현미경 및 염색: 그램, 캡슐 및 내생포자 염색

1화 그램 염색

1. 설정
   1. 염료가 손과 의류를 더럽게 하기 때문에 장갑과 인화성이 없는 실험실 코트를 착용하십시오.
   2. 분젠 버너는 박테리아를 가열하는 데 사용됩니다. 화염으로 작업할 때주의가 사용됩니다. 긴 머리를 다시 묶습니다.
   3. 시판되는 그램 얼룩 시약이 사용됩니다.
   4. 실험실 물티슈로 현미경 슬라이드를 청소하십시오.
2. 프로토콜
   1. 파이프 10 μL 인산염 버퍼링식 식염수 또는 배양 국물을 슬라이드에 밀어.
   2. 세균성 식민지를 액체에 얼룩져 얇은 짝수 층을 생성합니다.
      참고: 너무 오래 된 박테리아는 그램 얼룩 결과 영향을 미칠 것 이다 그들의 세포 벽에 변경 있을 수 있습니다 24 시간 이상 배양을 사용 하지 마십시오 (1, 4).
   3. 완전히 공기 건조 슬라이드.
   4. 일단 건조되면, 열 은 화염을 통해 슬라이드를 통과하여 박테리아를 수정 (박테리아 측 위로) 4-5 번.
      참고: 슬라이드를 화염에 너무 오래 붙이지 않거나 세균 세포(1)를 왜곡할 수 있습니다.
   5. 싱크대 위로 작업, 슬라이드 레벨을 잡고 완전히 열 고정 박테리아를 커버하는 그램의 크리스탈 바이올렛을 적용, 45 초 서 있도록.
   6. 슬라이드를 비스듬히 잡고 부드럽게 간접적인 물 줄기를 슬라이드에 분출하고 스테인드 박테리아 위로 흘러 내리게 하여 과도한 크리스탈 바이올렛을 헹구십시오. 박테리아에 직접 물을 분출하지 마십시오.
   7. 슬라이드 레벨을 다시 잡고, 완전히 스테인드 박테리아를 커버하는 그람의 요오드 솔루션을 적용, 45 초 서 있도록.
   8. 위의 단계 1.2.6에서와 같이 여분의 요오드를 헹구는 다.
   9. 슬라이드를 비스듬히 유지하면서 슬라이드에 탈색제를 몇 방울 더 추가하여 유출이 명확해질 때까지 얼룩진 박테리아 위로 흘러 내리게합니다. 일반적으로 약 5초. 위의 1.2.6 단계와 같이 물로 즉시 헹구는 다.
      참고: 이것은 프로토콜에서 중요한 단계입니다. 탈색제가 너무 오래 또는 충분히 오래 흘러 가도록 하면 거짓 그램 염색(4)이 발생합니다.
   10. 슬라이드 레벨을 다시 잡고, 완전히 박테리아를 커버하는 그램의 사프란을 적용, 45 초 서 있도록.
   11. 위의 1.2.6 단계에서와 같이 과잉 사프란을 헹두는다.
   12. 얼룩, 문지르지 말고, 종이 타월을 사용하여 슬라이드에서 물을 과도하게 사용하십시오.
   13. 100X 목표로 오일 침지로 현미경슬라이드를 검사합니다.
3. 결과 및 데이터 분석
   1. 그램 양성 박테리아는 보라색얼룩것입니다.
   2. 그람 음성 박테리아는 붉은 얼룩것입니다.
   3. 박테리아의 모양 (코치, 바실리, 곡선 막대, 나선형)이 표시됩니다.
   4. 세균 세포의 배열 (단일 세포, 쌍세포, 세포의 사슬, 클러스터, 그룹화)이 볼 수 있습니다.

