이 프로토콜 합성 및 트랜스-cyclooctene (TCO)의 특성에 설명 합니다-항 체와 177루 표시 tetrazine (Tz) radioligand pretargeted radioimmunotherapy (PRIT)에 대 한 수정. 또한, 그것은 자세히 biodistribution vivo에서 및 colorectal 암의 murine 모델에 경도 치료 연구에 대 한 이러한 두 가지 구조를 사용 하 여를 설명합니다.
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방법 논문
Pretargeted Radioimmunotherapy 역 전자 수요 Diels 오리 나무 반응에 따라
이 논문에서
요약
초록
Radioimmunotherapy (RIT) 암 치료에 대 한 유망한 접근은, 건강 한 조직에 높은 방사선 복용량 방사선된 항 체의 긴 pharmacokinetic 반감기 발생할 수 있습니다. 아마 당연한 일로, 여러 가지 다른 전략이 문제가 제한 우회 개발 되었습니다. 이러한 접근의 가장 유망한 중 하나입니다 pretargeted radioimmunotherapy (PRIT). PRIT는 비보에 대상 조직에 결합 하는 면역 글로불린에서 방사성 핵 종 분리, 별도로, 그들에 게 주입 하 고 다음 있도록에 입각 한입니다. 이 이렇게 pharmacokinetic 그들의 단점을 굽 도리 널, 그로 인하여 비 표적 조직에 방사선 복용량을 낮추는 고 반감기를 가진 방사성 핵의 사용을 촉진 하는 동안 항 체의 뛰어난 종양을 대상으로 속성을 보여준다 전통적인 radioimmunoconjugates에 대 한 너무 짧은 사용으로 간주 됩니다. 지난 5 년 동안 우리의 실험실과 다른 비보에 트랜스-cyclooctene (TCO) 및 tetrazine (Tz) 사이 역 전자-수요 Diels 오리 나무 (IEDDA) 반응에 따라 pretargeting에 대 한 접근을 개발 했습니다. 이 전략을 성공적으로 pretargeted 양전자 방출 단층 촬영 (PET)에 적용 된 단일 광자 방출 컴퓨터 단층 촬영 (SPECT) 항 체-항 원 시스템의 다양 한 이미징 및. 최근 간행물의 쌍, 우리 IEDDA 기반 PRIT 췌 장 ductal 선 암과 대 장 암 murine 모델에서의 효능을 증명 하고있다. 이 프로토콜에서 177루 DOTA 라는 tetrazine radioligand를 사용 하 여 PRIT에 대 한 프로토콜 설명 ([177루] 루-DOTA-말뚝7-Tz)와 huA33 항 체 (huA33-TCO)을 대상으로 대 장 암의 TCO 수정 변종. 좀 더 구체적으로, 우리 huA33 TCO, 합성 [177루]의 radiolabeling 루-DOTA-말뚝7의 건설을 설명 합니다-Tz, vivo에서 biodistribution와 murine 모델에서 경도 치료 연구의 성과 대 장 암입니다.
서론
Radioimmunotherapy (RIT)-사용 항 체의 종양 치료 방사성의 배달에 대 한-긴 암1,2의 치료에 대 한 유혹 접근 되었습니다. 실제로,이 약속 했다 비-Hodgkin의 림프 종 치료에 대 한 두 개의 radioimmunoconjugates의 미국 식품 및 의약품 안전 청의 승인에 의해 강조 되었습니다: 90Y ibritumomab tiuxetan 및 131-tositumomab3 , 4. 초기 일에서 새끼의 임상 전망 중요 한 합병증에 의해 방해 되어 아직: 건강 한 조직이5,6높은 방사선 복용량 비율. 일반적으로 말하자면, 미 모에 대 한 radioimmunoconjugates 수명이 긴 방사성 표시 됩니다 (예: 131나 [t½ = 8.0 일] 90Y [t½ = 2.7 일]) 물리적 반감기와 잘 사 개 그와 면역 글로불린의 긴....
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프로토콜
모든 vivo에서 동물 실험이이 작업에 설명 된 승인 된 프로토콜에 따라 수행 되었고 기념 슬로 안 Kettering 암 센터, Weill 코넬 의료 센터, 그리고 사냥꾼 대학의 윤리 지침에 따라 실행 제도 동물 보호와 사용 위원회 (IACUC)
1. huA33-TCO의 준비
참고: huA33 TCO의 합성 이전에 보고 된29되었습니다. 그러나, 독자의 용이성, 그것은 복제 여기 최적의 조건에 대 한 조정.
- 1.7 mL microcentrifuge 튜브에서 준비 (E)-cyclooct-4의 125 μ 솔루션-enyl 2, 5-dioxo-1-pyrrolidinyl (0.15 M) 40 mg/mL의 농도에서 건조 디 메 틸 formamide (DMF)에서 (TCO-보 건국) 탄산염. 이 솔루션은 aliquoted 미래 실험에 사용 하기 위해-80 ° C에서 냉동 수 있습니다.
