그룹 2의 새로운 쥐 모델 제시 왼쪽된 심 방 협 (라스)에 의해 발생 하는 PH. 라스는 반 폐쇄 티타늄 클립을 사용 하 여 왼쪽된 아 트리 움 constricting에 의해 이루어집니다. 라스 수술 후 심장 초음파에 2.0 m/s 모델 보다 큰 transmitral 유입 속도와 같거나 쥐 점차적으로 폐 정 맥 arterialization 및 개발 그룹 2는 8-10 주 동안 PH. 이 프로토콜에서 우리 라스 수술을 수행 하는 방법의 단계별 절차를 제공 합니다. 제시 라스 쥐 모델 인간에서 MS를 모방 하 고 폐 정 맥 arterialization의 기본 분자 메커니즘 연구 및 그룹 2에 대 한 치료의 전 임상 평가 대 한 유용 PH.

서론

이 문서의 목적은 쥐에 라스 수술을 수행 하는 방법의 단계별 절차를 설명 하는 것입니다. 수술로 유도 라스 밀접 하 게 싫어 하지 MS와 오호 왼쪽된 아 트리 움¹기계적인 방해의 창조를 포함 하는 인 간에 있는 triatriatum. 종종 왼쪽된 심 실 (LV) 유입의 방해 폐 정 맥 순환의 정체 원인과 환자는 점차적으로 PH를 개발 합니다. 세계 보건 기구 분류 PH 왼쪽된 심장 질환으로 인해 그룹 2, PH^2,,34의 가장 널리 퍼진 그룹입니다. 왼쪽된 심장 질환을 가진 환자에서 PH의 진단이 관련 된 1 년 표준화 사망률⁴칠 배로 증가 보다는. 현재는 그룹 2에 대 한 승인된 없이 치료 내부 치료 외에도 PH 왼쪽 심장 질환 (예를 들어, 수술 stenotic 승 모 판 대체). 그러나, 심지어 효과적인 승 모 판 대체 완전히 MS⁵환자의 절반 최대에 PH를 해결 되지 않습니다. 이 영구 PH 제대로 이해 불리 한 폐 혈관, 개장 예정 이다. 따라서, 동물 모델은 불리 한 폐 혈관 개장의 그룹 2에에서 근본적인 분자 메커니즘에 대 한 우리의 이해를 강화 하는 중요 한 산도.

그룹 2 박사 관상 동맥 결 찰^6,7 의 몇 가지 동물 모델 이며 가로 대동맥 구간^8,,910 설치류에는 가장 일반적으로 사용 되는 그룹 2 PH 동물 모델. 이러한 모델의 주요 단점은 라스베가스, 그룹 2 PH 연구의 결과 해석 하기 어려운 게의 참여. 대조적으로, LV 라스 모델에 그대로 남아 있습니다. 또한, 라스 모델은 10 주 기간¹¹이상 PH 느리고 점진적 개발에 결과 때문에 임상 관련. 인간에서는, MS는 transmitral 도플러 흐름 속도 2.0 m/s¹¹, 보다 큰 고 우리 또한를 사용 하 여이 번호는 컷오프로 라스 수술 상당한 협 생산 여부 결정 중요 한 것으로 간주 됩니다. 또한, 라스 모델 생성 가벼운 또는 적당 한 산도, 비록 인간의 환자, 즉 intrapulmonary 정 맥 arterialization¹¹의 개발에에서 비슷한 특성 더 변경 보여 줍니다. 라스 쥐 모델은 소설과 보존 LV 기능 임상 관련 그룹 2 PH 모델. 그것은 영구적인 폐 혈관 개장, 분자 표적 식별 및 테스트 그룹 2에 대 한 새로운 치료의 이상 공부 적합 PH.

프로토콜

라스 실험 프로토콜 지케이 대학 학교의 의학 동물 관리 위원회 및 대학 연구 윤리 위원회 (프로토콜 #2015-118)에 의해 승인 되었습니다.

1. 수술 준비

1. 동물 시설에 도착 한 후 5 주 된 남성 Sprague Dawley 쥐 작업 전에 그들의 새로운 가정에 적응 1 주 150 ~ 200 g 사이 제공 합니다.
2. 압력가 마로 소독 하 여 수술을 하기 전에 다음과 같은 장비를 준비: 1)는 작은 동물 인공 호흡기, 2)는 마 취 기계, 3)는 삽 관 법 키트 (쌍 hemostat 집게, 혀 억압 물 18 G angiocatheter의 구성된), 4) 수술 도구 ( 등 굽은 집게의 쌍, 스트레이트 집게의 쌍, 바늘 드라이버, 가슴 견인가 위, 5-0 monofilament 봉합, 클립 주걱, 중간 큰 클립, 23 G 가슴 튜브).
3. 메 마른 질문-팁 및 거 즈 출혈 다룰 준비가 있다.
4. 가 열 패드를 사용 하 여 수술 하는 동안 동물 몸 온도 약 37 ° C를 유지.

