설치류에 살아서 Stereotaxic 외과

요약

자유롭게 동물을 이동 고유 뇌 세포 지역에서 신경 전달 물질 수준의 모니터링 신경 전달 물질 방출과 행동 사이의 링크에 통찰력을 제공합니다. 그리고 기초 neurotransmission가 약리 또는 생리적 조작에 의해 변경하는 방법에 대한 정보, 전기 탐지와 결합하여 생체내 microdialysis 우수한 해부 학적 및 화학적 해상도를 제공합니다.

초록

깨어있는 동물의 두뇌에있는 신경 전달 물질의 세포 기저 수준을 측정하는 능력은 CNS 다른 체계 문제점 (약리 또는 생리학)의 효과의 결정을 허용합니다. 예를 들어, 하나는 직접 동물의 midbrain의 도파민 추정치는 음식과 같은 D - 암페타민 또는 자연 자극과 같은 도파민 - 공개 의약품에 대응 방법을 측정할 수 있습니다. 이 비디오에서는, 우리는 삽입과 임플란트 microdialysis 프로브를과 세포 수준을 측정하는 전기 감지 (HPLC - EC)와 결합하여 고성능 액체 크로마 토그래피를 사용하는 방법하는 방법 쥐의 두뇌의 특정 사이트를 대상으로 가이드 cannulas을 이식하는 방법을 보여 oxidizable 신경 전달 물질과 metabolites. microdialysis 프로브를 통해 약물의 정확한 지역 소개 행동​​ 화합물의 메커니즘에 사이트 특이성에서 정제 작업을 허용합니다. 이 기술은 탁월한 해부학 화학 해상도를 가지고 있지만 microdialysis 샘플로만 겸손한 시간 해상도는 일반적으로 감지 신경 전달 물질의 수준을 보장하기 위해 모든 20-30분을 처리됩니다. 보완 예 생체내 도구 (즉, 조각과 세포 문화 전기 생리학) 실시간 neurotransmission을 모니터링과 함께 도움을 줄 수 있습니다.

프로토콜

개요

과 xylazine (10 MG, 2 개월 된 평균 연령 C57BL/6J 마우스 또는 이와 동등한 또는 3 개월 이전의 평균 연령 스프 라그 돌리 쥐 또는 이에 상응하는 마취제 (쥐 100 MG / kg IP 쥐 60 MG / kg IP)로 anesthetized 아르 / kg, 수종 중의 IP). 진정 작용은 반사가 시연 철회 부드러운 발가락 ​​핀치를 사용하여 모니터링할 수 있습니다 . Walantus 외 (조브, 6, 2007)와 Szot 외. (조브, 9, 2007). Thermoregulation은 thermostatregulated 손난로 (에이러 인 스트 루먼트 주식 회사)를 통해 제공하고 직장 온도계를 통해 모니터링할 수 있습니다. 머리는 모피의 면도와 절개 전에 요오드와 함께 청소합니다. 피부 절개 (마우스에 대한 1cm 길이 쥐에 대한 2cm 길이)와 두개골의 표면에서 부드러운 조직을 제거 후, ​​가이드 정맥의 게재는 bregma과 관련하여 결정됩니다. 6mm 구멍은 설치류 수술을위한 배터리로 작동하는 드릴러 (파인 과학 도구, 주식 회사)와 두개골을 통해 뚫고있다. 케어는 드릴 비트가 meningeal 세포막이나....

토론

생체내의 microdialysis에서 살아있는 동물의 독특한 두뇌 사이트에 여러 신경 전달 물질과 metabolites 측정을위한 최고의 도구입니다. 그러나, 그것은 오직 neurochemicals의 세포 수준을 모니터링하고 실시간으로 신경 전달 물질의 exocytosis를 모니터링하는 시간 해상도를 제공하지 않습니다. "NET - 플럭스 '라는 기술의 버전을 통해, 해당 사이트의 실제 신경 전달 물질의 농도가 차례로 플라즈마 막 전송기를 통해 reuptake의 신경 전달 물질 비율의 정확한 측정을 줄 수있는, 계산하실 수 있습니다.

Microdialysis는 동물의 다른 그룹 (예 : 다른 genotypes) 사이에 신경 전달 물질 방출에 대한 약물이나 다른 조작의 효과를 파악에 기초 세포 신경 전달 물질 수준의 차이를 설명에 이상적입니다.

형광 검출과 함께 모세관 구역 전기 영동 (CZE)와 같은 HPLC - EC으로 대체 assays의 도입은 샘플 당 몇 분 이내에 생체내의 microdialysis에의 시간 해상도.......

재료

재료는 프로토콜 문서에 설명되어 있습니다