두개골의 창문을 통해 네크로 텍스의 혈류의 2 광자 이미징을위한 방법

요약

대뇌 피질의 혈류 역학은 2 광자 현미경과 설치류 동물의 꼬리 정맥에 주입 이미징 형광 dextran의 염료에 의해 생체내에서 공부하실 수 있습니다. 이 비디오는 어떻게 유리 커버 두개골 윈도우 준비를 통해 마우스의 네크로 텍스의 이미지 혈류 역학을 보여줍니다.

초록

생활 설치류의 손상 두뇌에 이미지 대뇌 vasculature (모세 혈관에 대형 선박에서)와 기록 혈류 역학을하는 기능은 강력한 기술입니다. 두개골 창문을 통해 생체내에서 2 광자 현미경을 사용하여 정맥 주사 이미지를 형광 염료 수 있습니다. 이것은 혈액 흐름 측정을 얻기 위해 또한 이미지 외피 vasculature을 한을 허용합니다. 이 기술은 원래 데이비드 Kleinfeld 및 Winfried Denk에 의해 개발되었다. 방법은 neurodegenerative 장애로, 뇌 종양, 또는 정상적인 뇌 생리학에 뇌성 국소 빈혈 동안 또는 후에 혈류 역학을 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 예를 들면, 그것은 경색과 주변 적혈구 세포 속도 또는 유동적 방법 뇌졸중 원인은 혈액의 흐름 방향으로 교대와 변화 연구에 사용되고 있습니다. 여기서 우리는 꼬리 정맥에 주입 형광 염료를 사용하여 생활 생쥐의 네크로 텍스의 이미지 혈류 역학에 2 광자 현미경을 사용하는 방법을 보여줍니다.

프로토콜

형광 dextrans의 염료의 꼬리 정맥 주사

1. 이미지 대뇌 vasculature하기 위해 동물은 형광 색소를 정맥 주입해야합니다. dextran의 잔기가 뇌 혈액 장벽을 횡단하여 혈관 밖으로 누출에서 염료를 방지하기 때문에 우리는 dextran - 복합 염료를 사용합니다.
2. 마우스 (유도 4 %, 사출 중 1.5-2 %) isoflurane과 anesthetized 있습니다.
3. 꼬리는 70 % 알코올로 소독합니다.
4. 26 게이지 바늘로, 호수에 녹아있는 rhodamine dextran의 5 % V / V 솔루션의 75-100 μl는 꼬리의 축을 따라 꼬리 정맥을 통해 주입 도중입니다.
5. 염료는 약 2 시간 rhodamine의 염료를 사용하는 경우 분홍색으로 바뀔 것이다 소변에 배설 때까지 동물은 즉시 꼬리 정맥 주사 후 몇 군데있을 수 있습니다.

두 광자 현미경을 사용하여 혈액 흐름의 이미징 (몇 군데 선박의 수에 따라 총 소요 시간 30-60 분 세션 당)

1. 형광 염료 dextran 사출 다음, 마우스 (유도 4 %, 영상에 대한 1-1.5 %) isoflurane과 anesthetized 있습니다.
2. 마우스는 단....

토론

대뇌 피질의 혈류 역학은 두 광자 현미경과 설치류 동물의 꼬리 정맥에 주입 이미징 형광 dextran의 염료에 의해 생체내에서 공부하실 수 있습니다. 이 비디오는 어떻게 유리 커버 두개골 윈도우 준비를 통해 마우스의 네크로 텍스의 이미지 혈류 역학에 대한 방법을 보여주었다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Fluorescein isothiocyanate-dextran	시약	Sigma-Aldrich	FD500S	분자량 500,000
Rhodamine B isothiocyanate-dextran	시약	Sigma-Aldrich	R9379	분자량 ~70,000