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방법 논문

7일간의 관찰 중 신경정신과 합병증이 동반된 허혈성 뇌졸중의 깨어 있는 쥐 모델

318 조회수

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DOI:

10.3791/69194

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2025년 12월 19일

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1Branch of the Shemyakin-Ovchinnikov Institute of Bioorganic Chemistry of the Russian Academy of Sciences, Russian Federation, 2Pushchino Branch of the Federal State Budgetary Educational Institution of Higher Education, Russian Biotechnological University (BIOTECH University), 3Shemyakin-Ovchinnikov Institute of Bioorganic Chemistry, Russian Academy of Sciences

이 논문에서

요약

깨어 있는 쥐에서 국소 허혈성 뇌졸중의 새로운 모델이 제안되었습니다. 이는 쥐의 내경동맥에 공기 색전을 주입함으로써 이루어졌습니다. 국소성 허혈성 뇌졸중의 발생은 트리페닐테트라졸륨 염화물로 인한 뇌 염색, 기능 검사, 생리학적 매개변수 평가를 통해 확인되었습니다.

초록

가스 색전증에 의해 유발된 쥐의 실험적 뇌졸중의 번역 모델은 뇌졸중 발생 경향을 명확히 하고 새로운 치료법과 검증된 약물의 신경보호 효과를 평가하기 위해 만들어졌습니다. 적당히 시간과 노동이 소요되는 이 프로토콜은 깨어 있는 동물에서 급격한 뉴런 사각의 역학을 관찰할 수 있게 해주어, 섬망을 포함한 급성 뇌졸중을 평가하고 혈압, 체온, 호흡 분량 변화와 같은 자율신경 장애를 모니터링할 수 있는 독특한 기회를 제공합니다. 대기 중 공기(100 μL)는 혈관 카테터를 통해 외부 경동맥을 통해 총경동맥에 역행적으로 삽입하여 주입 펌프를 사용해 투여했습니다. 색전술 후 24시간이 지나면 동물들은 전형적인 행동, 운동 결손, 조직병리학적 차이를 보입니다. 실험 7일째에 신경학적 상태가 유의미하게 개선되었고, 행동 검사 결과는 대조군과 근접했습니다. 동시에 허혈성 병변에서는 호중구에서 대식세포 침윤으로의 전환이 관찰됩니다. 제안된 모델은 뇌졸중 후 신경정신과 합병증과 그에 따른 생리적, 기능적, 조직병리학적 변화를 재현하여 전임상 연구에 활용할 수 있습니다.

서론

이 연구의 목적은 깨어 있는 쥐에서 국소 뇌허혈성 뇌졸중 모델을 개발하고, 이 모델을 인간 허혈성 뇌졸중의 임상적 측면에 가장 근접하게 적용하는 것이었습니다. Söyland 등의 연구에 따르면, 환자의 62.6%가 깨어 있을 때 허혈성 뇌졸중의 유의미한 증상을 보였으며, 각성 뇌졸중은 19%에 불과했습니다. 따라서 동물에서 뇌동맥색전술 중 깨어 있는 상태의 발생이 가장 큰 관심사입니다. 국소 뇌허혈성 뇌졸중 연구에 사용되는 고전적 모델로는 경두개 교합, 혈관 내 섬유 중부 대뇌동맥 폐색, 색전성 폐색, 엔도텔린-1 폐색, 광혈전증 모델2가 포함됩니다. 고전적 모델링 방법은 동물을 마취제의 영향에 노출시키며, 이는 허혈성 뇌졸중 모델에서 종점의 왜곡을 초래할 수 있습니다. 이소플루란은 폐색 수술에서 가스 마취의 가장 효율적인 방법으로 광범위하게 사용됩니다 3,4,5. 그러나 24시간 후 중뇌동맥 폐색(MCAO) 후 뇌 손상 정도는 동물에서 이소플루란 마취 지속 시간과 반비례하는 것으로 나타났습니다. 이소플루란은 1,000개 이상의 허혈 관련 차별발현 유전자발현 6에 영향을 미치는 것으로 입증되었으며, 이는 완전히 신뢰할 수 없는 허혈성 뇌졸중 모델을 초래할 수 있습니다.

