여기서, 우리는 간단한 봉합사 및 클램프를 사용하여 일시적인 양측 공통 경동맥 폐색에 의한 망막 허혈의 마우스 모델을 설명합니다. 이 모델은 심혈관 비정상으로 인한 망막 허혈의 병리학적 메커니즘을 이해하는 데 유용할 수 있습니다.
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방법 논문
과도 양측 공통 경동맥 폐색에 의해 유도된 허혈성 망막 손상의 뮤린 모델
* These authors contributed equally
이 논문에서
요약
초록
당뇨병 성 망막병증, 망막 정맥 또는 동맥 및 안구 허혈 증후군의 폐색과 같은 다양한 혈관 질환은 망막 허혈으로 이어질 수 있습니다. 망막 허혈의 병리학 적 메커니즘을 조사하려면 관련 실험 모델을 개발해야합니다. 해부학적으로, 주요 망막 혈액 공급 혈관은 안과 동맥 (OpA) 및 OpA는 일반적인 경동맥의 내부 경동맥에서 유래 (CCA). 따라서 CCA의 중단은 망막 허혈을 효과적으로 유발할 수 있습니다. 여기서, 우리는 6-0 실크 봉합사를 가진 오른쪽 CCA를 묶고 클램프를 통해 2 초 동안 좌측 CCA를 폐색하기 위하여 일시적인 양측 공통 경동맥 폐색(tBCCAO)에 의하여 망막 허혈증의 마우스 모형을 설치하고, tBCCAO가 재발성 기능 장애로 선도하는 급성 망막증증을 유도할 수 있었다는 것을 보여주었습니다. 현재 방법은 수술 바늘과 클램프를 사용하여 수술 기구에 대한 의존도를 줄이고, 중간 뇌동맥 폐색의 마우스 모델에서 흔히 볼 수 있는 예기치 않은 동물 사망을 최소화하기 위해 폐색 시간을 단축하며, 일반적인 망막 허혈성 발견의 재현성을 유지합니다. 이 모델은 마우스의 허혈성 망막병증의 병리학을 조사하기 위해 활용될 수 있으며 생체 내 약물 스크리닝에 더 사용될 수 있다.
서론
망막은 시각 기능을 위한 신경 감각 조직입니다. 시각 기능에 상당한 양의 산소가 필요하기 때문에 망막은 신체1에서가장 높은 산소 를 요구하는 조직 중 하나로 알려져 있습니다. 망막은 산소가 혈관을 통해 전달되기 때문에 혈관 질환에 취약합니다. 당뇨병 성 망막병증 및 망막 혈관 (정맥 또는 동맥) 폐색과 같은 다양한 유형의 혈관 질환은 망막 허혈을 유발할 수 있습니다. 망막 허혈의 병리학적 메커니즘을 조사하기 위해, 망막 허혈의 재현 가능하고 임상적으로 관련된 실험 모델은 필요하다고 간주됩니다. 중간 대뇌 동맥 폐색(MCAO)은 내트라루민 필라멘트의 삽입에 의한 실험대뇌 허혈2,3의생체 내 설치류 모델의 개발을 위해 가장 일반적으로 활용되는 방법이다. MCA에 안과 동맥(OpA)의 근접성으로 인해 MCAO 모델은 망막 허혈4,5,6의병리생리학을 이해하는 데 동시에 사용된다. 망막 허혈과 함께 대뇌 허혈을 유도하기 위해, 긴 필라멘트는 전형적으로 일반적인 경동맥 (CCA) 또는 외부 ....
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프로토콜
여기에 설명된 모든 방법은 게이오 대학 의과 대학의 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)에 의해 승인되었습니다.
1. 수술 기구 및 동물의 준비
- 자동 클캐브 수술 기구와 70 % 에틸 알코올에 보관하십시오. 새로운 수술 전, 70% 에틸 알코올을 사용하여 수술 기구를 조심스럽게 청소하십시오.
- 수술 전, 수술 중 및 수술 후 멸균 상태를 유지하기 위해 특정 병원균(SPF) 실에서 남성 BALB/cAJc1 마우스(6주 전, 26-28kg)를 준비한다.
2. 일시적인 양자 공통 경동맥 폐색 (tBCCAO)
- 미다졸람(40 μg/100 μL), 메데토미딘(7.5 μg/100 μL) 및 부안소솔 타르테레이트(50 μg/100 μL)의 조합으로 관내 주사를 통해 마취하에 마우스를넣어8,9. 마우스의 뒤쪽 스킨을 잡고 마우스가 완전히 마취될 때까지 마우스가 눈을 부딪히지 않도록 합니다.
