약물 스크리닝을 위한 3차원 뇌종양 스페로이드의 대사 프로파일링의 발전

요약

여기에서 우리는 세포외 플럭스 분석을 통해 3차원(3D) 신경아교종 스페로이드와 이미징 기반 정규화를 통합하는 대사 프로파일링 플랫폼을 구축합니다. 이 접근법을 통해 약물 치료에 대한 종양 대사 반응을 보다 정확하게 평가할 수 있으며 잠재적인 내성 메커니즘에 대한 통찰력을 얻을 수 있습니다.

초록

뇌종양, 특히 신경아교종은 공격적인 특성, 복잡한 종양 미세 환경, 기존 치료법에 대한 내성으로 인해 치료하기 어렵습니다. 기존의 2차원(2D) 세포 배양은 실제 종양 환경을 복제하지 못하는 경우가 많아 약물 효능을 부정확하게 예측할 수 있습니다. 일반적으로 2D 배양의 실시간 대사 분석에 사용되는 세포외 플럭스 분석 기술은 세포외 산성화율(ECAR) 및 산소 소비율(OCR)과 같은 주요 대사 매개변수를 측정하여 세포 대사에 대한 통찰력을 제공합니다. 3D 모델의 사용은 생체 내 종양 환경을 보다 정확하게 모방하므로 상당한 발전을 나타냅니다. 세포외 플럭스 분석기는 3차원(3D) 신경아교종 세포 모델에 적용되어 보다 생리학적으로 관련성이 높은 맥락에서 해당작용 및 산화적 인산화를 포함한 중요한 대사 경로를 분석할 수 있었습니다.

U87 세포를 96웰 저부착 플레이트에 적절한 밀도로 파종하고 5일 동안 배양했습니다. 5일째에 3D 스페로이드 형성이 고함량 이미징을 통해 관찰되었습니다. 성공적으로 형성된 스페로이드를 대사 분석을 위해 폴리-L-라이신으로 코팅된 대사 분석 플레이트로 옮겼습니다. 이러한 측정의 정확도를 향상시키기 위해 고함량 이미징 시스템은 3D 세포 크기를 평가하여 세포외 플럭스 데이터의 정확한 정규화를 허용하고 세포 크기 차이로 인한 대사 변화를 최소화합니다. 이 통합 접근 방식은 약물 치료에 대한 신경아교종 세포 대사 반응에 대한 보다 신뢰할 수 있는 분석을 제공하여 약물 내성의 잠재적인 메커니즘을 밝힙니다. 궁극적으로 이 방법론은 신경아교종의 대사 역학에 대한 귀중한 통찰력을 제공하고 새롭고 임상적으로 관련된 치료 전략의 개발을 지원합니다.

서론

널리 퍼져 있고 공격적인 형태의 뇌종양인 신경아교종은 빠른 진행, 매우 이질적인 종양 미세 환경 및 기존 치료법에 대한 현저한 내성으로 인해 심각한 임상적 문제를 야기합니다¹. 이러한 복잡성으로 인해 치료 평가의 정확성을 향상시키기 위해 보다 생리학적으로 관련된 실험 모델이 필요합니다. 기존의 2차원(2D) 세포 배양 시스템은 생체 내 종양 구조 및 세포-세포 상호작용2을 요약하지^{못하여 종종} 약물 효능 및 종양^생물학에 관한 오해의 소지가 있는 결론을 내립니다3.

이러한 한계를 해결하기 위해 3차원(3D) 종양 모델이 우수한 대안으로 등장하여 생체 내 종양의 구조적, 기능적 특성을 모방하여 향상된 생물학적 관련성을 제공합니다 ^4,5. 동시에, 대사 재프로그래밍은 신경아교종 진행 및 치료 저항성의 특징으로 점점 더 인식되고 있습니다 ^6,7,8. 세포외 플럭스 분석은 세포외 산성화 속도(ECAR, 주로 해당작용 젖산 생산에서 양성자 유출 측정) 및 산소 소비율(OCR, 산화 인산화에서 미토콘드리아 산소 활용 정량화)과 같은 주요 대사 매개변수를 실시간으로 측정하기 위해 널리 채택된 기술이 되었으며, 해당작용 및 산화적 인산화 경로에 대한 중요한 통찰력을 제공합니다 ^9,10,11.

