제시된 프로토콜은 염증성 장 질환 관련 대장암의 유도에 이어 마우스에서 부록(caecal patch)의 막강 외과적 제거를 기술한다. 이 뮤린 충수 절제술 모델은 인간 위장 병기의 병인에서 부록의 생물학적 역할을 조사 할 수 있습니다.
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이 논문에서
요약
초록
인간 부록은 최근에 대장암, 염증성 장 질환 및 파킨슨 병과 같은 다양한 복합 질병의 발병기전에서 중요한 생물학적 역할을 하는 것으로 연루되어 있다. 부록의 기능을 연구하기 위해, 장 질환 관련 뮤린 충수 모델이 설립되었으며 단계별 프로토콜이 여기에 설명되어 있습니다. 이 보고서는 dextran 황산나트륨 (DSS)와 아조시메탄 (AOM)의 조합을 사용하여 만성 대장염 관련 대장암의 화학 유도에 이어 마우스에서 케이칼 패치 제거를위한 막강 프로토콜을 소개합니다. IgA 특이적 세포 및 IgA 농도는 샴 그룹에서 그들에 비해 남성 C57BL/6 마우스에서 케이칼 패치의 제거시 유의하게 감소되었다. 동시에 관리 2% DSS와 AOM 거의 결과 80% 상당한 체중 감소 없이 sham 및 충 수 군모두에서 마우스 생존. 조직학적 결과는 대장 염증과 다른 정도의 선암을 확인했습니다. 이 모델은 장내 미생물 항상성 및 장내 대장염 및 악성 종양의 병인을 유지하는 부록의 기능적 역할에 대한 연구뿐만 아니라 약물 표적 치료의 잠재적 개발에 사용될 수 있습니다.
서론
임상 충수 절제술은 주로 염증 (예를 들어, 맹장염)으로 인해 맹장의 제거를 포함하는 표준외과 적 수술입니다 1,2,3. 그러나, vermiform 인간의 부록의 생물학적 기능은논란의 여지가 남아 4,5,6. 부록은 큰 창자에 있는 장에서 장에서 투영하는 흔적 남은 으로 여겨졌습니다. 최근까지, 진화, 면역학, 형태학 및 미생물 학적 연구는 부록이 뚜렷한 기능을 가질 수 있음을 제안했다. 이러한 역할은 면역 글로빈의 생산을 포함 (예를 들어, IgA와 IgG), 다양한 B 세포와 T 세포는 창자 관련 림프 조직 내에서 적응 면역 반응에 대한 중요한 (GALTs), 및 공생 미생물과 큰 장의 보충 6개 , 7명 , 8개 , 9개
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프로토콜
모든 동물 절차는 시안 자오퉁 대학의 기관 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었다 (아니. XJTULAC2019-1023).
1. 마우스 충수 절제술
- 집 8-10 주 오래 된 C57BL/6 수 컷 마우스 인증 된 특정 병원 체 무료 (SPF) 환경 에 대 한 1 수술 전에 주.
- 다음 멸균 수술 기구를 준비하십시오 : 마이크로 가위 1 쌍, 마이크로 집게 1 쌍, 살균 된 비 흡수성 봉합사의 두 가지 크기 (4-0 및 8-0), 바늘 홀더가있는 전기 응고 펜, 75 % 의료 알코올, 요오드 기반 스크럽 ( 예를 들어, 엔토오오딘) 및 멸균 면봉 패키지.
- 수술 중 복부 플러시 및 수분을 위해 미리 데운 0.9 % 생리식염수로 10 mL 주사기를 채웁니다.
- 100 mg/kg의 용량으로 1% 펜토바르비탈 나트륨으로 비 단식 마우스를 복강 내(i.p.)로 마취시킴. 페달 반사에 대한 반응이 부족하여 마취의 깊이를 확인하십시오.
참고: 단일 마 취 복용량 은 마우스에 전체 진정 효과 보장 하기 위해 관리. 짧은 절차의 상황에서, 50 mg/kg의 나트륨 pentobarbital i.p. 충분 할 수 있습니다. - 전기 면도기로 복부 모발을 부드럽게 면도하십시오....
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결과
뮤린 충수 모델의 설립
이러한 만성 대장염 관련 대장암의 무린 충수 절제술 모델은 도1에 도시된 바와 같이 순차적 외과 및 유도 단계를 수행함으로써 생성될 수 있다. caecum의 가장 빈번한 위치는 복부의 중간 선 뒤에 좌우 장골 fossa에있습니다 (그림 2). 촉진 방법을 사용하여 복부 절개 전에 카이쿰의 사전 국소화의 성공률은 거의 70 %이다 (보충정보, 표S2). 충수 절제술 절차는 주로 6 개의 중요한단계로 구성됩니다 (그림 3). 충수 수술 중, 길이 0.5-1.0 cm만큼 작은 중간 절개는 외과 적 외상을 최소화하는 데 중요합니다 (그림3A). 복강 내 누출의 경.......
