Name: Drosophila에서 Visual과 강한 중재 플라이트 컨트롤을 맡은 이후로 자기 테더 시스템 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-11-21T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 27 s
Description: 학습하세요 Drosophila에서 후각 자기 테더(OMT) 장치를 이용한 행동 분석 방법을. 파리의 등흉부를 핀에 고정하고 자석을 정렬하여 냄새 추적 능력을 평가하는 이 기법은 시각 자극 존재 하에서도 후각 처리 메커니즘을 연구하는 데 활용됩니다.

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소개 OMT는 &quot;가상 플륨 시뮬레이터&quot;를 통합할 수 있도록 설계된 자기 테더 시스템 [1]의 적응이다. 다음 프로토콜은 설명 방법을 제대로 테더 빠르다 (1 부)과 자석 (2 부) 및 질량 흐름 규제 악취 전달 시스템 (Part3)을 설정하는 전략을 제공합니다. 여기에서 설명한 내용이 특정 시스템에 최적화된이며 다른 기술 사양과 구성 요소에 따라 다를 수 있습니다. 1 부 : Tethering의 파리 여기에서 설명한 tethering에 대한 단계는 많은 이전의 연구와 유사합니다 [2]하지만, OMT에 사용하기 위해 적응 [3]. 적절한 tethering는 강력하고 반복적인 실험 실험을 보장하기 위해 중요합니다. 조심 tethering의 중요성은 overstated 수 없습니다. <ol><li> 4-6일 게시물 eclosion을 날아 수집 4~6시간 그들을 굶어. kimwipe은 탈수를 방지하기 위해 foodless 유리병에 물을 moistened 놓습니다. </li><li> 작은 유리병에 병에서 파리의 배치를 전송하고 섭씨 약 4도 정도에서 설정 펠티어 냉각 단계에서 황동 블록에 삽입. 적정 온도는 약 30 초 내에 파리를 anesthetizes. </li><li> 냉각 단계의 차가운 표면에 파리를 정렬하십시오. 젖은 Kimwipe은 표피에서 지속적인 냉각과 수분 위킹을 보장합니다. tethering에 대한 가장 큰 여자를 선택합니다. </li><li> 좋은 브러시를 사용하여 하나의 야생 타입 여성 과일 비행을 수용하기 위해 모양 사용자 지정 - 내장 관의 위치에 하나의 파리 밀어. <img src="/files/ftp_upload/old/1063_2008_11_26_2/1063_Figure-01_thumb.png" alt="" /> 그림 1. <a href="https://www.jove.com/files/1063_2008_10_28_1/1063_Figure-01.png">그림의 더 큰 버전을 보시려면 여기를 클릭하십시오.</a> </li><li> 우리는 micromanipulator에 장착된 자석 막대와 minutien 핀 (벌금 과학 도구)를 위치. 핀은 무딘 끝이 단지 두 날개 사이에 머리 뒤에 지느러미 근육을 건드리면 이러한 정렬하는 것입니다. 머리에 눈을 향해 볼 때 핀 완벽하게 수직으로해야합니다. 파리와 핀 사이의 &#39;롤&#39;의 비록 작은 금액은 묵인할 수 없습니다. 핀과 신체의 긴 축 사이의 사이드 뷰 각도가 수평선 (그림 1)에 상대적인 30 도의 코를 접속 각도로해야합니다. 참고 : 자석 밧줄에 최적의 작업은 핀을 짧게 길이로 줄어들 수 할 수 있습니다. 이것은 서스펜션 자석 사이의 거리에 전적으로 달려 있습니다. </li><li> minutien 핀이 정렬되면, minutien 핀의 뭉툭한 끝에 UV - 활성 접착제 (ElectroLite 코프)의 작은 방울을 적용하는 얇은 강철 와이어를 사용합니다. </li><li> 접착제의 비말 그냥 머리 위의 파리의 흉부를 만지는 있도록 핀을 조작. 