- 별도 1.7 mL microcentrifuge 튜브에서 버퍼링 하는 인산 염 (PBS, 2.7 m m 염화 칼륨, 염화 나트륨 137 m m, 및 11.9 mM 칼륨 인산 염, pH 7.4)의 1 mL에 huA33의....
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결과
HuA33에 TCO의 활용 아민 반응 TCO NHS와는 면역 글로불린의 표면에 리 진 잔류물 간의 결합에 입각 한입니다. 이 메서드는 매우 강력 하 고 재현할 수 하 고 안정적으로도-의-라벨 2-4 TCO/mAb의 생성 합니다. 이 경우, MALDI ToF 질량 분석 약 4.0 TCO/mAb;의 라벨의 정도 확인 하 고용 했다 비슷한 가치 기자24fluorophore 수정 tetrazine를 사용 하 여 얻은 했다. Tetrazine ligand의 합성은 3 단계에서 수행 됩니다: (1) 결합 Tz NHS의 모노 Boc 보호 못 링커가 항복 Tz 말뚝7-NH2, 중간의 deprotection (2) 및 (3) 사이 thiourea 결합의 형성 p-SCN-Bn-DOTA과 Tz 말뚝7-NH2. 이 절차는 상대적으로 손쉬운 고 Tz 말뚝
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토론
Vivo에서 pretargeting에이 방법의 장점 중 하나-bispecific 항 체에 입각 한 전략에 관하여 특히 고 haptens 방사선-그것의 모듈화는: 트랜스-cyclooctene moieties 어떤 항 체에 추가 될 수 있습니다 그리고 tetrazine radioligands 자신의 클릭 파트너와 함께 반응 하는 능력을 방해 하지 않고 방사성의 특별 한 다양 한 방사선 될 수 있습니다. 아직 다른 항 체/항 원 시스템에이 방법의 적응 하기만 하면 여기에 설명 된 프로토콜을 복제 되지 않습니다. 물론, 새로운 mAb TCO immunoconjugate 또는 소설 tetrazine 베어링 radioligand을 만드는 어떤 시도 든 지 안정성과 반응성에 대 한 테스트를 포함 하 여 적절 한 화학 및 생물 학적 특성 분석 실험에 의해 동반 해야 합니다. 그러나,이 외에 두 개의 변수를 특히 탐구 하 고 최적화 하는 것이 중요 있다: (1) 관리 하는 mAb TCO immunoconjugat.......
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공개 사항
저자는 공개 없다.
감사의 글
저자는 박사 야 곱 Houghton 도움이 대화 감사. 저자는 또한 그들의 관대 한 자금 (R00CA178205 및 U01CA221046)에 대 한 NIH를 감사 하 고 싶습니다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| (E)-Cyclooct-4-enyl 2,5-dioxo-1-pyrrolidinyl carbonate (TCO-NHS) | Sigma-Aldrich | 764523 | -80°C에 저장; C |
| 2,5-Dioxo-1-pyrrolidinyl 5-[4-(1,2,4,5-tetrazin-3-yl)benzylamino]-5-oxopentanoate (Tz-NHS) | Sigma-Aldrich | 764701 | -80 °에 저장; C |
| 아세토니트릴 (MeCN) | 피셔 사이언티픽 | A998-4 | |
| 암모늄 아세테이트(NH4OAc) | 피셔 사이언티픽 | A639-500 | |
| Boc-PEG7-아민(O-(2-아미노에틸)-O&프라임;-[2-(Boc-amino)에틸]헥사에틸렌 글리콜) | Sigma-Aldrich | 70023 | -20°C에 저장; C |
| 디클로로메탄(DCM) | 피셔 사이언티픽 | D143-1 | |
| 디메틸설폭사이드(DMSO), 무수 | 피셔 사이언티픽 | D12345 | |
| EMD 밀리포어 아미콘 울트라-2 원심 필터 유닛 | 피셔 사이언티픽 | UFC205024 | |
| GE 헬스케어 일회용 PD-10 탈염 컬럼 | 피셔 사이언티픽 | 45-000-148 | |
| N, N-디메틸포름아미드 (DMF), 무수 | Fisher Scientific | AC610941000 | |
| Buffered Saline (PBS) | Fisher Scientific | 70-011-044 | 10x Concentrated |
| p-SCN-Bn-DOTA | Macrocyclics | B-205 | Store at -20 ° C |
| 트리에틸아민(TEA) | Fisher Scientific | AC157911000 | |
| 트리플루오로아세트산(TFA) | Fisher Scientific | A116-50 | |
| 종양 측정 장치 | Peira TM900 | Peira TM900 |
참고문헌
- Goldenberg, D. M. Targeted Therapy of Cancer with Radiolabeled Antibodies. Journal of Nuclear Medicine. 43 (5), 693-713 (2002).
- Goldenberg, D. M., et al. Radioimmunotherapy of B-cell Lymphomas with Iodine-131-labeled LL2 Monoclonal Anti....
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재인쇄 및 허가