쥐의 허혈성 뇌졸중 모델링 방법 중 하나는 혈전을 내경동맥에 주입하는것입니다. 그럼에도 불구하고, 이 모델에서 허혈성 뇌졸중 유도는 카테터 삽입 후 1시간 후에 이소플루란으로 수행되었습니다. 이러한 전형성이 혈전 투여의 신경학적 및 생리학적 결과 발달을 방해했을 가능성도 있습니다.

깨어 있는 쥐에서 내경동맥 색전술을 한 뒤 중대뇌동맥 뇌 부위의 국소 뇌 손상을 통해 허혈성 뇌졸중을 모델링하는 대안적 방법이 제안되었습니다. 카테터 삽입은 허혈성 뇌졸중 모델링 24시간 전에 시행되었습니다. 이로 인해 색전치료 효과가 마취에 의해 영향을 받지 않도록 보장되었습니다.

제안된 모델은 허혈에 엔도텔린-1 8, 필라멘트9, 응고성 색소10을 사용하지 않습니다. 카테터를 통해 쥐에게 투여할 약물 선택은 이 방법이 가능하다는 전제에 기반하여 동물을 입체성 프레임에 고정시키고 마취할 필요가 없다는 전제였다 8,10.

더 나아가, 이 모델은 색전술 직후 동물의 생리학적 및 신경학적 매개변수를 관찰할 수 있게 합니다; 허혈성 뇌졸중 모델링의 대체 방법들은 이와 호환되지 않는 것으로 보입니다. 문헌에서는 허혈성 뇌졸중 모델링 후 뇌손상과 신경학적 장애의 종말 평가가 가장 흔히 폐쇄 후 24시간 후에 평가됩니다11, 12, 13, 14.

깨어 있는 쥐를 허혈성 뇌졸중 모델링에 활용하는 것은 기존의 고전 국소 허혈성 뇌졸중 모델에 대한 추가적 또는 대안이 될 잠재력을 가지고 있습니다. 이 접근법은 허혈성 뇌졸중 치료를 위한 등록 또는 개발 중인 제약제의 신경보호 잠재력을 보다 광범위하게 조사할 수 있게 합니다.

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프로토콜

이 연구는 실험실의 표준 운영 절차에 따라 수행되었으며, 러시아 과학 아카데미 셰먀킨-오브치니코프 생기화학 연구소 기관동물 관리 및 이용 위원회 생명윤리위원회(2025년 1월 17일자 프로토콜 번호 1016/25)의 승인을 받았습니다. 본 연구에서는 10주에서 12주 사이의 수컷 Sprague-Dawley(SD) 쥐 28마리를 사용했으며, 평균 체중은 301g이고 미생물학적 상태는 특정 병원체 자유(SPF)였습니다. 시약과 사용된 장비는 재료표에 나열되어 있습니다.