2. 캡슐 염색

1. 설정
   1. 장갑과 실험실 코트를 염색손과 의류로 착용하십시오.
   2. 1% 크리스탈 바이올렛 용액을 준비하려면 0.25 그램 크리스탈 바이올렛과 25 mL 증류수를 혼합하여 용해 될 때까지 하십시오.
   3. 1% 콩고 레드 솔루션을 준비하려면 0.25 그램 콩고 레드와 25 mL 증류수를 혼합하여 용해 될 때까지 하십시오.
   4. 실험실 와이프와 슬라이드를 청소합니다.
2. 프로토콜
   1. 슬라이드에 10 μL 콩고 레드를 놓습니다.
   2. 파이펫 팁을 사용하여 세균 성 식민지를 염료에 얼룩져 얇은 짝수 층을 생성합니다.
   3. 염료/세포 혼합물이 있는 공기 건조 슬라이드는 5-7분입니다.
      참고: 가열이 캡슐을 탈수하거나 왜곡 할 수 있기 때문에 가열하지 마십시오.
   4. 1 분 동안 1 % 크리스탈 바이올렛으로 얼룩을 범람.
   5. 슬라이드를 비스듬히 잡고 부드러운 간접적인 물 줄기를 슬라이드에 분출하고 스테인드 박테리아 위로 흘러 내리게하여 과도한 얼룩을 헹구십시오. 박테리아에 직접 물을 분출하지 마십시오.
   6. 완전히 공기가 건조 될 때까지 45도 각도로 슬라이드를 유지합니다.
   7. 100X 목표로 오일 침지 하에서 현미경에 얼룩을 검사합니다.
3. 결과 및 데이터 분석
   1. 세균 세포는 보라색 얼룩 것입니다.
   2. 슬라이드의 배경은 어둡게 얼룩질 것입니다.
   3. 캡슐은 어두운 배경에 대한 세포 주위에 명확한 후광이 될 것입니다.

3. 내시경 스테인닝 (쉐퍼 풀턴 방법)

1. 설정
   1. 장갑과 가연성 이연성 실험실 코트를 착용하여 손과 의류를 염료와 불꽃으로부터 보호합니다.
   2. 분젠 버너는 박테리아를 가열하는 데 사용됩니다. 화염으로 작업할 때주의가 사용됩니다. 긴 머리를 다시 묶습니다.
   3. 0.5% 말라카이트 그린 용액을 준비하려면 말라카이트 그린 0.125그램과 25mL 증류수를 녹일 때까지 섞으세요.
   4. 시판 되는 그램의 사프란 시약 솔루션을 사용 하 여.
   5. 실험실 와이프와 슬라이드를 청소합니다.
2. 프로토콜
   1. 파이프 10 μl 인산염 완충식식염(PBS) 또는 배양 국물을 슬라이드에 밀어.
   2. 무균 기술을 사용하여 세균 성 식민지를 액체에 얼룩져 얇은 짝수 층을 생성합니다.
      참고: 내시경은 일반적으로 젊은 세포에서 형성되지 않으므로 배양은 18 시간에서 36 시간 (9) 사이가 되는 것이 좋습니다.
   3. 완전히 공기 건조 슬라이드.
   4. 화염을 통해 슬라이드(박테리아 측면 위로)를 4-5번 전달하여 가열합니다.
   5. 염료를 함유하려면 렌즈 종이 조각(세균 얼룩에 맞게 잘라)을 열 고정 얼룩 위에 놓습니다.
   6. 말라카이트 그린 용액으로 렌즈 용지를 포화시합니다.
   7. 뜨거운 접시에 끓는 물 비커 위에 슬라이드를 놓고, 스팀 슬라이드를 5분간 놓고 필요에 따라 한 번에 더 많은 염료를 추가하여 렌즈 종이를 촉촉하게 유지합니다.
      참고: 염료 용액이 과열되고 건조되는 것을 피하십시오.
   8. 비커에서 슬라이드를 제거하고 렌즈 용지를 제거하고 폐기하고 슬라이드가 2 분 동안 식힙니다.
   9. 슬라이드를 비스듬히 잡고, 부드럽고 간접적인 물 줄기를 슬라이드에 분출하여 완전히 헹구어 얼룩 위로 흘러 내리게 합니다.
   10. 슬라이드 레벨을 잡고, 사프란과 홍수 얼룩, 1 분을 서 있도록.
   11. 위의 단계 3.2.9에서와 같이 과잉 사프란을 헹노세요.
   12. 공기 건조를 허용합니다.
   13. 100X 목표로 오일 침수 하에서 현미경슬라이드를 검사합니다.
3. 결과 및 데이터 분석
   1. 포자는 녹색으로 얼룩질 것입니다.
   2. 식물 세포는 붉은 얼룩것입니다.
   3. 일부 식물 세포는 포자를 포함할 것입니다. 세포는 붉은 색으로 얼룩지고 내시경포레스는 녹색으로 얼룩지게됩니다.