이 연구에서는 세포외 플럭스 분석을 3D 신경아교종 스페로이드를 분석하기 위해 채택되어 생체 내 종양 상태와 매우 유사한 맥락에서 대사 경로를 조사할 수 있었습니다. U87 신경아교종 세포를 투명한 둥근 바닥 초저부착 96웰 플레이트에 웰당 1,500개의 세포 밀도로 파종하고 스페로이드 형성을 촉진하기 위해 5% CO₂ 로 37°C에서 5일 동안 배양했습니다. 스페로이드 형태를 확인하고 세포 크기를 평가하기 위해 고함량 이미징을 사용했습니다. 대사 분석에 앞서 직경이 약 220μm인 조밀하고 원형의 3D 세포 스페로이드를 폴리-L-라이신으로 사전 코팅된 분석 플레이트로 옮겨 접착 및 측정 안정성을 보장했습니다. 중요한 것은 스페로이드 크기를 기반으로 한 대사 데이터의 정규화가 통합 고함량 이미징을 통해 수행되어 변동성을 줄이고 데이터 신뢰성을 향상시켰다는 것입니다.

3D 배양, 세포외 플럭스 분석 기술 및 이미징 기반 정규화를 결합한 이 통합 플랫폼을 통해 치료 개입에 대한 신경아교종 대사 반응을 보다 정확하게 평가할 수 있습니다. 이 연구는 약물 내성의 대사 토대를 연구하기 위한 강력한 프레임워크를 제공하고 신경아교종에 대한 보다 효과적이고 임상적으로 전환 가능한 치료 전략 개발에 기여합니다.

프로토콜

알림: 모든 시약 및 소모품의 전체 사양은 재료 표에 자세히 설명되어 있습니다.

1. 2D 세포 배양

1. 멸균 조건에서 10%(v/v) 소 태아 혈청(FBS)이 보충된 최소 필수 배지(MEM)에서 U87 세포를 유지합니다. 세포가 80% 합류에 도달하면 표준 계대 절차를 수행합니다.
   참고: 배양 과정 전반에 걸쳐 세포 상태를 면밀히 모니터링하고 비정상적인 성장 또는 형태학적 변화를 보이는 세포를 후속 실험에서 제외합니다.
2. U87 세포를 10cm 세포 배양 접시에 시드하고 5%(v/v) CO₂ 및 90-95% 상대 습도로 37°C의 멸균 세포 배양 인큐베이터에서 배양합니다.
   알림: 최적의 성장 조건을 유지하려면 배지를 정기적으로 교체해야 합니다.

2. 3D 세포 스페로이드 형성

1. 실험 준비
   1. 실험 절차를 시작하기 전에 그림 1 의 전체 워크플로를 검토하십시오.
      주의: 세포 건강을 보장하고 오염을 방지하기 위해 실험 전반에 걸쳐 무균 기술을 엄격히 준수하십시오.
2. 세포 해리 및 계수
   1. 세포 배양 접시에서 사용한 배지를 제거하고 U87 세포를 인산염 완충 식염수(PBS) 9mL(세척당 3mL)로 세 번 세척합니다. 사용한 시약을 20-25%(v/v) 표백제 용액에 폐기하여 모든 생리 활성 물질을 비활성화합니다.
   2. 접시에 트립신 용액 1mL를 넣고 37°C에서 2-3분 동안 배양합니다. 현미경 관찰 하에서 모든 세포가 분리되면 37°C로 예열된 10% FBS를 함유한 DMEM 2mL로 트립신을 중화합니다.
   3. 세포 현탁액을 15mL 원심분리기 튜브로 옮기고 200× g 에서 3분 동안 원심분리합니다. 상청액을 버리고 10% FBS가 보충된 DMEM 1mL에 세포 펠릿을 재현탁합니다. 균일한 세포 현탁액을 보장하기 위해 세포를 부드럽게 피펫팅합니다. 그런 다음 혈구계 또는 자동 세포 계수기를 통해 계수하고 초기 세포 수를 기록합니다.
      알림: 기계적 손상을 방지하기 위해 세척 및 배지 추가 중에 셀을 부드럽게 다루십시오. 세포 생존력과 계수 정확도에 영향을 미칠 수 있는 기포 형성을 방지하기 위해 피펫팅 힘을 제어할 수 있습니다.
3. 세포 현탁액 희석
   1. 사용하지 않은 배지를 37°C로 예열합니다. 세포 현탁액을 실온(RT; 25 ± 2°C)에서 30분 동안 유지합니다.
   2. 초기 세포 수를 기준으로 10% FBS를 함유한 DMEM으로 세포 현탁액을 최종 부피 20mL로 희석하여 약 200,000개의 세포를 확보합니다.
      참고: 최종 희석 전에 침전을 방지하기 위해 세포 현탁액을 부드럽게 피펫팅하십시오. 사용하지 않은 배지를 37°C로 유지하고 세포 현탁액을 RT에서 배양했습니다. 웰당 1,500개의 세포가 있는 96개의 웰을 시드한 경우, 과잉을 설명하기 위해 총 부피 22mL를 준비했습니다. 희석된 세포 현탁액을 50mL 멸균 원심분리기 튜브로 옮기고 완전히 혼합했습니다.
4. 초저부착 96웰 플레이트의 세포 파종
   1. 200μL 피펫을 통해 최종 세포 현탁액을 완전히 혼합합니다. 200μL의 현탁액(1,500세포/웰)을 가장자리를 따라 투명한 둥근 바닥 초저부착 96웰 플레이트의 각 웰에 천천히 첨가합니다.
      알림: 효율성을 위해 다중 채널 피펫 사용을 고려하십시오.
   2. 오염을 방지하기 위해 모든 우물이 채워진 후 남아 있는 현탁액을 버리십시오.
5. 원심 분리
   1. 원심분리 중 누출을 방지하기 위해 파라필름으로 플레이트를 단단히 밀봉하십시오. 혼합물을 200×g에서 2 분 동안 원 심분리하여 각 웰의 바닥에 있는 세포를 펠릿화합니다.
   2. 원심분리기에서 플레이트를 제거하고 파라필름을 조심스럽게 제거한 다음 플레이트를 37°C, 5% CO₂ 인큐베이터에 넣습니다.