2. 마 취와 Endotracheal 삽 관 법

1. 2 L/min 방 공기 혼합 5 %isoflurane 유도 실에서 쥐를 anesthetize.
2. 삽 관 법, 이전 머리 면도기로 쥐의 가슴에 머리를 면도 하 고 좋은 머리를 제거 하는 제 모 크림을 적용 합니다.
3. 삽 관 법 이전 성공적인 마 취를 확인 하는 페달 반사를 확인 하십시오.
4. 문자열 앞 니를 연결 하 고 문자열 두 개의 핀을 확보.
5. Hemostat 집게로 쥐의 입을 열고 입에 혀 억압 물 삽입 합니다.
6. 보컬 코드 시각화 하 혀 억압 물 들어올립니다.
   참고: 보컬 코드를 시각화 하기에 쥐의 머리 지역에 강한 빛을 도움이 됩니다.
7. 18 G angiocatheter endotracheal 튜브, 기도에 넣은 다음, 신속 하 게, 연결할 테는 인공 호흡기.
8. 100 호흡/분의 호흡 속도와 그램 당 10 µ L를 해 볼륨을 설정 합니다.
9. 2% isoflurane 2 L/min 방 공기 혼합으로 마 취를 유지 합니다.

3입니다. 외과 사이트의 준비

1. 액체와 알코올 x3의 스크럽 교류 수술 사이트를 준비 합니다.
2. 주고 buprenorphine 0.01 mg/kg 피하.
3. 무 균 드 레이프와 쥐를 커버.
4. 성공적인 삽 관 법 및 마 취의 유지 보수 페달 반사를 확인 하십시오.

4. 왼쪽된 심 방 협 착 증 수술

1. 규칙 쥐의 왼쪽된 겨드랑이 아래 2 ㎝ 절 개 사이트를 표시 합니다.
2. 옆 가슴 벽 절 개가 위 왼쪽 2 cm를 확인 합니다.
3. 네 번째 및 다섯 번째 갈비뼈, 흉 입력까지 직선 및 곡선된 집게를 사용 하 여 사이 있는 근육을 구분 합니다.
4. 흉 강에 가슴 견인을 삽입 합니다. 직선과 곡선 겸 자 마음과 thymus의 직접적인 시각화를 얻을 수 있는 근육을 사용 하 여 계속 합니다.
5. Thymus 스트레이트 집게의 쌍으로 들어올립니다. 가 위의 쌍을 가진 마음을 덮고 thymus를 제거 합니다. 절단 또는 어떤 주요 혈관에 파고 하지 마십시오.
6. 신중 하 게 좌 심 실, 좌 심 방 부속 기 바로 아래의 표면을 통해 서 5-0 monofilament 봉합을 전달 합니다. 주요 관상 동맥을 통해 바늘을 통과 하지 마십시오.
7. 후에 봉합에 놓고 아무 중요 한 출혈은, 느슨한 매듭을 묶어.
8. 봉합 스레드를 올려 고 가슴에서 마음을 들어 앞으로.
9. 마음은 가슴에서 해제, 일단 신속 하 게 적용할 매체 큰 클립 왼쪽된 아 트리 움, 승 모 판 바로 위에.
   참고: 클립은 도중 왼쪽된 심 방 협 착 증을 일으키는 좌 심 곤란 하 게 하는 클립의 끝에와 함께 폐쇄.
10. 신속 하 게 다시 가슴에 심장을 넣어. 마음은 30 이상 가슴 밖에 확인 s.
11. 마음에 들어 하는 데 사용 하는 숙박 봉합을 제거 합니다.
12. 간단한 중단 된 패턴을 사용 하 여 5-0 monofilament 봉합으로 가슴을 닫습니다.
13. 가슴에 10 mL 주사기에 부착 된 23 G 가슴 튜브를 삽입 하 고, 가슴 벽 근육과 피부 간단한 중단 봉합 폐쇄와 함께 진행.
14. 첨부 10 cc 주사기, 그리고 다음, 풀 튜브를 사용 하 여 삽입 된 가슴 튜브를 어떤 공기, 혈액, 그리고 흉 막 유출 통해 밖으로 그립니다.
15. 간단한 중단 된 패턴을 사용 하 여 5-0 monofilament 봉합 된 피부 레이어를 닫습니다.
16. 주고 buprenorphine 0.01 mg/kg 피하.
17. isoflurane 해제 합니다.
18. 자발적인 호흡 관찰 후는 인공 호흡기를 분리 합니다.
19. Intubated 쥐를 유지 하 고 깨어났을 때까지 열 패드에 복구할 수 있습니다.
20. 안전 하 게 extubate 후 하나 이상의 다음 표지판은 /는 쥐 관찰: 쥐 그것의 4 팔 다리를 이동 시작, 그것은 righting 반사 차릴, 그것의 개 그 반사를 차릴 또는 자발적인 voiding 표시 됩니다.