- 응답이 없을 때까지 마우스 발가락을 꼬집어 마취의 깊이를 판단하며, 그 중 어떤 방법은 일반적으로 완전한
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결과
FITC-dextran의 전신 순환 후 2분 동안, 가짜 작용 마우스 및 tBCCAO 수술 마우스에서 좌우 망막의 망막 혈관을 검사하였다(보충도 1). FITC-dextran은 tBCCAO 수술 마우스에서 샴 작동 마우스와 왼쪽 망막의 두 망막모두에서 완전히 보였으며 tBCCAO 수술 마우스의 오른쪽 망막에서 부분적으로 검출되었습니다.
tBCCAO 후, 눈꺼풀 처진 검사(그림 2). 오른쪽 눈은 온화한 나타났다 (점수 2; 75%) 심한 눈꺼풀 (점수 3 및 4; 25%) 처진, 왼쪽 눈은 처져 없는 동안 (점수 1; 93.75%) 마우스 1개를 제외한 (점수 2, 6.25%). tBCCAO 수술 마우스에서 눈 배출로 처진 심한 눈꺼풀이 상당히 관찰되지는 않았지만, 우리는 이 표현형에 대한 마우스 1개(점수 4; 6.25%)를 볼 수 있었다.
조직.......
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토론
연구에서, 우리는 tBCCAO, 간단한 봉합사 및 클램프를 사용하여, 망막 허혈및 동반망막 기능 장애를 유도할 수 있었다는 것을 보여주었습니다. 더욱이, 망막 허혈의 마우스 모델 의 개발을 위한 현재 의정서가 망막 허혈성 상해 모델2,3,7의개발을 위한 다른 이전 프로토콜과 비교하여 더 쉽고 빠르다는 것을입증했습니다.
해부학적으로, 좌우 뇌동맥은 윌리스의 원에 부수적인 혈액 공급을 제공하는 후방 통신 동맥(PCA)을 통해 연결될 수 있으며, 개별 혈관의 폐색 또는 협착으로부터의 흐름 중단으로부터의 혈류 중단에 대하여 중추신경계에 적절한 혈액 공급을 유지한다(도1).
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공개 사항
저자는 공개 할 것이 없습니다.
감사의 글
이 작품은 과학연구보조금(KAKENHI)(18K09424)과 구리하라 도시히데, 20K18393, 미와 유키히로(MEXT)가 지원했다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 아티 파메졸 염산염 | Zenoaq | Antisedan | 마취 방지 |
| Applied Biosystems 7500 Fast | Applied Biosystems-qPCR | 용 | |
| 부토르 파놀 타르트 레이트 | Meiji Seika Pharma | Vetorphale | 마취 용 |
| BZ-II 분석기 | KEYENCE- | 이미지 병합 | |
| 용 BALB / cAJc1 | CLEA | - | 마우스 strain |
| β-Actin (8H10D10) 마우스 mAb | CST | 3700 | 웨스턴 블롯 |
| 클램프 집게 | 세계 정밀 기기 | WPI 500451 | 수술 용 |
| Dumont 집게 # 5 | Fine Science Tools | 11251-10 | 수술 |
| 용 DAPI 솔루션 | Dojindo | 340-07971 | IHC |
| Envisu SD-OCT 시스템 | Leica | R4310 | OCT의 경우 |
| FITC-dextran | Merk | FD2000S | 망막 혈액 관류 |
| 형광 현미경 | KEYENCE | BZ-9000 | 형광 검출 |
| 용 Gatifloxacin 수화물 | Senju Pharmaceutical | Gachifuro | 항균 감염 용 |
| GFAP 단일 클론 항체 (2.2B10) | Thermo | 13-0300 | IHC |
| 용 가열 패드 | Marukan | RH-200 | 수술용 |
| HIF-1α (D1S7W) XP Rabbit mAb | CST | 36169 | 웨스턴 블롯 ImageQuant |
| LAS 4000 mini | GE Healthcare | - | 화학 발광 |
| Midazolam | Sandoz K.K | SANDOZ 마취 | |
| 용 Microtome Tissue-Tek TEC 6 | Sakura-Medetomidine | ||
| Orion Corporation | Domitor | 마취 | |
| 용 바늘 홀더 | Handaya | HS-2307 | 수술 용 |
| PuREC | MAYO | Corporation-ERG | |
| 가위 | 미세 과학 도구 | 91460-11 | 수술 용 |
| 히알루 론산 | 나트륨 Santen 제약 | Hyalein | 눈 윤활 |
| 용 Tropicamide / Penylephrine hydrochloride | Santen Pharmaceutical | Mydrin-P | 산동증 용 |
| 6-0 실크 봉합사 | 나츠메 | E12-60N2 | 수술용 |
참고문헌
- Anderson, B. Ocular effects of changes in oxygen and carbon dioxide tension. Transactions of the American Ophthalmological Society. 66, 423-474 (1968).
- Ingberg, E., Dock, H., Theodorsson, E., Theodorsson, A., Ström, J. O.
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재인쇄 및 허가