3. 대사 분석 플레이트의 Poly-D-Lysine 코팅

참고: 대사 분석 마이크로플레이트는 세포외 플럭스 분석 중 세포 스페로이드 접착을 위해 설계된 특수 마이크로플레이트입니다.

1. 50mL의 멸균수에 5mg의 폴리-D-라이신을 용해시켜 코팅 용액을 준비합니다. 잘 섞는다.
2. 대사 분석 플레이트의 각 웰에 30μL의 코팅 용액을 첨가합니다. 여분의 용액을 부드럽게 흔들거나 흡인하여 기포가 없는지 확인하십시오.
3. 플레이트를 배양하고 RT에서 20분 동안 덮습니다. 코팅 용액을 흡인하고 200μL의 멸균수로 웰을 두 번 세척합니다.
4. 플레이트를 최소 30분 동안 자연 건조시킨 다음 CO₂ 없이 37°C에서 30분 동안 가열하여 코팅을 안정화시킵니다.
5. 각 웰에 175μL의 예열된 배지를 추가하고 세포 스페로이드 이식이 준비될 때까지 플레이트를_CO2가 없는 인큐베이터에서 37°C로 유지합니다.

4. 스페로이드 성장 모니터링

1. 배양 5일 후 스페로이드 플레이트를 고함량 이미징 시스템으로 옮깁니다.
2. 구성 이미징 매개변수: 온도를 37°C로, CO₂ 를 5%로 설정하고 플레이트 유형, 채널 및 초점 범위를 조정합니다.
3. 10x 대물렌즈와 이미징 소프트웨어가 있는 공초점 현미경을 통해 스페로이드 이미지를 획득합니다.
4. 온전한 스페로이드(예: 그림 2A-C)를 포함하는 웰을 식별하고 전송을 위한 위치를 기록합니다. 불규칙한 스페로이드가 있는 우물을 제외합니다(예: 그림 2D)."

5. 스페로이드 처리

참고: 대사 반응을 평가하기 위해 성숙한 3D 스페로이드에 대해 약물 치료를 수행했습니다.