5. 수술 치료

1. 매 8-12 h, 주고 buprenorphine 0.01 mg/kg 피하. Carprofen 5 mg/kg 피하 매일 2 일 동안 주어 집니다 이며, 다음, 필요에 따라 쥐 잘 주위를 이동 하지 않습니다 경우 처럼 보이는 고통에.
2. 에 게 정상적인 염 분의 5 mL 피하는 수술 직후 쥐 물 마 개, 즉시 수술 후에서 음주 하는 어려움이 있을 수 있습니다.

6. 심장 초음파로 좌 심 방 협의 성공 확인

1. LV 유입 속도 결정 하는 수술 후 2 주 transthoracic 심장 초음파를 수행 합니다.
2. 섹션 1에서에서 설명한 단계를 따라 쥐 anesthetize
3. 마 취 유도 후 2% isoflurane 2 L/min 방 공기 혼합으로 코 콘을 사용 하 여 마 취를 유지 합니다.
4. 쥐의 흉 벽 머리 면도기로 면도 하 고 제 모 크림을 사용 하 여 어떤 나머지를 제거.
5. 가슴의 왼쪽에서 5 번째 있는 공간 주위 심 혼의 정점에 초음파 프로브를 배치 합니다. 이동할 프로브가이 영역에서 좋은 4 상공 회의소 보기 얻을 때까지.
6. 승 모 판 고리 위에 펄스 파 도플러 모드를 사용 하 여 LV 유입 속도 측정 합니다.
7. 2.0 m/s 이상의 LV 유입 속도 8-10 주 후 라스 수술에 적당 한 폐 고혈압의 발전을 위해 필요 합니다.

7. 가짜 작업

1. 클립 (단계 4.9) 적용 제외 나이 일치 하는, 가짜 작동 제어 (SOC) 쥐를 만들려고 위의 모든 단계를 수행 합니다.

결과

고 라스의 효과 사용 하 여 심장 초음파, 수술 후 2 주 동안 확인 된다. 2.0 m/s, 4 상공 회의소 보기 측정 보다 큰 LV 유입 속도와 쥐 상당한 협 (그림 1)를 개발 하 고 안정적으로 적당 한 PH 및 폐 정 맥 arterialization 8-10 주 후 라스 수술 개발 간주 됩니다.

10 주 후 라스 수술, 라스 그룹에 쥐 표시 왼쪽된 심 방 확대 (그림 2B), 폐 혼잡 (그림 2E), 오른쪽 심 실 (RV) 압력 과부하 (그림 2F), 그리고는 폐 정 맥 흐름 증가 ( 그림 2 층

토론

라스 쥐가 이미 필드^12,13연구에서 상당한 관심을 받은 소설 그룹 2 PH 모델 이다. 두 개의 기존 그룹 2 모델, 즉 폐 정 맥 협 착 증 (PVS) 모델¹⁴, piglets, 그리고 supracoronary 대동맥 구간 (SAB) 쥐 모델^8,를 사용 하 여 비교^9,10, 라스 쥐 모델은 몇 가지 장점입니다. PVS 돼지 모델에 비해, 라스 쥐 모델 비용을 적게 생성 하 고 쥐에 수술은 돼지에는 보다 덜 복잡 한. 가장 일반적으로 사용 되 그룹 2 PH 동물 모델, 그룹 2의 이상 SAB 쥐 모델에 비해 PH 라스 모델에는 덜 SAB 모델에서 보다 복잡 왼쪽된 심 실 실패 개발 하기 전에 폐 발생 먼저 대동맥 밴...

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
5-0 프롤렌 봉합	존슨 & Johnson - Ethicon	8725H	HEMO-SEAL 기술 마취 기계를 사용한 폴리프로필렌 봉합
	Wakenyaku Co., Ltd.	BRTK-100A	에어 펌프 및 마취 기계
Angiocatheter 가이드와이어	자체 제작		10cm 가이드와이어를 1cc 주사기에 접착;
흉부 견인기	Natsume Seisakusho Co., Ltd.	F-2
흉관 23G	작		10cc 주사기에 23G 바늘 플러스 플라스틱 튜브
곡선 집게	나츠메 제작소 주식회사	A-14
발열 패드	Vivaria	MP-916-NV	체온을 섭씨 37도로 유지
Horizon 결찰 클립	Teleflex	REF 003200	크기 중
대형 Horizon 수동 부하 결찰 클립 애플리어 중대형 Horizon	Teleflex	REF 337085	결찰 클립 각진 턱, (20cm)
바늘 홀더	Natsume Seisakusho Co., Ltd.	MC-40
설치류 호흡기	CWE Inc	SAR-830/P	소형 동물 인공호흡기
가위	Natsume Seisakusho Co., Ltd.	B-12	스트레이트 가위가 이상적으로 라운드 팁
스트레이트 집게	Natsume Seisakusho Co., Ltd.	A-7
혀 압착기	Uchida Yoko Co., Ltd.	8-615-2417	와이드 엔드 사용

사 사 자