1. 동물 준비

  1. SPF 상태가 있는 10-12주 된 수컷 SD 쥐 28마리를 사용하세요. 가짜 그룹에는 12마리의 동물을, 뇌동맥 가스 색전증(CAE)이 동반된 허혈성 뇌졸중을 모델링하기 위해 16마리의 동물을 사용한다.
  2. 모든 기구를 소독제(0.5% 클로르헥시딘 빅루콘산염, 70% 에탄올)에 24시간 소독하세요.
  3. 마취는 티레타민 15 mg/kg과 졸라제팜 15 mg/kg + 자일라진 하이드로클로라이드 10 mg/kg 혼합 주사로 쥐를 마취합니다(기관에서 승인한 프로토콜에 따라).
  4. 마취의 수술 단계가 달성되었는지 확인하세요: 동물의 눈가를 만지고, 꼬리 끝을 꼬집어 보세요.
    참고: 이러한 조작 후 반사 신경이 관찰되지 않으면 동물은 마취된 것으로 간주됩니다.
  5. 복측 목 부위의 수술장을 뽑아.
  6. 동물을 수술대에 고정시키고, 부드러운 지혈대를 사용해 사지와 윗앞니를 고정하세요.
  7. 직경 0.8mm의 폴리에틸렌 튜브를 10cm 길이의 튜브로 자른 후, 끝부분에서 약 5mm 너비의 안정화 나선형을 비틀어 금속 튜브에 끼워 뜨거운 물(90°C)에 담근 것입니다. 튜브에 헤파린(50 ME)을 채우세요. 나선의 반대쪽 끝은 낚싯줄로 만든 플러그로 밀봉하세요.
    참고: 카테터는 의료용 폴리에틸렌 튜브로 만들어졌습니다. 카테터를 다룰 때 휘거나 집어붙이는 것을 피하세요.

2. 경동맥 카테터 삽입술

  1. 동물 목 배쪽에 약 5mm 길이의 절개를 내세요.
  2. 겸자를 사용해 목 근육을 박리하세요. 경동맥이 외부 및 내경동맥으로 갈라지는 부위를 열어주세요.
  3. 기관을 따라 흐르는 동맥을 찾아보세요. 동맥을 따라 흐르는 미주신경을 건드리지 않고 결합조직 덮개에서 집자로 조심스럽게 분리하세요.
  4. 겸자를 사용해 외경동맥 한 구간을 분리하세요.
  5. 총경동맥 양분기 쪽 꼬리 방향 3-5mm 지점에 임시 결찰을 고정합니다.
  6. 외경동맥에 두 개의 결찰을 붙이는데, 하나는 분기점 직후, 다른 하나는 분기점에서 4mm 떨어진 원위부에 있습니다.
    참고: 카테터 삽입은 이 두 결찰 사이에 시행됩니다. 분기 직후 삽입된 결찰은 카테터를 혈관에 고정시킵니다.
  7. 내경동맥 위에 한 개의 임시 결찰 두개골을 총경동맥의 분기점에 부착합니다.
  8. 분기 후 pterigopalatina 동맥에 결찰을 하세요.
    참고: 2.7 및 2.8단계의 결찰을 부착할 때, 총경동맥 주간(main trunk) 뒤에 숨겨진 측수선이 있어 출혈이 발생할 수 있습니다. 이 경우에는 결찰을 해야 합니다.
  9. 결찰 사이의 외경동맥에 가위를 사용해 절개를 하세요. 준비된 카테터(1.7단계)를 혈관에 생긴 구멍에 삽입하여 총경동맥 쪽으로 유도합니다.
  10. 원위 결찰을 풀고 카테터를 혈관 안쪽으로 더 밀어 넣어 총경동맥에 들어갑니다. 카테터가 안쪽에 있는 외경동맥 구간에 두 개의 결찰을 조심스럽게 묶으세요. 세 번째 결찰을 카테터 앞에 놓고 묶으세요.
    1. 쿠셔닝 링에 결찰로 카테터를 고정하세요. 경동맥과 외경동맥의 결찰을 제거하세요.
      참고: 카테터를 밀 때 혈관에서 혈액이 새어나올 수 있습니다.
  11. 혈관에서 혈액이 새는 경우, 혈관 구멍과 세 번째 결찰 사이에 중복 결찰을 놓으세요.
  12. 홈이 있는 바늘 디렉터로 고정 카테터를 어드름까지 안내하세요.
  13. 복부 상처는 4.0 봉합 재료로 봉합하세요. 연속 봉합을 사용하세요.
  14. 피부의 등쪽 면을 4.0 봉합사로 카테터 주위에 단단히 봉합하세요. 연속 봉합을 사용하세요. 카테터 외부에 접착성 석고 조각을 붙이고 봉합사에 묶어 더 단단히 고정하세요.
  15. 항생제 시프로플록사신을 5 mg/kg 용량으로 근육 주사로 투여하세요.

