이 프로토콜은 갈모넬라 구동 장 섬유증의 마우스 모델을 설명합니다 이는 국외 염증과 섬유증을 포함하여 크론병의 주요 병리학 적 특징을 닮았다. 이 방법은 C57Bl/6 유전 적 배경에 유지 돌연변이 마우스를 사용하여 섬유성 결과를 변경 호스트 요인을 평가하는 데 사용할 수 있습니다.
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이 논문에서
요약
초록
콜라겐과 같은 세포외 기질의 병리학적 축적을 특징으로 하는 조직 섬유증은 지속적인 염증 및 이질성 수선의 결과이다. 염증성 장 질환 (IBD)에서 섬유증은 외과 적 절제술 이외의 효과적인 치료법이없는 재발성 협착 형성으로 이어집니다. 그것의 늦은 개시 때문에, 섬유증을 구동하는 프로세스는 보다 적게 공부하고 크게 알려지지 않습니다. 그러므로, 섬유성 합병증은 IBD에 있는 중요한 도전을 나타냅니다. 이 프로토콜에서, 장 섬유증의 강력한 생체 내 모델은 C57Bl/6 마우스의 스트렙토마이신 전처리가 백신 등급살모넬라 티피무리움 ΔAroA 돌연변이를 이용한 경구 관치에 이어 지속적인 병원체 식민지화로 이어지는 곳에 설명되어 있습니다. 장의 섬유증. S를 준비하기 위한 방법론. 시피무리움 ΔAroA 는 장 내 의 장 내 적폐증, 병원균 부하 정량화, 장 조직에서 콜라겐 침착 평가에 대해 설명합니다. 이 실험적인 질병 모형은 CD 같이 장 섬유증을 강화하거나 악화시키는 호스트 요인을 검토하기 위해 유용합니다.
서론
궤양성 대장염(UC)과 크론병(CD)은 IBD의 두 가지 주요 형태이며 위장관의 만성 및 재발성 염증성 질환으로 특징지어진다 1,2. 이 무질서는 환자의 삶의 질에 중요한 충격이 있습니다. IBD의 현상은 복통, 설사, 구역질, 체중 감소, 발열 및피로를 포함합니다 3. 최근 연구는 질병 병인에 기여하는 유전적 및 환경적 요인을 확인했습니다. 그러한 위험 요소는 발광 항원 4의 전좌 또는 오버 샘플링을 초래하는 상피 장벽의 붕괴에기여한다고생각됩니다. 결과적으로, 이것은 장 내 면역 세포에 의해 매개된 동료 식물에 대한 비정상적인 염증 반응을개시4. IBD 관련 합병증의 특징은 합동, 피부 및 간1,2를포함하여 각종 기관에 영향을 미치는 위관을 넘어 사이트로 확장할 수 있습니다. UC의 특징은 결장1에서전형적으로 국한된 가혹하고 확산성 염증을 포함한다. 질병 병리학은 표면 점막 궤양의 결과로 창자의 점막 및 sub점막....
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프로토콜
모든 동물 프로토콜은 브리티시 컬럼비아 대학의 동물 관리 위원회에 의해 승인되었습니다.
1. 생쥐의 구강 관념을 위한 살모넬라 티피무리움 ΔAroA 배양준비
- S의 냉동 글리세롤 주식에서. 티피무리움 ΔAroA, 멸균 접종 루프와 100 μg / mL 연쇄상 구균을 포함하는 LB 한천을 사용하여 줄무늬 플레이트를 준비합니다. 37 °C에서 하룻밤 배양. 줄무늬 플레이트는 4°C에서 최대 1주일까지 보관할 수 있습니다.
- 감염 하루 전에 2.5 mL의 물에 연쇄상 구균 0.5 g을 용해시켜 항생제를 준비하십시오. 필터 살균 연쇄상 구균 균증 용액 후, 구두로 전구 팁 22G gavage 바늘과 1 mL 주사기를 사용하여 마우스를 게이지 100 스트렙 토 마이신 용액의 100 μL (20 mg 스트렙토 마이신 / 복용량). 접종 루프를 사용하여 단일 콜로니가있는 배양 튜브에서 LB 국물 (50 μg / mL 연쇄상 구균)의 3 mL을 접종합니다. 37°C에서 밤새 200 RPM에서 흔들어 서 살모넬라 배양물을 에어로비액으로 배양하였다.
- 감염 당일, 멸균 PBS에서 하룻밤 살모넬라 배양물의 2회 연속 1/10 희석을 수행하여 최종 감염 용량을 준비합니다. 이것은 대략....
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결과
S를 가진 경구 감염에 선행된 연쇄상 구균 성미 증 처리. 티피무륨 ΔAroA는 특히 맹장에서 강력한 장 염증 및 섬유증을 유발합니다(그림 1). 일반적인 병원균 부담은 1g의 삼장당 10 8~10CFU, 비장 1g당 104 CFU의 감염동물로부터 회복될 수 있다(그림2). 피로시리우스 적색 스테인드 세칼 섹션에서 섬유증의 평가는 감염 후 21일 동안 피크 섬유증을 나타내며 병리학의 대부분은 42pi(그림 3 및 그림 4)에의해 해결된다. 콜라겐 증착은 점막의 섬유증이 온화하면서 장의 점막에서 가장 두드러집니다.
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토론
IBD의 병인에 대한 우리의 이해는 장 염증의 마우스 모델에 의해 크게 향상되었습니다. 이러한 개별 모델이 복잡하고 다인성 인간 질병의 모든 특징을 되풀이하지는 않지만 질병 진행의 주요 특징을 식별하는 데 유용했습니다. IBD와 관련 되 었던 섬유 성 협착 현재 치료는 질병 개발을 반전에 효과가 있기 때문에 주요 충족 되지 않은 임상 필요 남아. 더욱이, 장 섬유증은 현재 동물 모형에 있는 제한 때문에 실험실 조정에서 공부하기 어렵습니다. BALB/c 마우스에서 TNBS에 대한 만성 노출은 IL-13 및 TGF-B1 신호화27,28에의해 구동되는 결장에서 강력한 콜라겐 침착을 유도하는 것으로 나타났다. 그러나, 장 섬유증은 DSS 처리, IL-10 결핍, 또는 입양 T 세포 전송 모형과 같은 대장염의 그밖 일상적으로 이용되는 실험실 모형에서 일반적으로 관찰되지 않습니다. Grassl 외. 약화된 ΔAroA 돌.......
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공개 사항
저자는 공개 할 이익의 재정적 충돌이 없습니다.
감사의 글
우리는 학비 서비스에 대한 잉그리드 바르타 에게 감사드립니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 2 ml 둥근 바닥 안전 잠금 튜브 | Eppendorf | 22363344 | |
| 스테인리스 스틸 비드 | Qiagen | 69989 | |
| PBS | Gibco | 10010031 | |
| 대형 오리피스 피펫 팁 | Fisher | 2707134 | |
| 2 mL 메가블록 플레이트 | Sarstedt | 82.1972.002 | |
| Gavage 니들 | FST | 18061-22 | |
| 스트렙토 마이신 설페이 | 시그마 | S9137 | |
| 믹서 밀 | Retsch | MM |
참고문헌
- Danese, S., Fiocchi, C. Ulcerative colitis. New England Journal of Medicine. 365 (18), 1713-1725 (2011).
- Baumgart, D. C., Sandborn, W. J. Crohn's disease. The Lancet. 380 (9853), 1590-1605 (2012).
- Knights, D., Lassen, K. G., Xavier, R. J.
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재인쇄 및 허가