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토론
대장염 관련 대장암의 뮤린 충수 절제술 모델은 마우스에서 높은 생존율을 가진 수술 단계를 사용하여 수득되었다. 대부분의 경우, 케이쿰이 복벽 아래에 위치했기때문에(보충표 1, 보충표 2및 도2), 개복술 없이 그 위치를 미리 판단하는 것이 어려웠다. 이러한 외과 적 프로토콜에서는, 범프를 만지기 쉬운 단계가 도입되었고, 소양 위치의 정량적 평가는 또한 소장의사전 국소화를 위한 정밀도를 높이기 위한 지침으로서 제공되었다(도 2). caecal 패치를 제거하는 해부학 적 특징의 착취는 창자의 의도하지 않은 부분의 중단을 최소화하여 충수 절제술의 잠재적 인 합병증과 복강 감염의 속도를 감소시입니다.
이 모델에는 세 가지 중요한 단계가 포함됩니다. 첫째, 개복술 전에 육안 검사 및 촉진은 케이쿰의 일반적인 위치를 결정하는 데 도움이 될 수 있습니다. .......
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공개 사항
저자는 공개 할 것이 없다.
감사의 글
이 작품은 중앙대학 기초연구기금(G2018KY0302), 대학 기초연구개발기금(KT00062), 중국국립자연과학재단(81870380), 임상연구상(81870380) 등에서 부분적으로 지원되고 있다. 중국 시안 자오퉁 대학 의 첫 번째 제휴 병원 (NO. XJTU1AF-CRF-2015-029). 저자는 뮤린 충수 모델의 초기 탐사 단계에서 그의 기술적 제안에 대한 Chengxin Shi 박사뿐만 아니라 대장염과 대장 종양의 H&E 염색 결과의 평가에 대한 병리학자 Xi Liu 박사에게 감사드립니다. Y.L.은 수술 데모를 수행하고, 데이터 분석을 수행하고, 원고 초안을 작성했습니다. J.L., G.L., Z.P., 및 Y.M.은 외과 준비, 조직 수집 및 비디오 제작에 참여했습니다. M.Z.는 유세포분석 및 ELISA를 수행; Q.W. 및 H.X.는 임상적으로 관련된 뮤린 모델을 생성하는 기술 지원을 제공했습니다. R.X.Z.는 연구를 설계하고 연구를 감독하며 원고를 작성하고 증명했습니다. J.S.는 원고를 검토했습니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 아족시 메탄 (AOM) | 시그마 Aldrich, Inc. | A5486 | |
| 덱스트란 황산염 나트륨염(DSS) | MP Biomedicals, Inc. | 160110 | |
| Entoiodine | 상하이 likon 첨단 기술 소독 주식 회사 | 310102 | |
| 디지털 캘리퍼스 | 닝보 yuanneng 무역 유한 공사 | 4859263 | |
| 4-0 실크 봉합 | 사 Yuanlikang 주식 회사 | 20172650032 | |
| 8-0 Prolene 봉합 | 사 Yuanlikang 주식 회사 | 20172650032 | |
| 전기 응고 펜 | 추앙 mei medical equipment co. LTD | 28221777292 | |
| 일회용 주사기 1ml | Shengguang 의료 제품 co. LTD | 3262-2014 | |
| 일회용 주사기 10ml | Shengguang 의료 제품 co. LTD | 3262-2014 | |
| 75% 약용 알코올 | Shandong anjie 하이테크 소독 기술 co. LTD | 371402AAJ008 | |
| 펜토바르비탈 나트륨 염 | 시그마-알드리치, Inc. | 57-33-0 | |
| 생리식염수 | 산동 qidu 제약 주식 회사 | H37020766 | |
| 흡수성 면봉 | 허난 ruike 의료 co., LTD | RK051 | |
| 수술 기구 - 안과 | Jinzhong 상하이 주식 회사 주식회사 | WA3050 |
참고문헌
- Leung, T. T., et al. Bowel obstruction following appendectomy: what is the true incidence. of Surgery. 250 (1), 51-53 (2009).
- Salminen, P., et al. Antibiotic Therapy vs. Ap....
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재인쇄 및 허가