1. 스페로이드 그룹 할당
   1. 손상되지 않은 스페로이드를 두 그룹에 할당합니다.
      대조군: 6개의 복제 웰
      치료군: 6개의 복제 웰(페노피브레이트 처리)
2. 약물 용액 준비
   1. 페노피브레이트 작업 용액을 최적의 농도(예: 100μM)로 예열된 신선한 배지에서 준비합니다.
      참고: 처리군을 100% DMSO에서 재구성하여 원액을 생성한 후 신선한 예열 배지에서 희석했습니다. 대조군에는 약물 처리 샘플에 존재하는 것과 동일한 최종 농도의 DMSO(0.1% v/v)를 투여했습니다. 최종 농도는 용량-반응 분석을 통해 결정되었습니다.
3. 중간 교체
   1. 각 웰에서 100μL의 배지를 벽을 따라 천천히 흡인합니다.
      알림: 스페로이드 교란을 방지하기 위해 우물 바닥에 접촉하지 마십시오.
   2. 100μL의 신선한 배지를 대조군 웰에 추가합니다.
   3. 100μL의 페노피브레이트 작업 용액을 처리 웰에 추가합니다.
4. 처리 후 배양
   1. 플레이트를 5% CO₂ 인큐베이터에서 37°C로 부드럽게 되돌립니다. 72시간 동안 배양합니다.
5. 형태학적 평가
   1. 4단계의 이미징 절차에 따라 스페로이드의 무결성을 평가합니다.

6. 세포 스페로이드의 전달

1. 이미징 시스템에서 스페로이드 함유 저부착 플레이트를 조심스럽게 제거하고 생물 안전 캐비닛 내의 멸균 표면에 놓습니다. 전사를 위해 폴리-L-라이신 코팅 분석 플레이트를 서로 인접하게 놓습니다.
2. 손상 없이 세포 스페로이드를 부드럽게 흡인할 수 있도록 20μL 피펫의 팁을 다듬습니다.
3. 웰 바닥에서 온전한 각 스페로이드를 부드럽게 흡인하고 세포판의 해당 웰로 옮겨 20초 동안 가라앉히도록 합니다. 10× 현미경 검사에서 부유 파편이 없어 접착력을 확인합니다.
4. 모든 스페로이드에 대해 반복하고 4단계에서 설명한 이미징 시스템을 통해 전달 효율을 확인합니다.

