우리는 장 조작을 통해 생성된 수술 후 장폐색의 쥐 모델을 설명합니다. 위장 통과 기능, 병리학적 변화 및 면역 세포 활성화는 수술 후 24시간 후에 평가되었습니다.
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이 논문에서
요약
초록
대부분의 환자는 수술 후 장폐색(POI)을 경험하며, 이는 이환율, 사망률 및 입원 시간 증가와 관련이 있습니다. POI는 수술 중 기계적 손상으로 인해 위장관의 운동성이 중단된 결과입니다. POI의 메커니즘은 비정상적인 신경 세포 민감성, 상피 장벽 기능 손상 및 국소 염증 증가와 관련이 있습니다. 그러나 세부 사항은 여전히 수수께끼로 남아 있습니다. 따라서 실험용 쥐 모델은 POI 손상의 병태생리학 및 메커니즘을 밝히고 새로운 치료법을 개발하는 데 중요합니다.
여기에서는 임상 수술과 유사한 장 조작(IM)을 통해 생성된 POI의 쥐 모델을 소개합니다. 이것은 면봉으로 복부를 1-3회 마사지하여 소장을 기계적으로 손상시킴으로써 달성됩니다. IM은 FITC-dextran gavage 및 분절 소화관의 형광 검출로 평가한 바와 같이 수술 후 24시간 동안 위장 통과를 지연시켰습니다. 또한, 점막하의 조직 팽창 및 면역 세포 침투는 헤마톡실린 및 에오신 염색 및 유세포 분석으로 조사되었습니다. IM의 적절한 압력과 장에 대한 충혈 효과는 시술에 매우 중요합니다. 이 POI의 쥐 모델은 복부 수술 후 장 손상 및 회복 메커니즘을 연구하는 데 사용할 수 있습니다.
서론
수술 후 장폐색(POI)은 인체 건강 분야, 특히 복부 수술을 받는 환자의 관리에 중대한 도전을 제기하는 증후군입니다. 위장 운동성의 회복이 지연되는 것이 특징인 POI는 입원 기간을 연장하고 의료 비용을 증가시키는 원인이 되지만, 확립된 정의, 병인 또는 치료법은 존재하지 않는다1. 최근 연구는 POI 2,3,4의 진행에서 면역 세포의 중추적인 역할을 밝혀 주었지만, 관련된 기본 메커니즘을 밝히기 위해서는 추가 조사가 필요합니다.
이 프로토콜에서는 복강 내 수술에 의해 유도된 POI의 쥐 모델을 소개하며, 이는 복부 수술이 소화관에 미치는 영향을 밀접하게 모방합니다. 우리의 목표는 생쥐의 POI를 모델링하기 위한 표준화된 방법을 제공하여 연구자들이 병태생리학을 조사하고 새로운 치료 개입을 탐색할 수 있도록 하는 것이었습니다.
이 기술의 개발 및 활용의 근거는 POI를 연구하기 위한 신뢰할 수 있는 전임상 모델의 필요성에 있습....
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프로토콜
동물 관리 및 실험 절차는 Guiding Principles in the Care and Use of Animals(중국)에 따라 수행되었으며 베이징 친선 병원 윤리 검토 위원회(NO. 20-2056)의 승인을 받았습니다. C57BL/6 마우스(8-12주령)를 사용하여 연구를 진행했습니다.
1. 수술 준비
- 실험 조건의 표준화를 충족하기 위해 계획된 모델링 전 12시간 동안 모든 마우스를 빠르게 처리합니다(그림 1A).
- 수술 기구를 준비하고 소독합니다.
- 마취제 트리브로모에탄올과 발열 패드를 준비합니다. 과열을 방지하기 위해 가열 패드를 모니터링하고 일정한 온도(37.5°C)를 유지하십시오.
2. 마취
- 각 마우스를 트리브로모에탄올로 마취합니다.
- 트리브로모에탄올을 희석하여 생리식염수에 20mg/mL 용액을 준비합니다. 복강내 주사를 통해 체중 10g당 0.2mL의 트리브로모에탄올 작업 용액을 투여합니다. 마취 상태에서 ....
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결과
이 프로토콜에서 POI는 임상 수술의 효과와 유사한 장 조작(IM)에 의해 외과적으로 유도되었습니다. 가짜 그룹에서는 IM 없이 절개가 이루어졌습니다. POI 마우스는 POI 수술 후 24시간 동안 가짜 대조군 마우스와 함께 희생되었습니다. 소화관의 중요한 기능인 내용물 전달 기능은 FITC-덱스트란의 위장에 의해 감지되었습니다. POI 모델은 소장의 근위부에서 FITC 강도가 증가했기 때문에 성공적인 것으로 간주되었습니다(그림 2B). 평균 GC는 IM의 통과 기능 장애를 정량화하고 작동의 일관성을 나타내기 위해 계산되었습니다(그림 2C).