3. CAE 그룹 동물에서의 국소 뇌 허혈 모델링

  1. 쥐 카테터 삽입 24시간 후, 동물을 실험용 동물 고정기에 넣어 동물을 깨어 있는 상태로 두어 어깨에 삽입된 카테터에 접근할 수 있도록 합니다.
  2. 0.5mL 식염수(0.9% NaCl)가 채워진 주사기를 30G 바늘로 주입 펌프에 넣으세요.
  3. 주사기 바늘을 빈 폴리에틸렌 카테터(100 μL 용량)에 연결합니다. 폴리에틸렌 카테터의 다른 쪽 끝은 어댑터를 사용해 이식된 카테터에 연결하세요.
    참고: 적절한 카테터 이식과 혈전의 부재는 이식된 카테터에서 나온 헤파린이 공기가 포함된 카테터로 옮겨져 공기가 약간 압축될 때 입증됩니다. 그 이유는 쥐의 혈압이 연결된 카테터 내 공기 압력보다 높기 때문입니다.
  4. 주입 펌프의 주입 속도를 분당 10 μL로 설정하세요. 주입 펌프의 주입량을 120 μL로 설정하세요.
  5. 주입 펌프를 작동시켜. 폴리에틸렌 카테터에서 100 μL 공기와 20 μL 식염수 용액(0.9% NaCl)을 주입합니다.
    참고: 주사 과정은 10분 정도 소요됩니다. 이 시기에 동물을 관찰하세요. 주입 중에 동물은 소리를 내거나 갉아먹거나 고정장치를 파낼 수 있습니다.
  6. 동물을 고정장치에서 꺼내세요.
  7. 즉시 동물의 신경학적 상태를 0-5점 척도로 평가하세요: 0 = 신경학적 결손 없음, 1 = 전肢 완전 펴기 불가, 2 = 회전, 3 = 지지 상실, 4 = 의식 저하 상태에서 자발 걷기 불가, 5 = 사망.
    참고: 더 자세한 설명은 출처15를 참조하십시오. 동물이 공기를 투여한 직후 신경학적 장애를 보일 가능성은 없습니다. 이는 폐색이 동물의 해부학적 특징이나 높은 혈압 때문이 아님을 의미합니다.
  8. 신경학적 증상이 없으면 동물을 실험에서 제외합니다.
    참고: CAE를 가진 쥐는 신경학적 결손 척도에서 1-4점을 보입니다. 대부분은 사지 지지 상실이나 우울한 의식 상태에서 자발적인 걷기 불능 때문입니다.
  9. 항생제 시프로플록사신을 5 mg/kg 용량으로 근육 주사로 투여하세요.