7. 대사 분석

1. 시료 탈기
   1. 약물 처리된 스페로이드 분석 플레이트를 CO₂가 없는 사전 평형화된 37°C 수화 챔버에 넣습니다.
      참고: 대사 측정 정확도를 보장하기 위해 엄격한 환경 제어로 1시간 동안 연속 탈기를 수행했습니다.
2. 시약 준비 및 약물 투여
   1. 시약을 병렬로 준비하고 1시간 탈기 기간 동안 약물을 로드합니다.
      참고: 이 실험의 주요 목적은 미토콘드리아 스트레스를 평가하는 것입니다. 모든 절차는 이 목표에 세심하게 맞춰져야 합니다. 데이터 정확성과 신뢰성을 보장하기 위해 고유한 실험 유형에 대해 특정 프로토콜을 따라야 합니다.
   2. 약물 준비: 다음 화합물을 사용하십시오.
      올리고마이신(미토콘드리아 복합체 V 억제제)
      카르보닐 시안화물-4(트리플루오로메톡시) 페닐히드라존(FCCP, 언커플러)
      로테논(복합체 I 억제제)과 항마이신 A(복합체 III 억제제)의 혼합물
      참고: 약물은 이 연구에 사용된 미토콘드리아 스트레스 테스트 키트에서 얻었습니다. 일부 화합물은 생물학적 유해합니다. 엄격한 생물 안전 프로토콜(개인 보호 장비 및 비상 대비)을 사용해야 합니다.
   3. 약물 제형
      1. 표 1과 같이 분말 약물의 원액을 준비합니다.
      2. 원액을 표 2에 지정된 작업 농도로 희석합니다.
         참고: 용액은 농도 구배에 걸쳐 균질성을 보장하기 위해 완전히 소용돌이치거나 교반됩니다.
3. 검출 프로브 카트리지에 화합물 로딩
   알림: 검출 프로브 카트리지는 산소 및 pH를 실시간으로 측정하기 위한 바이오센서 프로브가 포함된 일회용 카트리지입니다.
   1. 프로브 카트리지 활성화(화합물 로딩 선행):
      알림: 사용하기 최소 12시간 전에 다음 단계를 완료하여 센서가 활성화되었는지 확인하십시오.
      1. 수화 플레이트의 각 웰에 200μL의 보정 용액을 첨가합니다.
      2. 검출 프로브 카트리지를 수화 플레이트에 조심스럽게 배치하여 모든 프로브가 교정 용액에 완전히 잠기도록 합니다.
      3. 조립된 장치를 37°C CO₂ 프리 인큐베이터에서 12-24시간 동안 배양하여 센서를 활성화합니다.
         알림: 불완전한 침지 또는 불충분한 수화 공급은 측정 드리프트(±15% OCR 오류)를 유발합니다.
   2. 다중 채널 또는 전자 피펫을 사용하여 웰에 정확한 부피를 전달하고 웰 가장자리에 잔류 물방울이 남지 않도록 합니다.
      참고: 급성 약물 자극이 필요하지 않으므로 표준 로딩 순서를 따르십시오.
   3. 운송 중 방해를 방지하기 위해 적재 후 프로브 플레이트를 안정된 표면에 놓으십시오.
      참고: 로딩 정확도는 결과에 큰 영향을 미칩니다.
4. 소프트웨어 구성
   1. 소프트웨어를 실행하고 미토콘드리아 스트레스 테스트 분석 프로토콜을 선택합니다.
   2. 사전 정의된 실험 그룹화에 따라 그룹을 할당합니다.
   3. 파일 이름을 설정하고 실행 시작을 클릭합니다.
5. 검출 프로브 카트리지의 교정.
   1. 시스템 프롬프트에 따라 로드된 프로브 플레이트를 기기 슬롯에 부드럽게 삽입합니다.
   2. 교정을 시작합니다(15-20분). 안정적인 조건을 유지하십시오. 진동을 피하십시오.
   3. 보정 후 즉시 하이드레이션 플레이트를 제거하십시오(화면의 지시에 따름).
      알림: 교정하기 전에 플레이트 뚜껑을 제거하십시오.
6. 3D 스페로이드의 대사 프로파일링
   1. 탈기된 3D 스페로이드 분석 플레이트를 기기 측정 슬롯으로 옮깁니다. 다음을 확인하여 프로브 어레이와의 정확한 정렬을 보장합니다: (i) 플레이트 코너 일치 슬롯 가이드; (ii) 웰 A1은 인덱스 위치와 정렬됩니다. (iii) 플레이트와 기기 표면 사이에 눈에 보이는 간격이 없습니다.
   2. 시작을 클릭하여 미토콘드리아 스트레스 분석을 시작합니다(지속 시간: ~1.5시간). 전체적으로 기기 매개변수를 모니터링합니다.
      참고: 측정하기 전에 3D 스페로이드 분석 플레이트 뚜껑을 제거하십시오.
7. 데이터 분석
   1. 이미징 분석
      1. 3D 스페로이드 분석 플레이트를 고함량 이미징 시스템으로 옮깁니다.
         참고: 이미지는 4단계에서 설명한 대로 획득되었습니다. 이미징 결과 대부분의 스페로이드는 손상되지 않은 반면 소수는 그림 3과 같이 이동 과정에서 손상을 입은 것으로 나타났습니다.
      2. 7.7.1.3-7.7.1.7단계에 따라 Harmony 소프트웨어 버전 5.2를 통해 세포 스페로이드의 형태학적 데이터(예: 면적, 길이, 너비)를 분석합니다.
      3. 텍 스처 영역 모듈을 대략적으로 적용하여 이미지에 있는 개체의 텍스처 특징을 기반으로 이미지 콘텐츠를 세 개의 클러스터로 나누어 배경에서 3D 스페로이드를 분리합니다.
      4. 이미지 영역 찾기 모듈을 적용하여 부피 기반 크기 특성을 통해 사전 분리된 3D 스페로이드의 분리를 미세 조정하여 불순물을 제거하고 온전한 스페로이드를 유지합니다.
      5. Morphology Properties 모듈을 통해 3D 스페로이드의 형태학적 매개변수를 측정합니다.
      6. 모집단 선택 모듈을 적용하여 궁극적으로 진짜 3D 세포 스페로이드를 필터링합니다.
      7. 표 3과 같이 형태학적 데이터 결과를 내보냅니다.
   2. 데이터 처리
      참고: 실험 아티팩트를 최소화하기 위해 이미징 출력의 매개변수를 통해 세포 데이터를 정규화합니다.
      1. 분석 소프트웨어를 통해 원시 대사 데이터를 엽니다.
      2. 정 규화 옵션을 선택하여 정규화 모드 편집 인터페이스에 액세스합니다.
      3. 정 규화 값 필드에 분석 플레이트의 각 해당 웰에 포함된 스페로이드의 단면적을 입력합니다.
      4. 배율 계수 매개변수를 1,000,000으로 설정합니다.
      5. 적용 버튼을 클릭하여 정규화 프로세스를 완료합니다. 최종 결과는 그림 4에 나와 있습니다.

