여기에서는 안지오텐신 II 주입으로 유도 된 고혈압이있는 마우스에서 신장 교감 신경 탈신경 (RDN)에 대한 프로토콜을 제시합니다. 이 절차는 반복 가능하고 편리하며 고혈압 및 심장 비대에 대한 RDN의 조절 메커니즘을 연구 할 수 있습니다.
이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.
방법 논문
개선된 신장 탈신경은 안지오텐신 II 주입으로 유발된 고혈압을 완화했습니다.
* These authors contributed equally
이 논문에서
요약
초록
혈압에 대한 신장 교감 신경 탈신경 (RDN)의 이점은 최근 몇 년 동안 많은 임상 시험에서 입증되었습니다. 그러나 고혈압에 대한 RDN의 조절 메커니즘은 여전히 파악하기 어렵습니다. 따라서 마우스에서 더 간단한 RDN 모델을 설정하는 것이 필수적입니다. 이 연구에서는 안지오텐신 II로 채워진 삼투압 미니 펌프를 14주 된 C57BL/6 마우스에 이식했습니다. 미니 삼투압 펌프를 이식 한 지 1 주일 후, 페놀을 사용하여 마우스의 양측 신장 동맥에서 수정 된 RDN 절차를 수행했습니다. 연령-성별 일치 마우스에 식염수를 투여하고 가짜 그룹으로 봉사했습니다. 혈압은 기준선에서 측정되었고 이후 21일 동안 매주 측정되었습니다. 그런 다음 신장 동맥, 복부 대동맥 및 심장을 H & E 및 Masson 염색을 사용하여 조직 검사를 위해 수집했습니다. 이 연구에서는 고혈압을 조절하고 심장 비대를 완화할 수 있는 간단하고 실용적이며 반복 가능하고 표준화된 RDN 모델을 제시합니다. 이 기술은 신장 동맥 손상없이 말초 신장 교감 신경을 제거 할 수 있습니다. 이전 모델과 비교하여 수정 된 RDN은 고혈압의 병리 생물학 및 병태 생리학에 대한 연구를 용이하게합니다.
서론
고혈압은 전 세계적으로 주요 만성 심혈관 질환입니다. 조절되지 않는 고혈압은 표적 장기를 손상시키고 심부전, 뇌졸중 및 만성 신장 질환에 기여할 수 있습니다 1,2,3. 고혈압의 유병률은 중국에서 1991 년과 2007 년 사이에 20 %에서 31 %로 증가했습니다. 중국의 고혈압 성인 수는 최근 고혈압 진단 기준(130/80mmHg)이 개정됨에 따라 두 배가 될 수 있습니다.4. 고혈압은 약으로 조절할 수 있지만, 환자의 약 20 %는 최대 내약으로 적어도 3 개의 항 고혈압제 (이뇨제 1 개 포함)를 투여 받아도 고혈압을 조절할 수 없어 약물 내성 고혈압이 발생할 수 있습니다5.
신장 교감 신경 탈신경(RDN)은 고혈압에 대한 잠재적인 치료법으로 입증되었습니다. 2009 년 Krum과 동료들은 RDN을 처음으로 사용한 저항성 고혈압 치료를보고했습니다. 경피적 신장 동맥 절제술은 환자의 지속적인 혈압 강하를 효과적으로 유발할 수 있음이 밝혀졌습니다6....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
프로토콜
모든 동물 실험 절차는 실험실 동물의 관리 및 사용에 대한 관련 윤리 가이드 (NIH 간행물 번호 85-23, 2011 년 개정)를 준수했으며 푸단 대학 산하 화동 병원 동물 연구위원회의 승인을 받았습니다. 14주령의 수컷 C57BL/6 마우스(28-30g)를 무작위로 4개의 그룹으로 나누었다: 가짜 그룹, Sham+Ang II 그룹, RDN 그룹, RDN+Ang II 그룹, 각 그룹에서 n=6. 모든 동물은 24 ± 1 ° C의 온도 조절 실에서 12 시간의 명암 주기와 표준 설치류 차우 및 물 adlibitum에 대한 자유로운 접근으로 특정 폐쇄 된 병원체가없는 조건에서 유지되었습니다.
