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입양 DTH의 유도 후 귀에 영상 효과기 메모리 T 세포

DOI:

10.3791/907

August 14th, 2008

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Summary

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여기서 우리는 쥐의 귀에 지연 유형 과민성 (DTH) 반응의 진행 상황을 유도하고 기록하는 방법을 보여줍니다. 이것은 이펙터 / 메모리 T 세포 응답의 2 광자 이미징을위한 쥐의 귀 조직의 준비 시범옵니다.

Abstract

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효과기 / 메모리 T의 lymphocytes - 지연 유형 과민성 (DTH)은 주요 선수들이 CCR7하는 면역 반응이다. 여기, 우리는 쥐의 귀에 DTH 반응의 진행 상황을 유도하고 기록하는 방법을 보여줍니다. 효과기 / 메모리 T 세포 응답 - ​​이것은 CCR7의 2 광자 이미징을위한 쥐의 귀 조직의 준비 시범옵니다.

효과기 / 메모리 T 세포 라인 (비튼, C J. 시각 실험, 이슈 8) - 입양 DTH는 GFP - 레이블 OVA 특정 CCR7의 intraperitoneal 주사로 유도합니다. 전지는 다음 시각화를 허용하도록 텍사스 - 레드에 OVA와 OVA 복합의 1:1 혼합 (OVA - TR)과 호수 (제어 EAR)과 다른 하나의 귀를 주사하여 도전하기 전에 48 시간 동안 쥐의 평형을 사용할 수 있습니다 주민 항원 제시 세포.

우리는 영상 두번째 고조파 생성하여 콜라겐 섬유의 시각화와 함께 면역 반응 동안 피부 깊은 계층 내에서 세포의 운동성 유용 조직 준비 방법을 설명합니다. 귀 조직은 5 X 5mm의 사각형 (약간 큰 더이다)​​로 절단 후 37 이미징 챔버에 실리콘 그리스를 사용하여 보안과 산소 - 부풀어 오른 조직 문화 매체에 의해 superfused 아르 Vetbond ™를 사용하여 플라스틱 커버 미끄러져에 탑재되어 ° C .

Protocol

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입양 DTH의 유도

조브 문서를 참조하십시오 : 고양이의 입양 지연 유형 과민성의 유도 및 모니터링
크리스틴 비튼, 조지 K. Chandy
생리학 및 생물 물리학의학과 캘리포니아 대학, 어바인
J. 시각 실험, 제 8

여기, 우리는 phagocytic 항원 제시 세포의 시각화 수 있도록 레이블이 지정되지 않은 항원과 1:1 비율 항원 (Ovalbumin) 텍사스 - 레드에 복합을 사용하여이 프로토콜을 수정했습니다.

이어 조직 하베스트

  1. 귀하의 승인된 동물 프로토콜에 명시된 절차에 의해 원하는 시간 지점에서 쥐를 안락사. 여기, 우리는 isoflurane 마취의 과용을 사용합니다. 이것은 통풍이 잘 후드 안에있는 닫힌 용기에 이루어집니다. 동물의 흉강을 열고 심장을 절단하여 중 잘린에 의해 죽었다는 보장합니다.

  2. 큰 가위를 사용하면 가능한 한 동물의 몸에 가까운 싱글 컷 (그림 1)과 귀를 제거합니다.

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References

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$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Koo, G. C., et al. Blockade of the voltage-gated potassium channel Kv1.3 inhibits immune responses in vivo. J Immunol. 158, 5120-5128 (1997).
  2. Gaga, M., Frew, A. J., Varney, V. A., Kay, A. B.

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