4. 생리학적 매개변수 평가

  1. CAE 1시간 후 0-5점 척도로 동물의 신경학적 상태를 평가합니다: 0 = 신경학적 결손 없음, 1 = 전다리 완전 펴기 불가, 2 = 회전, 3 = 지지 상실, 4 = 의식 저하 상태에서 자발 걷기 없음, 5 = 사망15.
    참고: 1시간 후에는 기포가 빠르게 재흡수되어 증상이 나타나지 않을 수 있으며, 이는 동맥색전술이 충분하지 않았음을 나타냅니다.
  2. CAE 후 1시간 후 신경학적 증상이 없을 경우 실험에서 제외하는 동물(신경학적 결손 척도15에서 0점인 쥐).
  3. 항생제 시프로플록사신은 CAE 후 24시간과 48시간에 5 mg/kg 용량으로 근육 주사로 투여합니다.
  4. 생리학적 매개변수 평가를 위해 가짜 그룹과 CAE 그룹의 동물을 무작위로 배정합니다.
  5. CAE 직전과 CAE 직후, 3시간, 24시간, 4일, 7일 후에 Sartorius 저울로 그램 단위로 동물을 무게를 재세요.
  6. CAE 직전과 CAE 직후 3시간, 24시간, 4일, 7일 동안 32 °C에서 42 °C의 작동 범위가 있는 디지털 체온계를 사용해 측정합니다.
  7. CAE 직전과 CAE 직후, CAE 후 3시간, 24시간, 4일, 7일에 컴퓨터 시스템의 테일 커프를 사용해 혈압과 호흡기 매개변수를 비침습적으로 측정합니다.
    1. 온열 패드를 켜고 40 °C까지 가열하세요.
    2. 동물을 동물 고정기에 넣고 온열 패드 위에 올려놓으세요. 동물이 3-5분간 진정할 시간을 두세요.
    3. 그 후 심혈관 수치를 측정하는 센서가 달린 커프를 꼬리 밑부분에서 2-3cm 떨어진 곳에 부착합니다.
    4. 트랜스듀서 위치를 복측 꼬리 동맥 바로 아래에 조정하세요.
    5. 신호가 안정적이고, 심박수가 프로그램에 표시되어 있는지 확인하세요. 신호 녹음을 시작해.
    6. 커프에 압력이 쌓이는 장치를 켜세요.
    7. 커프 압력이 완전히 풀릴 때까지 맥박과 수축기 혈압을 기록하세요.
    8. 동물의 심박수 신호 회복 과정을 명확히 표시해야 합니다.
    9. 4.4.3-4.4.5 단계를 반복합니다. 두 번 더 하면 동물을 동물 고정장치에서 해제하세요.
    10. 세 가지 측정값을 통해 평균 맥박과 수축기 혈압을 계산하세요.
  8. CAE 직전과 CAE 직전, 그리고 CAE 후 3시간, 24시간, 4일, 7일 동안 컴퓨터 시스템을 이용해 혈압과 호흡 지표를 기록합니다.
    1. 동물을 한 손에 자연스럽게 고정하세요.
    2. 동물의 코에 연결된 튜브가 달린 마스크를 착용하세요.
      참고: 동물이 마스크에 숨을 쉬는 데 익숙해지는 데 시간이 걸립니다.
    3. 동물이 진정되었는지 확인하세요.
    4. 호흡량과 호흡수를 10초 기록하세요.
    5. 녹화 중에 동물이 한숨을 쉬거나 삼키지 않도록 하세요.
    6. 4.5.2-4.5.3 단계를 두 번 더 반복하세요.
    7. 세 가지 측정값에서 평균 호흡량과 호흡수를 계산하세요.
    8. 호흡 분 부피는 다음과 같은 공식으로 계산합니다:
      분대 호흡량 = 호흡 × 호흡량.

5. 기능 및 행동 매개변수 평가

  1. 동물의 신경학적 상태를 0-5점 척도로 평가합니다: 0 = 신경학적 결손 없음, 1 = 전肢 완전 펴기 불가, 2 = 회전, 3 = 지지 상실, 4 = 의식 저하 상태에서 자발 걷기 없음, 5 = 사망15.
  2. CAE 직전과 CAE 직후, 3시간, 24시간, 4일, 7일 후에 로타-로드에서 운동 기능과 협응력을 평가합니다.
    1. 동물들을 Rota Rod 장치 테스트용으로 훈련시키세요.
      1. 동물을 고정된 막대에 5-30초 동안 올려놓습니다.
      2. 고정된 막대를 최소 10초 이상 붙잡을 수 있는 동물들은 약 30초 동안 최소한의 가속도로 회전하는 막대를 타고 달리게 합니다.
      3. 동물들이 적절한 가속도로 회전하는 막대 위에 자유롭게 설 수 있을 때까지 계속 훈련하세요.
    2. 동물들을 최소 1rpm 속도로 7cm 회전하는 수평 막대에 올려놓습니다.
    3. 가속은 10초마다 1rpm, 최대 속도는 60rpm까지 가속합니다.
    4. 쥐가 회전 막대에 올라탄 시간을 기록하세요.
  3. CAE 직전과 CAE 직후의 3시간, 24시간, 4일, 7일 동안 컴퓨터 시스템을 사용해 쥐의 운동 활동을 평가합니다.
    1. 동물을 열린 들판 한가운데에 놓고 5분 동안 이동 거리와 쥐의 활동 시간을 기록하세요.
  4. CAE 후 3시간, 24시간, 4일, 7일 시점에 그립 강도 미터를 통해 전肢 그립 강도를 평가하세요.
    1. 동물의 꼬리를 잡고 앞다리로 막대를 잡게 하세요.
    2. 쥐가 그릴을 놓을 때까지 동물을 그레이트와 평행하게 당깁니다.
    3. 세 번 시도하고 가장 높은 결과를 선택하세요.

