라이브 고정화 효모 세포의 시각화에 대한 신속한 기술

요약

여기에 침묵 교미 loci HML과 HMR에서 형광등 기자 적용 성장 고정화 효모 세포의 시각화에 대한 신속한 기술,

초록

우리는 여기서 epifluorescence 현미경으로 성장 효모 세포의 고정과 시각화를위한 단순하고 빠른, 그리고 매우 유연한 기법을 제시한다. 기술은 동일 길이가 한 열 시간까지 정적 효모 집단 또는 시간 과정 실험의 시각화에 적합합니다. 내 현미경은 S. cerevisiae의에서 무성 짝짓기 loci에서 epigenetic 상속을 조사. 그들이 heterochromatin에서 포장 그대로 정상적으로 표현되지 두 무성 짝짓기 loci, HML과 HMR이 있습니다. sir1 돌연변이 배경 입을 각 로커스 역시 표현하거나 침묵 epigenetic 상태에있을 수있는 등 약화되므로 전체 인구의 HML과 HMR 모두 다른 epigenetic 상태의 세포의 혼합이 있습니다. 내 현미경은 각 세포에 HML과 HMR의 epigenetic 주 사이에 관계가 없다는 것을 보여주었다. sir1 세포는 stochastically 이전에 표현 로커스에서 입을를 설립하거나 이전에 침묵 로커스을 표현, epigenetic 상태를 전환합니다. 내 시간 코스 현미경은 네 가지 epigenetic 스위치의 각각의 주파수 때문에 sir1 세포의 epigenetic 상태의 각각의 안정성을 점수로 개별 sir1 세포와 그 자손을 추적. 또한 쑤 외를 참조하십시오., 몰. 세포 2006.

프로토콜

1. 시간 코스 epifluorescence 현미경을위한 고정화 세포. 당신의 현미경의 목적 렌즈 아래 현미경 무대 경우에는이 프로토콜은 유용하게된다는 점에 유의하시기 바랍니다.
   
   
2. 긴 coverslip에 액체 매체에서 원하는 농도에 플레이스 세포 (약 24x50mm)
   
   
3. 합성 미디어 플레이트 (이들은 낮은 autofluorescence을 가지고)과 세포 이상의 장소에서 원하는 크기의 한천 블록 컷. 세포와 접촉 핀셋으로 처​​리되지 한천 블록의 측면을 놓으십시오.
   
   
4. 짧은 시간 코스 (최대 3 시간)의 경우이 설정가 충분합니다. 현미경에 대한 시각 때 세포가 이동하는 경우, 세포 또는 한천 블록의 증가 영역의 볼륨을 줄이십시오.
   
   
5. 더 이상 시간 코스, 한천 블록 위에 신선한 액체 매체의 한 방울을 배치하고, 한천 블록 위에 유리 슬라이드를 놓으십시오. 이 슬라이드는 한천 블록의 상단을 통해 증발을 줄여줍니다. 원하는 경우, 커버 슬립 접촉 한천 블록의 가장자리가 더 이상 수분을 줄이기 위해 바셀린과 함께 봉인 수 있습니다. 전 와일드 타입 속도로 나누어 세포와 장기 9시간하는 영화이 설정을 최대 사용하고 있습니다.

토론

이것은 아직도 성장을 허용하면서 효모 세포를 움직이게 빠른 방법입니다. 우리는 효모의 실험을하는 동안 야생 유형 부문 속도를 표시와 함께 십 시간을위한 효모의 성장을 따라있다. 이 설정은 현미경의 무대 아래로 객관적 렌즈를 필요로합니다.