제시는 구조 기능 분석을 위한 기도, 폐포 및 간질 내세포의 위치를 보존하는 폐의 혈관 관류 고정을 가진 공기 인플레이션을 위한 방법입니다. 지속적인 기도 압력은 공기 인플레이션 챔버로 유지되며 고정은 오른쪽 심실을 통해 퍼프됩니다. 폐는 히스토로지학 연구를 위해 처리됩니다.
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이 논문에서
요약
초록
폐 조직학은 폐 항상성 및 질병 병인 동안 영공 세포에 의해 제공된 기여를 조사하기 위하여 수시로 이용됩니다. 그러나, 일반적으로 사용되는 주입 기반 고정 방법은 영공 세포와 점액을 말기 항공으로 대체할 수 있으며 조직 형태를 변경할 수 있습니다. 이에 비해 혈관 관류 고정 기술은 영공 및 점막 안대기 내의 세포의 위치와 형태를 보존하는 데 탁월합니다. 그러나, 양수기도 압력이 동시에 적용되지 않으면 폐의 영역이 붕괴될 수 있으며 모세혈관이 폐포 공간으로 팽창하여 폐 해부학의 왜곡으로 이어질 수 있다. 본명, 하류 조직학 연구를 위한 뮤린 폐내기도 및 폐포 세포 및 간질의 형태와 위치를 보존하기 위해 혈관 관류 고정 시 공기 인플레이션에 대한 저렴한 방법을 설명합니다. 일정한 기압은 고정이 오른쪽 심실을 통해 침투되는 동안 조절 가능한 액체 컬럼을 통해 압력을 유지하는 밀봉된 공기 채워진 챔버에서 기관을 통해 폐로 전달됩니다.
서론
폐 공증은 건강과 질병 동안 폐 건축을 평가하기위한 금 본위제이며 폐 연구자1에의해 가장 일반적으로 사용되는 도구 중 하나입니다. 이 기술의 가장 중요한 양상 중 하나는 폐 조직의 적절한 격리 및 보존이며,이 단계의 가변성은 조직 품질 저하 및 잘못된 결과1,2,3로이어질 수 있기 때문이다. 살아있는 동물에서 폐 부피는 표면 장력에 의해 흉벽과 횡격막에서 전염되는 폐의 내탄 반동과 외부 력 사이의 균형에 의해 결정됩니다. 따라서 흉부에 들어가면 바깥쪽 힘이 손실되고 폐가 붕괴됩니다. 붕괴된 폐에서 제조된 히스토로지학적 섹션은 해부학 구획(즉, 영공, 혈관 및 간질)의 경계가 혼잡하여 구별하기 어려울 수 있다. 이 도전을 우회하기 위하여는, 연구원은 수시로 영공 규모 및 건축이 유지되도록 화학 고정 도중 폐를 팽창합니다.
폐는 공기 또는 액체로 팽창할 수 있습니다. 폐를 동일한 부피로 팽창시키는 데 필요한 압력은 공기-액체 인터페이스의 분자 간 힘으로 인해 공기 및 액체 인플레이션 간에 다릅니다. 표면 장력을 극복하고 붕괴된
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프로토콜
이 프로토콜에 설명된 모든 방법은 국립 유태인 건강의 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)에 의해 승인되었습니다.
참고: 프로토콜은 세 가지 구성 요소로 구성됩니다. 첫 번째 구성 요소는 관류/고정 장비로 공기 인플레이션의 건설을 자세히 설명합니다. 두 번째 섹션에서는 실험을 위해 장비를 설정하는 방법에 대해 설명합니다. 마지막 섹션에서는 동물을 준비하고 실험을 수행하는 방법을 설명합니다.
1. 물 기둥 장치의 건설(도 1B)
- 60mL 슬립 팁 주사기에서 플런저를 제거합니다.
- 30mL 마크에 주사기 주위에 테이프를 부착합니다. 주사기의 높이를 25cmH2O의초기 인플레이션 압력에 대해 이 마크로 설정합니다. 또한 전체 절차에 걸쳐 컬럼의 수위가 있어야 하는 곳이기도 합니다. 테이프를 "그림 1A에묘사된 대로) 또는 "인플레이션"으로 레이블을 지정합니다.
참고: 붕괴된 영공의 모집을 보장하기 위해 25cmH2O의인플레이션 압력이 사용됩니다. 폐포를 모집하면 공기 공간이 저하되지 않도록 압력이 20cmH....