6. S100 칼슘 결합 단백질 B(S100b) 수준 평가

  1. CAE 모델링 전, 24시간 및 CAE 후 7일 동안 쥐의 혈청 S100b 수치를 측정합니다.
    1. 동물을 실험용 동물 고정장치에 넣으세요.
    2. 온열 패드를 켜고 40 °C까지 가열하세요.
    3. 동물을 실험용 동물 고정 장치에 가열 패드 위에 위치시킵니다. 동물이 진정할 시간을 위해 5분간 기다리세요.
    4. 동물을 옆으로 눕히세요.
      참고: 꼬리정맥은 꼬리에 보여야 합니다.
    5. 정맥 카테터를 후리정맥에 삽입하세요.
    6. 1.5mL 튜브에 1mL의 혈액을 뽑으세요.
    7. 혈액을 실온에 40분간 두세요.
    8. 혈액 샘플을 4°C에서 15분간 15분간 1500 x g에서 원심분리합니다.
    9. 자동 피펫으로 혈청을 별도의 1.5 mL 튜브에 채취하세요.
      참고: 혈청은 투명하고 투명해야 하며, 적혈구의 붉은 혼합물이 없어야 합니다.
    10. 적절한 ELISA 키트를 사용하여 효소 결합 면역흡착 분석법(ELISA)으로 혈청을 분석하십시오.

7. 카테터 제거

  1. CAE 후 24시간 후, 5단계 검사 후에 카테터 제거 절차를 시행하세요.
    1. 동물들을 흡입실에 1-2분간 가스 마취 시스템과 산소 농축기가 연결된 상태에서 2.5%-3.5% 부피의 이소플루란을 공급하고 분당 3리터의 산소 공급 속도를 유지합니다.
    2. 동물을 37.5 °C의 온열 패드로 옮기고, 마스크 가스 공급에 이소플루란 2%-3% 투여 모드, 산소 유량 1.0-2.0 L/분으로 전환합니다.
    3. 상처 봉합선을 끊거나 카테터를 손상시키지 않고 플래그를 절단하세요.
    4. 카테터 바깥쪽 끝을 청소하고, 소독제(0.5% 클로르헥시딘 빅루코네이트, 70% 에탄올에 함유)로 처리하세요.
    5. 이전 수술에서 받은 봉합선을 목 복측에서 제거하세요. 절개 부위를 통해 겸자를 사용해 카테터 나선을 부드럽게 분리하세요.
    6. 카테터의 긴 끝을 복부 절개를 통해 빼내세요.
    7. 외경동맥 분기점과 카테터 삽입 부위 사이에 매듭을 매듭으로 묶으세요.
    8. 카테터를 묶고 있는 매듭을 조심스럽게 잘라내고, 겸자로 카테터를 빼내고, 매듭을 혈관에 조인 후 다시 묶으세요.
    9. 결박 끝을 다듬고 상처를 꿰매세요. 연속 봉합을 사용하세요.

