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방법 논문

흉부외과 수술을 위한 사춘기 마우스 강아지의 마취 및 삽관

2.6K 조회수

DOI:

10.3791/64004

2022년 6월 2일

* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

생후 >7일 된 마우스의 흉부외과 모델은 삽관이 필요하지만 사춘기(8-14일령) 마우스 새끼에게는 어렵고 삽관을 위한 마취 요법에 대한 정보는 거의 없습니다. 여기에서는 동물 사망률을 최소화하면서 기관 내 삽관을 허용하는 10일 된 C57BL/6J 마우스 새끼의 케타민/자일라진/아트로핀 투여 요법을 제시합니다.

초록

쥐 수술 모델은 전임상 연구에서 중요한 역할을 합니다. 심장 손상 후 심근 재생에 대한 기계 론적 통찰력은 0-14 일 된 마우스의 흉부 수술 모델에서 얻을 수 있으며, 심근 세포는 성인과 달리 증식 능력을 유지합니다. 최대 7 일 된 마우스 새끼는 저체온증에 의해 효과적으로 고정되며 흉부 수술을위한 삽관이 필요하지 않습니다. 그러나 사춘기(8-14일령) 쥐 새끼는 삽관이 필요하지만 이것은 어렵고 삽관을 용이하게 하기 위한 마취에 관한 정보가 거의 없습니다. 여기에서는 동물 사망률을 최소화하면서 기관 내 삽관을 허용하는 10일 된 C57BL/6J 마우스 새끼의 케타민/자일라진/아트로핀 투여 요법을 제시합니다. 체중에 대한 케타민 / 자일 라진 / 아트로핀 투여 요법의 경험적 적정은 체중이 다른 마우스 새끼의 마취에 대한 반응이 비선형 적임을 나타 냈으며, 이에 따라 20 / 4 / 0.12 mg / kg, 30 / 4 / 0.12 mg / kg 및 50 / 6 / 0.18 mg / kg의 용량은 3.15-4.49 g (n = 22), 4.50-5.49 g (n = 20) 및 5.50-8.10 g (n = 20) 사이의 강아지의 삽관을 촉진했으며, 각각. 체중이 낮은 새끼는 무거운 새끼보다 삽관 시도가 더 필요했습니다(p < 0.001). 삽관 후 생존은 체중과 상관 관계가 있었다 (저체중, 중간 및 고체중 그룹의 경우 각각 59 %, 70 % 및 80 %, R2 = 0.995). 삽관 후 심근 경색 수술의 경우, 100 % 산소 중 4.5 % 이소 플루 란으로 마취 수술면을 유도하고 100 % 산소 중 2 % 이소 플루 란으로 유지시켰다. 수술 후 생존율은 92%, 86%, 88%에서 세 체중 그룹에서 유사했습니다(p=0.91). 삽관 및 수술을 위한 동물 취급 관행의 개선과 수술 후 댐에 의한 식인 최소화와 함께 전체 절차(삽관 및 수술)에 대한 전체 생존은 체중과 상관관계가 있었습니다(저체중, 중체중 및 고체중 그룹의 경우 각각 55%, 60% 및 70%,R2 = 0.978). 10 일 된 강아지의 삽관으로 인한 어려움과 관련 높은 사망률을 감안할 때 10 일 된 강아지의 흉부 수술은 체중이 5.5g 이상인 강아지로 제한하는 것이 좋습니다.

서론

뮤린 모델은 전임상 흉부외과 연구에서 매우 귀중한 도구이며, 특히 유전자 조작된 마우스 라인이 생성될 수 있는 용이성 때문에, 또한 예를 들어심장 손상 후 심근 재생의 연구를 허용하는 병리학적 질병 모델을 제공하기 위해 마우스를 외과적으로 조작할 수 있는 용이성 때문에1 . 이와 관련하여 심근 세포가 세포주기에서 빠져 나간 성인 마우스와 달리 0-2 일 된 신생아 마우스 심장은 정점 절제술 또는 심근 경색유도 후 최소한의 흉터로 복구됩니다 2,3,4. 대조적으로, 생후 7일 된 신생아 심장은 불완전하게 재생되어 흉터 발생률이 더 높습니다 2,3. 좌심실 정점의 심근 세포는 출생 후 최대 2 주 동안 증식 능력을 유지하기 때문에 0-14 일 된 마우스에서 심장 손상 후 재생에 대한 기계 론적 연구는 손상된 성인 심장의 재생을위한 치료 표적을 식별하는 데 유익 할 수 있습니다5.

심장 손상의 ....

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프로토콜

설명 된 모든 동물 실험은 과학적 목적을위한 동물 관리 및 사용에 대한 호주 실천 강령 및 REACH 지침에 따라 Garvan / St Vincent 's Hospital 동물 윤리위원회의 승인을 받았으며 모든 실험은 소아 마취 전문의 (JJS)의지도하에 숙련 된 소형 동물 외과 의사 (JW)가 수행했습니다.

1. 악기 준비

  1. 수술 당일, 생후 10일 된 강아지의 삽관을 위한 특수 장비를 설치하세요(그림 1A,B). 여기에는 온난화 램프, 삽관 플랫폼, 광섬유 조명, 작은 집게, 직경 0.02mm의 구리선 조각으로 만든 후두경(길이 60mm, 와이어 끝이 직경 3mm의 원으로 모양 175°; 도 1B), 및 기관내 튜브로서 사용되는 24-게이지 플라스틱 정맥주사(i.v.) 캐뉼라를 포함한다.
  2. 캐뉼러가 21mm 플라스틱 암 루어 잠금 어댑터에 부착된 19mm 길이의 플라스틱 튜브(0.7mm OD)로 구성되어 있는지 확인합니다(그림 1B). 루어 잠금 어댑터를 통해 구리선 조각을....