HE 염색은 소화관의 여러 세그먼트의 형태를 나타냅니다(그림 3). 십이지장과 회장의 점막하층과 평활근층은 POI 유도 후 24시간 후에 부풀어 올랐습니다(
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토론
수술의 성공은 몇 가지 중요한 단계에 달려 있습니다. 첫째, 장 벽내 수술(IM) 중 일관성을 유지하는 것은 소장에 대한 광범위한 손상을 유도하는 데 필수적입니다. IM 시술 중 가해지는 적절한 압력과 그에 따른 장에 대한 충혈 효과는 수술 성공에 매우 중요합니다. 면봉으로 문지른 후 소화관 전체가 분홍색으로 변하고 붉은 출혈 반점이 나타나는 것을 관찰한 것은 성공적인 수술의 지표가 되었습니다. 또한 수술 후 평균 GC 값이 약 5로 유지되는 것은 모델이 가짜 수술 마우스와 비교하여 성공적이었음을 나타냅니다. HE 염색에서 입증된 바와 같이 점막하 조직 부종과 면역 세포 침투에 대한 현미경 검사도 POI의 중증도를 검증하는 데 중요한 단계로 작용합니다.
결과를 최적화하거나 발생한 문제를 해결하기 위해 프로토콜 수정이 필요할 수 있습니다. 예를 들어, 장 상피의 형태학적 변화를 정확하게 나타내기 위해서는 Carnoy의 고.......
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공개 사항
저자는 공개할 내용이 없습니다.
감사의 글
동물 치료를 제공해 주신 실험동물센터(Laboratory Animal Center), 베이징 임상연구소(Beijing Clinical Research Institute), 베이징 우정병원(Beijing Friendship Hospital)에 감사드립니다. 이 연구는 국가핵심기술 R&D 프로그램(No. 2015BAI13B09), 베이징자연과학재단(No. 7232035), 중국국가자연과학재단(No. 82171823, 82374190), 베이징 친선병원 저명한 젊은 학자(No. yyqcjh2022-4)의 지원을 받았다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 1 M HEPES | Thermo | 15630080 | |
| APC 안티 마우스 I-A/I-E (MHC-II) | 바이오레전 | 드 107614 | |
| APC 안티 마우스 TCRb | 바이오레전 | 드 109212 | |
| APC/Cy7 안티 마우스 CD4 | 바이오레전 | 드 100414 | |
| APC/Cy7 안티 마우스 Ly6G | 바이오레전 | 드 127624 | |
| 브릴리언트 바이올렛 421 안티 마우스 CD69 | Biolegend | 104545 | |
| Brilliant Violet 421 안티 마우스 F4/80 | Biolegend | 123132 | |
| Brilliant Violet 785 안티 마우스/인간 CD44 | Biolegend | 103041 | |
| BUV395 안티 마우스 CD8a | BD | 563786 | |
| BUV737 안티 마우스 CD3e | BD | 612771 | |
| 콜라겐 분해 효소 IV | 시그마-알드리치 | C5138 | |
| 추출한 배양 현미경 | CKX53 | Olympus | |
| Deoxyribonuclease I(DNase I) | Sigma-Aldrich | DN25-5G | |
| DL-Dithiothreitol 용액 | Sigma-Aldrich | 43816-10ML | |
| EDTA | Sigma-Aldrich | EDS-100G | |
| FITC 안티 마우스 CD45 | Biolegend | ||
| FITC-덱스트란(70kWM) | 시그마-알드리치 | FD70-100MG | 위장 통과 분석 |
| HE 염색 키트 | solarbio | G1120 | |
| PE 안티 마우스 CD11b | Biolegend | 101208 | |
| PE 안티 마우스 PD-1 | Biolegend | 114118 | |
| PE/Cy7 안티 마우스 CD11c | Biolegend | 117318 | |
| Percoll | GE (Pharmacia) | 17-0891-01 | |
| Symphony A5 유세포 분석기 | BD- | 면역 세포 검출 및 분류 | |
| Tribromoethanol | Sigma-Aldrich | T48402 | 마취 |
| Varioskan LUX | Thermo | N16699 | 다중 모드 마이크로플레이트 리더 |
| Zombie Aqua Fixable Viability kit | Biolegend | 423102 | Fluorescent 생존 염료 |
참고문헌
- Chapman, S. J., Pericleous, A., Downey, C., Jayne, D. G. Postoperative ileus following major colorectal surgery. Br J Surg. 105 (7), 797-810 (2018).
- Farro, G., et al. CCR2-dependent monocyte-derived macrophages resolve inflammation and restore gut motili....
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