8. 트리페닐테트라졸륨 염색 평가

  1. 교합 24시간 후 가짜군 6마리와 CAE군 6마리에게, CAE 7일째에 가짜군 6마리와 CAE군 10마리에게 틸타민 15mg/kg 및 졸라제팜 15mg/kg + 자일라진 하이드로클로라이드 10mg/kg의 근육주사를 투여하여 말기 마취를 투여합니다.
  2. 1.3단계에서 설명한 대로 마취의 수술 단계가 달성되었는지 확인하십시오.
  3. 2mL 주사기와 24G 바늘로 꼬리정맥 대강에서 전체 혈액 샘플을 수행하세요.
  4. 뇌 조직을 손상시키지 않고 두개골의 등쪽 볼트를 열어라.
  5. 경막을 검사하세요.
  6. 전두엽부터 시작해 미세토름 칼날로 뇌를 2mm 두께의 전두엽 절단으로 잘라냅니다.
  7. 절편을 현미경 슬라이드에 올려놓으세요.
  8. 조각을 1% 트리페닐테트라졸륨 염화물(TTC) 용액에 넣고 37°C에서 온도조절기에 10-12분간 보관하세요.
  9. 모든 뇌 부위를 검사하세요. TTC 염색의 색상 변화를 관찰하세요.
    참고: 손상되지 않은 조직은 밝은 분홍색으로 염색되며, 병변이 있는 조직은 연한 분홍색으로 염색됩니다.
  10. 양쪽에서 조각을 사진으로 찍으세요.
  11. 슬라이스를 10% 중성 완충 포르말린 용액에 고정하세요.
  12. 과학적 영상 분석을 위해 소프트웨어에서 국소 병변의 면적을 추정하세요.

9. 헤마톡실린 및 에오신 염색 평가

  1. 탈수로 고정된 뇌 절단은 에탄올 배터리(70%, 80%, 100%)로 상승합니다.
  2. 건조한 조각을 파라핀에 담가 7mm 두께로 만듭니다.
  3. 헤마톡실린과 에오신으로 부위를 염색하세요.
  4. 투과광 현미경을 이용한 절편의 현미경 분석을 수행합니다.

10. 통계 분석

  1. 통계 프로그램에서 통계 분석을 수행하세요.
  2. 기술적 통계(평균±의 표준오차 계산)를 적용하고, 결과를 시각화하기 위해 그래프를 만드세요.
  3. 각 그룹의 정규성을 확인한 후, 던컨의 랭크 기준을 사용하여 여러 차례 비교를 수행합니다.
  4. 5% 유의수준에서 차이를 파악하세요.

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결과

생존 및 전반적인 상태
공기 방울을 투여한 직후, 모든 쥐는 몇 초간 불안정한 상태와 뚜렷한 떨림을 보였고, 이후 모든 운동 활동이 중단되고 1-2분간 의식을 잃었습니다. 어떤 동물들은 의식을 회복한 후 10-15분 동안 발에 대한 지지력을 잃었습니다.

CAE 3시간 후 생존율은 100%였으나, 24시간 후 생존율이 80%로 감소했고,3일째 에는 60%로 떨어졌습니다. 색전술 후 최대 7일간 추적 관찰에서는 새로운 사망이 관찰되지 않았습니다(그림 1A).

체중
카테터 삽입 수술은 예외 없이 모든 동물의 체중을 감소시켰습니다. 그 결과, 연구 2일차에 모든 그룹의 동물에서 음의 체중 증가가 관찰되었습니다(

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토론

MCAO는 쥐에서 국소성 허혈성 뇌졸중을 모델링하는 일반적인 방법으로, 혈전 형성, 중대뇌동맥의 국소 경련, 그리고 필라멘트2에 의한 일시적 폐쇄로 이루어집니다. 이러한 모델의 목표는 (1) 표준화된 병변 부피와 면적17을 가진 신경 뇌 조직16의 국소 세포자멸사를 달성하는 것, (2) 동물의 신경학적 결손을2-7일간 모니터링하는 것입니다.

