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카운팅 및 교양 세포의 생존을 결정

Counting and Determining the Viability of Cultured Cells

문화 세포의 수를 결정하는 것은 문화 조건을 표준화하고 정확한 quantitation 실험을 수행 중요합니다. hemacytometer가 카운팅 챔버로 설계된 중앙 지역에있는 두꺼운 유리 슬라이드입니다. 세포 현탁액이 정의된 영역에 적용 세포 밀도가 계산 수 있도록 계산됩니다.

문화 세포의 수를 결정하는 것은 문화 조건을 표준화하고 정확한 quantitation 실험을 수행 중요합니다. 이 비디오에서는, 우리는 세포가 hemacytometer를 사용하여 계산하는 방법을 보여줍니다.

배양 세포 수를 결정하는 것은 배양 조건의 표준화와 정확한 정량 실험을 수행하는 데 있어 중요합니다. A ...

세포 수와 배양 상태를 결정하는 것은 배양 조건의 표준화 및 정확한 세포 수가 필요한 실험을 수행할 때 중요합니다. 여기서는 헤모사이토미터(hemocytometer)를 사용하여 세포 수를 세고, 부유액에 존재하는 세포 농도를 계산하는 방법을 보여드리겠습니다. 또한, Trypan Blue 생존능 분석법(Viability Assay)을 통해 배양액 내에 존재하는 생존 세포 수를 결정하는 방법도 함께 보여드리겠습니다.안녕하세요, 저는 동부 테네시의 Molecular Pathology Laboratories Network 내 Dr.LAN's Laboratory에 있는 Ricky입니다. 오늘은 현탁액 내의 세포 수를 측정하고 세포 생존율을 결정하는 방법을 보여드리겠습니다. 세포 계수를 위해 헤모사이토미터(hemocytometer)를 준비하려면, 먼저 기기의 표면과 함께 제공되는 커버슬립을 70% ethanol로 세척해야 합니다.커버 슬립과 슬라이드는 깨끗하고 건조해야 하며, 보풀, 지문 및 물자국이 없어야 합니다. 다음으로, 혈구계수기(hemo cytometer)의 가장자리를 수돗물로 살짝 적신 후 그 위에 커버 슬립을 눌러 덮습니다. 커버 슬립은 은색 계수 영역 위에 고르게 놓여야 합니다.이제 세포 수를 측정하기 위한 세포 현탁액을 준비하겠습니다. 먼저, 세포가 단층 배양으로 성장한 경우, 비디오의 세포 부착 과정에서 보여준 것과 같이 트립신을 사용하여 플레이트 표면에서 세포를 떼어냅니다. 세포가 플레이트에서 분리되면, 균일한 현탁액을 얻기 위해 필요에 따라 희석합니다.헤모사이토미터를 사용할 때는 현탁액 내의 응집된 세포 덩어리를 반드시 분산시켜야 합니다. 1mm²당 최대 20~50개의 세포 수가 권장됩니다. 세포 시료를 헤모사이토미터에 로딩할 준비가 되면, 마이크로피펫을 사용하여 세포 현탁액을 헤모사이토미터 계수실의 가장자리로 옮기십시오.피펫 팁을 커버슬립 아래에 대고 현탁액 한 방울을 분주합니다. 모세관 현상에 의해 현탁액이 커버슬립 아래로 빨려 들어갑니다. 첫 번째 챔버를 채운 후, 두 번째 계수 챔버를 채우면 세포 계수를 시작할 준비가 완료됩니다.세포가 가라앉을 때까지 몇 분 동안 기다립니다. 세포가 가라앉은 후 과잉 액체를 닦아내면 도움이 됩니다. 현미경의 100배 배율로 슬라이드를 관찰할 수 있습니다.세 개의 평행선으로 둘러싸인 그리드의 커다란 중앙 영역이 보여야 합니다. 중앙 영역 내의 세분화된 구역들 또한 세 개의 평행선으로 둘러싸여 있으며, 각 구역은 단일선에 의해 16개의 더 작은 정사각형으로 나뉩니다. 이 영역 내의 세포들은 뭉침 없이 균일하게 분포되어 있어야 합니다.세포가 균일하게 분포되지 않은 경우, 세척 후 다시 로딩하십시오. 헤모사이토미터의 네 모퉁이 및 중앙 사각형 내의 세포를 핸드헬드 카운터로 계수합니다. 사각형의 상단과 좌측에 있는 3중선의 중앙선에 닿아 있는 세포는 계수하되, 사각형의 하단이나 우측에 있는 3중선의 중앙선에 닿아 있는 세포는 계수하지 않습니다.다른 계수실(counting chamber)에 대해서도 동일하게 계수를 반복합니다. 세포 계수가 완료되면 밀리리터당 세포 수를 결정할 수 있습니다. 이를 위해 각 구역당 세포 수의 평균값을 구한 뒤, 여기에 희석 배수와 10,000을 곱하여 시료 내의 총 세포 수를 산출합니다.밀리리터당 세포 수에 샘플을 채취한 세포 현탁액의 총 부피를 곱합니다. 이제 현탁액의 생존율(Viability)을 결정할 준비가 되었습니다. 샘플 내 생존 세포 수를 결정하기 위해 Trypan blue를 사용하겠습니다. 먼저 소형 튜브에 4% Trypan blue 0.5 µL, HBSS 0.03 µL, 그리고 세포 현탁액 0.1 µL를 넣고 충분히 혼합한 후, 헤모사이토미터(hemocytometer)에 로딩하기 전 5분 동안 그대로 둡니다.생존 세포는 염색되지 않아야 하며, 사멸 세포는 혈구계수기(hemocytometer) 아래에서 푸른색으로 나타납니다. 전체 세포 수와 생존 세포 수(염색되지 않은 세포)를 각각 측정하여 샘플 내 생존 세포 백분율을 계산하십시오. 완료 후, 혈구계수기의 커버슬립을 70% ethanol과 탈이온수로 헹구어 오염 물질을 제거하십시오.공기 중에서 건조시킨 후 나중에 사용할 때까지 보관하십시오. 지금까지 배양된 세포의 수와 생존율을 결정하는 방법을 설명해 드렸습니다. 이것으로 모든 과정을 마칩니다.시청해 주셔서 감사하며, 모든 실험에 좋은 결과가 있기를 바랍니다.

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Molecular Pathology Laboratory Network, Inc.  문화 세포의 수를 결정하는 것은 문화 조건을 표준화하고 정확한 quantitation 실험을 수행 중요합니다. 이 비디오에서는, 우리는 세포가 hemacytometer를 사용하여 계산하는 방법을 보여줍니다.

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