내부 표준

1. 적절한 샘플 처리: 솔루션 만들기

1. 깨끗한 비커를 가지고 정확한 양의 샘플을 대량으로 넣습니다. 사용된 실제 질량을 기록합니다. 이 예에서 아데닌의 용액은 다음 분석을 위한 내부 표준으로 사용하기 위해 볼륨 플라스크에서 만들어집니다. 아데닌의 질량은 100 mg. 긴 목을 가지고 있고 아데닌을 쉽게 추가하거나 제거할 수 없기 때문에 체적 플라스크에 직접 질량을 두지 마십시오.
2. 약 25mL의 용매(이 경우 디메틸 설산화물(DMSO)를 비커에 넣고 저어서 용해하도록 한다. 이 예에서 최종 용액은 50mL 체피 플라스크로 만들어지므로 약 25mL만 추가하여 비커를 헹구고 최종 볼륨으로 구성된 솔루션이 가능합니다.
3. 고체가 용해되면 용액을 체적 플라스크에 붓습니다.
4. 비커와 교반바를 소량의 용매로 헹구고 약 10mL로 헹구고 헹구는 플라스크에 붓습니다. 두 번 더 반복합니다. 이렇게 하면 적절한 솔루션 전송을 보장할 수 있습니다.

2. 내부 표준 교정 곡선 준비

1. 가스 크로마토그래피 분석을 위해 원하는 표준 샘플을 준비합니다. 이 예에서 카페인은 아세토닐릴을 사용하여 커피에서 추출한 다음 아데닌을 측정을 위한 내부 표준으로 사용됩니다.
2. 카페인 샘플의 경우 1 mg/mL 샘플을 만드는 데 필요한 샘플의 양을 측정합니다. 10 mL 볼륨 플라스크를 사용하는 경우, 즉, 10 mg입니다.
3. 분석물의 무게를 비커로 계량하고 용매(here methanol)를 몇 mL에 추가하여 용해한 다음 3개의 헹구기를 사용하여 체피 플라스크로 정량적으로 전달합니다.
4. 0.2, 0.5, 2 mg/mL 카페인과 비슷한 방식으로 3 가지 표준을 더 확인하십시오.
5. 각 카페인 표준의 1mL을 샘플 바이알에 넣습니다.
6. 각 시료 바이알에 2 mg/mL 아데닌 내부 표준의 0.2mL을 추가합니다.
7. 각 카페인 표준으로 가스 크로마토그래피 실험을 실행합니다. 각 크로마토그램에 대해 카페인과 표준에 대한 피크 영역의 비율을 계산합니다.
8. 면적 비율 대 농도 비율을 플롯합니다. 해당 플롯의 기울기는 응답 계수입니다.

3. 가스 크로마토그래피를 위한 내부 표준이 있는 실제 시료 준비

1. 가스 크로마토그래피 분석을 위해 원하는 샘플을 준비합니다. 이 예에서, 카페인은 아세트트론트트릴을 사용하여 커피에서 추출됩니다.
2. 커피 샘플의 경우 커피 2g을 100mL 비커에 넣습니다. 커피의 정확한 무게를 기록합니다.
3. 20mL의 아세토닐트리어를 비커에 넣습니다.
4. 자주 저어, 20 분 동안 앉아 있도록.
5. 깔때기의 필터 용지를 사용하여 커피 찌꺼기를 필터링합니다.
6. 소량의 아세토닐릴(5mL)으로 필터 용지 3x를 헹구는 다.
7. 여과물의 최종 볼륨을 측정합니다. 약 35mL이어야 합니다.

4. 샘플을 실행하고 농도를 계산

1. 커피 추출물 샘플 1mL을 추출하고 바이알에 내부 표준0.2mL를 추가합니다. 유리병을 자동 샘플러 랙에 넣습니다.
2. 샘플의 GC 분석을 실행합니다. GC 조건이 카페인과 아데닌이 분리되도록 하십시오. 이 예에서, 이소체 분리는 200°C에서 수행된다.
3. 분석 후 내부 표준 피크와 분석피크 모두에 대한 피크 영역을 계산합니다. 그들의 비율을 사용하여, 샘플에 카페인의 양을 계산합니다.

5. 결과: 내부 표준카페인 GC 분석

1. 카페인의 GC 분석은 도 1에도시된다. 아데닌은 내부 표준으로 사용됩니다. 피크 영역의 비율을 측정하고 농도의 비율에 비해 플롯할 수 있습니다. 플롯의 기울기는 응답 계수(이 경우 1.8)입니다.
2. 도 2는 아데닌 내부 표준을 가진 커피 샘플의 크로마토그램을 나타낸다. 피크 영역의 비율은 1.78입니다. 반응 인자 및 아데닌의 알려진 농도(0.33 mg/mL)를 사용하여 알 수 없는 시료의 카페인 농도는 0.33 mg/mL로 계산됩니다.

그림 1. 내부 표준을 사용하여 교정 플롯을 사용합니다. 각각에 0.33 mg/mL 아데닌 내부 표준이 추가된 3개의 표준 카페인 샘플(1, 0.5 및 0.2 mg/mL)에 대한 면적 비율 대 농도 비율의 플롯. 선의 기울기는 응답 계수인 1.8입니다.

그림 2. 아데닌 내부 표준 커피의 크로마토그램. 샘플에 대한 FID 검출기의 응답 플롯입니다. 세 가지 주요 봉우리는 아데닌 (IS), 카페인, 팔미티산입니다.