공기 투여 속도와 부피의 선택은 경험적으로 결정되었다. 이전 출판물에서는19번 항공 투여의 속도와 용량 선정에 관한 내용이 있었습니다. 예비 실험에서는 총 부피 3 mL/kg의 공기 볼루스를 30초마다 100 μL 단위로 투여했습니다. 그러나 이 투여 방식은 관찰 초기 시...

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공개 사항

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감사의 글

이 연구는 러시아 과학재단의 지원 프로젝트, 프로젝트 번호 25-15-00037의 지원을 받았습니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
2mL 바늘을 가진 3성분 주사기그리고 nbsp; 레이코52322223G
알라딘 싱글 인퓨전 펌프월드 프리시전 인스트루먼트AL-1000
시프로플록사신파르마벳3897744시프로플록사신 5% 용액
전산화 시스템 PowerLab 8/35  보조 장치3508-1090
데진Apteka.ru70% 에탄올에 0.5% 클로르헥시딘 빅루코네이트
디지털 온도계B. 웰 스위스 AG로트 0413
전자 다이나모미터 그립 강도 측정기바이오메드 이지 테크놀로지스007231024415MC01
S100 칼슘 결합 단백질 B(S100B)용 ELISA 키트클라우드-클론 코퍼레이션(CCC)SEA567라48T
낚싯줄직경 0.9mm
가스 마취 시스템우고 베이스레 21100
그래프패드 통계 소프트웨어프리즘v.10
그루브드 니들 디렉터피셔 사이언티브카탈로그 번호 11-0012.7cm
헤파린엔도팜. 모스크바 내분비 식물30122
이미지J국립보건원과 광학 및 계산 기기 연구소
인슐린 주사기SFM 병원 제품1603030.5 mL, U-100, 30G
정맥 카테터KD 메디컬G24
이소플루란 (이소플루린)베트파마100 mL, 1000 mg/kg
실험동물용 실험동물 고정기오픈 사이언스AE1001-R1
광학 현미경자이스액시오 스코프.A1
광학 현미경 슬라이드써모 사이언티픽15442933
의료용 폴리에틸렌 마이크로 튜빙사이언티픽 코모디티즈 주식회사BB31695-PE/4내경 0.76mm
의료용 멸균 거즈 물티슈새로운 삶 45x29 CM
마이크로 튜브사르세트 AG & KG 중대S0443781.5 mL
마이크로피펫 에펜도르프 연구 플러스에펜도르프200 & 마이크로; L
현미경 슬라이드피셔 사이언티브11562203
미세외과용 겸자(곡선형)카잔 의료기기 공장F0106
미세수술 겸자(직선형)RWD 생명과학F11029-11
미세토름 블레이드써모 사이언티픽3052835MX35 프리미어+
다중 조건 시스템TSE 시스템즈131202-10
중성 완충 포르말린헴1072024pH 6,8-7,2 & nbsp;
비흡수성 외과용 봉합사 라브산린텍스2022-01
홍채절제술을 위한 안과 가위CM 인스트루멘트AJ-410-05
산소 농축기무장YYT327009607F-3L
인산염 완충제암레스코2120C462
Piptte 팁서비스바이오200 & 마이크로; L
쥐들실험동물 보육장에서 얻은 자료 푸쉬치노" (www.spf-animals.ru), 러시아 과학 아카데미 셰먀킨-오브치니코프 생기화학 연구소.
냉장 실험실 다기능 원심분리기에펜도르프5804 R
로타-로드 로타멕스-5 콜럼버스 악기210426
가위 METZENBAUM Medstandart-InstrumentMT-H-256
수술용 봉합 재료재발114/0042011124카프로아그 4/0
수술대베트코름토르그VETBOT STL-1, TD00472
텔라졸조에티스67291350 mg/mL 틸타민과 50 mg/mL 졸라제팜 5mL 5mL
트리페닐테트라졸륨 클로라이드디아-MTTC1809
자일라진니타 농장1512% 자일라진 염산염 50mL에 담겨 있습니다

참고문헌

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