고체 위상 합성

1. 수지로드

1. 100mL 펩타이드 합성 용기에 2-클로로트리틸 염화물(CTC) 수지(1.1mmol/g, 0.360 g, 0.400 mmol)를 첨가한다. 20mL DMF를 추가하고 N 2에서 30 분 동안 팽창 할 수_{있습니다.}
2. 진공 상태에서 구슬을 빼내고 10mL DMF를 추가합니다.
3. 500 mg Fmoc-Ala-OH (1.60 mmol)와 2.5 mL i-Pr₂EtN을 추가하고 N_2에서 15 분 동안 혼합하십시오.
4. 용매를 진공 상태에서 배출하고 Fmoc-Ala-OH로 15분 동안 적재를 반복합니다.
5. 용매를 진공 상태에서 배출하고 10mL DMFunder N_2로구슬을 세척하고 진공 3배 하에서 배수합니다.

2. Fmoc 그룹의 보호 해제

1. DMF에 10mL 20% 4메틸피프리딘을 넣고 15분 동안 N₂ 아래에서 구슬을 저어줍니다.
2. 용매를 진공 상태에서 배출하고 보호 해제를 반복합니다.
3. 구슬을 N_2에서 10mL DMF로 세척하고 진공 3배 이하로 배수합니다.

3. 카이저 테스트 수행

1. 솔루션 A(0.5mL 0.01 M KCN, 24.5mL 피리딘), 솔루션 B(닌히드린 1g, 20mL n-부타놀), 용액 C(20g 페놀, 10mL n-butanol)를각각 2개의 시험튜브에 추가하여 카이저 테스트를 수행한다. 한 개의 테스트 튜브는 대조군이 될 것이고 다른 하나는 반응을 모니터링합니다.
2. 반응 시험관으로부터 수지의 구슬을 몇 개 추가하고 두 개의 시험관을 110°C로 가열한다.
3. 보호 가 완료되면 테스트 튜브의 내용이 진한 파란색 / 보라색 으로 바뀝니다. 보호 해제가 완료되지 않았거나 실패하면 솔루션은 노란색으로 유지됩니다. 반응 테스트 튜브를 제어 테스트 튜브와 비교합니다.

4. 다음 빌딩 블록 커플링

1. 진공 상태에서 용매를 배출합니다.
2. 구슬을 N-메틸-2-피롤리돈 10mL로_세척하고 진공 상태에서 용매를 배출한다.
3. 다음 커플링을 시작하려면 10mL NMP, 620 mgFmoc-Phe-OH (1.6 mmol), 610 mg HBTU (1.6 mmol), 2.5 mLi-Pr₂EtN을 추가하고 수지N₂ 에서 30 분 동안 거품을 허용하십시오.
4. 진공 상태에서 용매를 배출합니다.
5. 구슬을 N_2에서 10mL DMF로 세척하고 진공 3배 이하로 배수합니다.
6. 카이저 테스트를 수행 (단계 3.1-3.3 참조) 커플링의 완료를 찾습니다. 테스트 튜브의 구슬과 용액은 노란색이어야 합니다.

5. 수지에서 펩타이드를 찢어

1. 2.1-2.3 단계를 사용하여 나머지 Fmoc 그룹을 클리크합니다.
2. 용매가 진공 상태에서 배수된 후 N 2 에서 수지 및 버블에 40 mL 절단 용액(95% TFA, 2.5% H₂O, 2.5% TIPS)을 추가하여_N2에서 3h로 기포합니다.
3. 펩티드 신디사이저에 새로운 수신 플라스크를 놓고 진공 하에서 원하는 펩티드를 포함하는 TFA 용액을 새로운 플라스크에 배출한다.

6. 펩타이드의 강수량과 나는 고양

1. TFA 용액을 4원추형 바이알로 분리하고 각 유리병에 25mL 콜드 에테르(−20°C)를 추가하여 펩티드를 침전시한다.
2. 20 분 동안 바이알 (3,000 rpm, 0-4 °C)을 원심 분리합니다. 원뿔 바이알에서 남은 TFA 및 에테르 용액을 데산하고 펩티드 침전물을 농축하여 원하는 디펩티드를 백색 고체로서 감당할 수 있다.