8. 폐기물 처리

1. 생물학적 위험 및 실험실 폐기물 관리 프로토콜에 따라 모든 실험 폐기물(배지, 시약, 소모품 및 세포 현탁액)을 폐기하십시오. 환경 오염을 방지하기 위해 폐기하기 전에 생물 활성 폐기물을 오토클레이브하거나 화학적으로 소독하십시오.

결과

3D 세포 스페로이드의 에너지 대사 검출 과정에서 가장 중요한 세 단계는 3D 세포 스페로이드의 배양, 스페로이드 전달 과정, 검출 후 스페로이드의 이미징 및 정량화입니다(그림 1). 또한 세포 스페로이드의 상태를 관찰하는 것도 매우 중요합니다. 상술한 실험 절차에 따라 실험을 실시한 결과, 5^일 째에 스페로이드가 검출되고(도 2), 스페로이드는 평균 면적이 약 50,000μm²까지 성장하였다(표 3). 세포 스페로이드의 성장 시간을 연장하려면 7-10일로 연장할 수 있습니다. 대사 분석 플레이트의 하단 영역에 의해 제한되므로 검출할 세포 스페로이드가 너무 크지 않아야 합니다. 세포 스페로이드를 옮기는 과정에서 스페로이드가 적절하고 정확하게 포착되지 않으면 스페로이드의 손실도 발생하여 실험 결과에 영향을 미칩니다. 따라서 실험 후 세포외 플럭스 측정을 보정하고 실험 결과의 ...

토론

세포외 플럭스 분석을 3D 신경아교종 모델에 적용하는 것은 종양 세포 대사 연구에서 중요한 방법론적 발전을 나타냅니다. 전통적인 2D 배양은 오랫동안 시험관 내 실험의 기초 역할을 해왔지만 생 체 내 종양의 특징인 공간 구조, 세포-세포 및 세포-기질 상호 작용, 산소 및 영양 구배를 포착하지 못합니다¹². 이러한 특징은 대사 재프로그래밍이 종양 진행 및 치료 저항성에 중요한 역할을 하는 신경아교종과 특히 관련이 있습니다¹³.

세포외 플럭스 분석을 3D 배양에 적용할 때 주목할만한 과제는 대사 매개변수의 정확한 정규화입니다. 2D 단층과 달리 3D 스페로이드는 세포 수, 크기 및 모양 측면에서 더 큰 가변성을 나타내며, 이는 수정되지 않은 경우 ECAR 및 OCR 데이터 해석에 상당한 오류를 일으킬 수 ...

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
접시 10cm	코 닝	430167
15 mL 원심분리기 튜브	코 닝	430791
50mL 원심분리기 튜브	코 닝	430828
칼세인, AM	인비트로젠	C1430 시리즈
백작부인 3	써모 피셔		자동 셀 카운터
태아 소 세럼	깁코	A5669701
하모니 5.2	퍼킨엘머		이미징 소프트웨어
회크스트 33342	솔라바이오	C0031
MEM EBSS 매체	하이클론	SH30024.01
오페레타 CLS	퍼킨엘머		고함량 이미징 분석 시스템
PBS	하이클론	SH30256.01
Poly-D 라이신 브롬화수소화물	시그마	P7280
둥근 바닥 초저 부착 96웰 플레이트	코 닝	4515
Seahorse Wave 데스크탑 소프트웨어	애질런트
해마 XFe96	애질런트		체외 대사 시험기
소르발 ST8R	써모 피셔		원심 분리기
트립신 0.25% EDTA	깁코	25200072
U87MG 세포주	세포 자원의 국가 인프라
XF 1.0 M 포도당 용액, 50 mL	애질런트	103577-100
XF 100 mM 피루베이트 용액, 50 mL	애질런트	103578-100
XF 200 mM 글루타민 용액, 50 mL	애질런트	103579-100
XF 교정 용액 500 mL	애질런트	100840-000
XF 세포 Mito 스트레스 테스트 키트	애질런트	103015-100
XF DMEM 배지, pH 7.4, 500 mL	애질런트	103575-100
XFe96/XF Pro 플럭스팍 검출 프로브 어레이	애질런트	103792-100
XFe96/XF Pro Fluxpak-대사 분석 플레이트	애질런트	103792-100