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결과

10 일 된 생쥐의 마취. 10 일 된 새끼는 4-5 분 안에 4.5 % 이소 플루 란으로 마취 될 수 있습니다. 그러나 삽관 준비 과정에서 마취에서 회복됩니다. 크기가 작기 때문에 표준 코 콘으로 전달되는 이소 플루 란 마취하에 삽관하는 것은 불가능합니다. 우리는 이전에 100 일 및 13 일 된 강아지와 성인0.5 일의 흉부 수술을 위해 각각 15 / 21 / 21 mg / kg의 케타민 / 자일 라진 / 아트로핀 마취 요법을 사용했습니다. 산소 보충을 포함한 예비 실험에서 50-150mg/kg 케타민과 5-10mg/kg 자일라진 10의 권장 주사 요법은10일 된 새끼에서 용납할 수 없는 사망률을 초래하는 것으로 나타났습니다. 생후 10일령 새끼의 체중과 깔짚 크기 사이의 역상관관계를 감안할 때(R2=0.250, p < 0........

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토론

현재 흉부 수술을 위해 10 일 된 마우스의 마취 및 삽관에 대한 잘 문서화 된 방법은 없습니다. 이를 위해 케타민/자일라진/아트로핀 투여 요법을 체중으로 적정하여 20/4/0.12mg/kg, 30/4/0.12mg/kg 및 50/6/0.18mg/kg의 용량은 각각 체중이 낮은(3.15-4.49g), 중간(4.50-5.49g) 및 높은(5.50-8.10g) 체중인 강아지의 삽관을 촉진했습니다. 삽관 후 생존은 체중과 상관 관계가 있습니다 (저체중, 중간 및 고체중 그룹의 경우 각각 59 %, 70 % 및 80 %). 10 일 된 강아지의 삽관의 어려움과 관련 높은 사망률을 감안할 때 10 일 된 강아지의 흉부 수술은 체중이 5.50g 이상인 동물로 제한하는 것이 좋습니다. 이 삽관 기술의 한계는 작업자의 기술과 경험, 그리고 얼마나 빨리 배울 수 있는지에 달려 있다는 것입니다. 그러나 성인 삽관 경험이 있는 작업자는 7-8마리의 새끼를 10마리 대상으로 연습한 후 사춘기 삽관에 능숙해질 수 있을 것으로 예상됩니다. 또 다른 한계는.......

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공개 사항

저자는 공개 할 이해 상충이 없습니다.

감사의 글

이 작업은 NHMRC 프로그램 보조금 [ID 1074386], Leducq Transatlantic Network of Excellence in Cardiovascular Research 보조금 [RMG] 및 RT Hall Trust [RMG & SEI]의 보조금으로 지원되었습니다.

....

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
Atipamezole (Antisedan)Provet (NSW) Pty LtdATIP I
Atropine 600 mcg/mLClifford Hallam Healthcare Pty Ptd1957699 PFIZER-0143386
BetadineLivingstone InternationalBU0520
Buprenorphine (Temgesic)Provet (NSW) Pty LtdTEMG I
광섬유 라이트Leica 3011350CLS 150X
GraphPad PrismGraphPad Software, LLC버전 9.1.2
삽관 플랫폼 --대략적인 치수가 12 (L) x 8.5 x (W) x 7.5 cm (H)
IsofluraneProvet (NSW) Pty LtdISOF 07
Ketamine 100 mg/mLProvet (NSW) Pty LtdKETAI1
플라스틱 정맥 캐뉼라 24게이지 Polywin 안전성 BD 인사이드 CE008621mm 플라스틱 암 루어 잠금 어댑터에 부착된 19mm 길이의 플라스틱 튜브(0.7mm 외경); 환형 130 &mu의 총 부피; L
단 하나 루멘 폴리에틸렌 관Critchley 전기 제품 Pty 주식 회사 Auburn NSW외부 직경 0.61 mm의 안 직경 0.28 mm
작은 겸자F.S.T.NO 11051-10
수술용 현미경 (카메라 옵션)Leica M651 (Leica IC80 HD 카메라)10x 및 16x 대물
렌즈 봉합사 7-0 프롤렌Ethicon8708H
봉합사 9-0 폴리프로필렌 모노필라멘트Ethicon2813
V-1 능동 소기 이소플루란 마취 시스템이 있는 탁상용VetEquip901820
벤티드 2리터 플렉시글라스 인덕션 챔버VetQuip Pty Ltd94210225cm(L) x 13cm(W) x 11cm (H)
온난화 램프Brilant Lighting99223
XylazineProvet (NSW) Pty LtdXYLA Z 2

참고문헌

  1. Klocke, R., Tian, W., Kuhlmann, M. T., Nikol, S. Surgical animal models of heart failure related to coronary heart disease. Cardiovascular Research. 74 (1), 29-38 (2007).
  2. Porrello, E. R., et al. Transient regenerative potential of the neonatal mouse heart. Scie....

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재인쇄 및 허가

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