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결과
그대로 흉부에서 폐는 흉막 공간을 통해 흉벽에 의해 적용된 바깥쪽 힘에 의해 개방된다6,14. 해부 중에 다이어프램이 입력되면 흉막 공간의 무결성이 폐지되고 폐가 붕괴되어야합니다(그림 2A,2B). 폐를 다시 확장하기 위해 공기 인플레이션이 수행됩니다. 첫 번째 단계로, 붕괴 된 영공의 모집을 보장하기 위해 25cm의 수압이 적용됩니다. 이에 따라, 동물 보유 용기 외부의 스톱콕이 열리면, 공기는 기관을 통해 폐로 유입되고 인플레이션을 쉽게 관찰해야한다(도 2C). 폐가 완전히 팽창하면 인플레이션 압력이 20cm의 수압(그림2D)으로감소합니다. 20cm의 수압은 폐의 완전한 인플레이션을 유지하지만 영공을 과도하게 변조하지 않기 때문에 선.......
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토론
일반적으로 사용되지만, 장내 기반 고정 방법은 기도에서 백혈구를 대체하고 정상적인 폐 아키텍처를 변경할 수 있습니다. 이 프로토콜에 제공되는 혈관 관류 고정을 가진 공기 인플레이션 방법은 이러한 함정을 극복하고 폐 해부학을 보다 정확하게 보존합니다. 혈관 관류 고정 방법에서 고품질 조직을 얻는 열쇠는 공기 인플레이션 압력의 주의 깊은 모니터링, 공기 누출 의 회피, 혈관에 고정의 적절한 관류를 보장 포함한다.
이 절차에 대한 한 가지 제한은 흉부의 무결성이 중단되면 폐가 붕괴되고 붕괴 후 폐의 재 인플레이션이 정확한 조직학적 평가를 위해 필요하다는 것입니다. 붕괴없이 폐 인플레이션을 유지하는 프로토콜에 대한 대안은 작은 동물 인공 호흡기의 사용이 될 것입니다. 그러나 이러한 장비는 비용이 많이 들며 여기에 프로토콜이 저렴한 솔루션을 제공합니다. 건강한 폐에서는 폐포 상피 세포에 의해 생성된 계면활성제는 표면 장력을 감소시키는 데 도움이 되며 대부분의 경우 폐를 쉽게 다시 확장할.......
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공개 사항
저자는 공개 할 것이 없습니다.
감사의 글
이 작품은 국립 심장에 의해 투자되었다, 폐, 혈액 연구소 (NHLBI) HL140039 및 HL130938을 부여. 저자는 섀넌 핫트와 자잘 맥클렌던의 기술적 전문성에 감사드립니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 00117XF-스톱콕 1 방향 100/PK M Luer | Cole-Parmer | Mfr # VPB1000050N – 항목 # EW-00117-XF | 스톱콕 |
| BD 60 mL 주사기, 슬립 팁 | BD | 309654 | 물 기둥 BD |
| PrecisionGlide Needle 25G x 5/8 | BD Biosciences | 305122 | 혈관 관류/고정용 바늘 |
| 여성 Luer Thread Style Panel Mount 1/4-28 UNF to Male Luer | Nordson Medical | FTLLBMLRL-1 | Female Luer |
| 돼지 장 점막에서 추출한 헤파린 나트륨 염 | Sigma-Aldrich | H3393 | 헤파린 용액. |
| Luer-stub 어댑터 BD Intramedic 20 게이지 | BD Biosciences | 427564 | Luer-stub 어댑터 |
| 남성 Luer (2) - 여성 Luer Thread 스타일 티 | Nordson Medical | LT787-9 | 남성 Luer |
| Nalgene 180 투명 플라스틱 PVC 튜브 | ThermoFisher Scientific | 8000-9020 | 튜브 |
| 파라포름알데히드 수용액 - 32% | 전자 현미경 과학 | 15714-S | 고착 용액. 인산염 완충 식염수로 4%로 희석 |
| Permatex Ultra Blue 다목적 RTV 실리콘 개스킷 메이커 | Permatex | 81724 | 챔버의 밀폐 밀봉을 위한 실리콘 개스킷 메이커 |
| 인산염 완충 식염수, 칼슘 및 마그네슘 없이 1x | Corning | 21-040-CV | 공기 팽창 챔버를 구성하는 데 사용되는 병 및 헤파린 및 고정 용액 |
| 에 사용되는 버퍼Sterilite Ultra Seal 16.0 컵 직사각형 식품 저장 용기 | Sterilite | 0342 | 동물 가공 용기 |
참고문헌
- Hsia, C. C. W., Hyde, D. M., Ochs, M., Weibel, E. R. An Official Research Policy Statement of the American Thoracic Society/European Respiratory Society: Standards for Quantitative Assessment of Lung Structure. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 181 (4), 394-418 (2010).
- Weibel, E. R., Limacher, W., Bach....
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재인쇄 및 허가