1. 작업 분야의 준비
- 수술 테이블을 70 % 에탄올로 소독하십시오. 가열 패드 온도를 37 ° C로 조정합니다.
- 수술 전에 모든 수술 기구를 121°C에서 30분 동안 또는 다른 방법으로 멸균했는지 확인하십시오. 이 절차에는 마이크로 수술 용 가위, 두 개의 미세한 직선 집게, 두 개의 미세한 곡선 집게, 지혈 집게, 멸균 거즈 및 계량 용지가 필요합니다.
2. 안지오텐신 II 유발 고혈압
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
결과
통계
모든 데이터는 평균 ± 표준 편차로 표현된다. 일원 분산 분석은 3 개 이상의 조건을 가진 실험에 사용되었으며 개별 그룹 간의 비교를위한 Bonferroni 사후 테스트가 뒤 따랐습니다. 0.05보다 작거나 같은 p-값을 유의한 것으로 간주합니다. 상용 소프트웨어는 모든 통계 분석을 수행하는 데 사용되었습니다.
Ang II에 의해 유도 된 혈압의 증가는 RDN 후에 약화되었습니다.
수축기 혈압 (SBP)의 유의 한 증가는 Ang II 주입 후 1 주일에 관찰되었다. RDN + Ang II 그룹은 RDN 절차 후 21 일에 Sham + Ang II 그룹과 비교할 때 SBP에서 상당한 감소를 보였다 (143.50 ± 5.43 대 196.67 ± 14.26 mmHg, p < 0.01). RDN 후 2주에 Sham 그룹과 RDN 그룹 간에 차이가 없었습니다(113.33 ± 9.35 대 113.17 ± 8.47m.......
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
토론
RDN이 혈압을 낮출 수 있는지 여부는 symplicity HTN-3 시험 7,25의 부정적인 결과가 발표 된 이후 논란이되고있다. 그러나, 다수의 임상 시험 및 동물 실험은 고혈압 인간 및 동물 9,10,11,12,13,14,15,16,17에 대한 RDN의 긍정적이고 효과적인 결과를 입증하였다.
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
공개 사항
저자가 선언 한 재정적 또는 기타 이해 상충은 없습니다.
감사의 글
이 연구는 중국 국립 자연 과학 재단 (81770420), 상하이시 과학 기술위원회 (20140900600), 상하이 임상 노인 의학 핵심 연구소 (13dz2260700), 상하이 시립 핵심 임상 전문 (shslczdzk02801) 및 노인 관상 동맥 질환 센터, 푸단 대학 부속 화동 병원.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| Angiotensin II | Sangon Biotech | CAS : 4474-91-3 | 고혈압 animol 모델을 만들기 위해 |
| 안티 티로신 하이드록실라제 항체 | Abcam | ab137869 | 신장 신경의 TH 발현을 평가하기 위해 |
| 혈압 분석 | Visitech Systems | BP-2000 | 마우스의 혈압 측정 |
| 미니 삼투압 펌프 | DURECT Corporation | CA 95014 | 안지오텐신 II |
| 노르에피네프린 ELISA 키트 | Abcam | ab287789 | 신장 노르에피네프린 수치를 측정하기 위해 |
| 페놀 | Sangon Biotech | CAS : 108-95-2 | 신장 교감 신경 손상 |
| 량 종이 | Sangon Biotech | F512112 | 페놀로 담근 종이로 신장 신경을 파괴하기 위해; https://www.sangon.com/productDetail?productInfo.code=F512112. |
참고문헌
- Messerli, F. H., Rimoldi, S. F., Bangalore, S. The transition from hypertension to heart failure: Contemporary update. JACC Heart Failure. 5 (8), 543-551 (2017).
- Lackland, D. T., et al. Implications of recent clinical trials....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재인쇄 및 허가
태그