적절한 드롭 크기, 접착제 어닐링해야하며 흉부에 핀의 흐름. 너무 많은 접착제를 사용하지 않도록주의하십시오. </li><li> 자외선의 두 20초 파열로 접착제 치료. </li><li> 옆으로 고정 파리를 놓고 반복합니다. Kimwipe 작은 광장을 얇게하고 집게로 비행을 억제하기 위해 각 곁에 비행을 제공합니다. </li><li> 복구 한 시간 후, 닿는 파리 실험을 준비하고 있습니다. </li><li> 부적 절한 gluing는 자석 분야에서 수행하는 비행의 능력을 방해 수 있습니다. 모든 비행은 비행이 제대로 접착되도록하기 위해 모든 실험의 시작 원활한 회전을위한 확인하여야한다. 이것은 강한 optomotor 응답을 이끌어하기 위해 충분히 큰 공간 기간 줄무늬 패턴을 회전하여 수행할 수 있습니다 [4]. 비행이 잘못된 피치 각도로 접착하거나 롤 축에 대하여 핀에 졌다면, 즉시 수 있습니다 (I)하지 전혀 스핀하고, (ii) 운동의 제한 범위를 가지고, 또는 (iii) 일관성에 회전 속도. 위의 경우에는 즉시 폐기되어야하고 새로 교체. 이 문제를 해결하는 경우가 대부분 부적 절한 gluing의 경우되었습니다. (파리를 교체해도 문제가 해결되지 않으면, 부 2.4 참조) </li></ol> 2 부 : 자석 정렬 자석 (희토류 - magnets.com) 정렬하면 제대로 동작의 부드러운 360도 범위를 달성하기 위해 비행을 위해 필요합니다. 제대로 자석을 정렬하려면 다음 단계를 수행하십시오. <ol><li> 낮은 링 자석은 플라스틱 슬리브에 의해 수평으로 개최하고 맑은 진공 챔버 위에 직접 배치됩니다 (그림 1, 제 3의 자세한 설명). 위쪽 막대 자석은 낮은 자석 위에 수직으로 약 3 / 4 &quot;고정됩니다. </li><li> 대략 직접 낮은 고리 자석의 중앙 지점 위의 상단 막대 자석을 배치하여 시각 위턱과 아래턱에 자석을 맞춥니다. 괜찮아, 규모 조정 micromanipulator (시스키유 주)에 상단 자석을 첨부하는 데 유용합니다. </li><li> 에폭시는 상단 자석의 아래쪽 표면에 V - 보석 베어링 (소형 부품)는 회전 마찰을 최소화하고 비행 위치를 표준화합니다. </li><li> 경기장에서 비행기를 놓고 수평 및 V를 조정날 때까지 상단에 자석의 ertical 위치는 원활하고 꾸준히 편주 축에서 360도 회전시킬 수 있습니다. 모든 비행은 자석이 올바르게 정렬되고 개별 minutien의 핀이 (부 1.11 참조) 손상되지 않도록 모든 실험의 시작 원활한 회전을위한 확인하여야한다. 자석이 제대로 날아 있습니다 (I)하지 전혀 회전 정렬되지 않은 경우 (2) 운동의 제한 범위 (III)이 일치하지 판매율에서 회전합니다. 문제가 새로 비행을 대체하여 해결하는 경우, 그것은 (1 부 참조) 대부분 gluing 문제로 인해되었습니다. 이러한 문제는 모든 비행을 위해 존재한다면, 그것은 가능성 자석 추가적인 조정이 필요합니다의 정렬에 문제가 있습니다. </li><li> 경고 : 재미있을 수있는 희귀한 지구 자석과 함께 즐기면서, 그들은 매우 위험합니다. 손상된 장비 및 / 또는 가벼운 신체적 상해의 결과를 오용. 이러한 유혹 아직 쉽게 과소 평가 자석과 극단주의 운동. </li></ol> 파트 3 : 냄새 배달 <ol><li> 악취 전달 시스템이 이전에 설명한 하나를 기반으로 [5]하고 최적화하는 가장 힘든 부분은 (그림 1)입니다. 그것은 인내와 재판과 - 오류가 많이 필요합니다. 안정적인 냄새 추적을 달성하려면 다음 단계를 수행하십시오. </li><li> 악취 시스템의 초기 셋업은 사용자 정의 지어진 물 / 냄새 유리병에 가스 멀티플렉서 (사블 시스템 국제)에서 협궤 테플론 튜브 (소형 부품)를 실행해야합니다. 이러한 튜브의 콘센트는 동일한 테플론 튜브를 사용하여 피하 포트 튜브에 직접 연결됩니다. </li><li> 명확한 아크릴 진공 챔버는 자석을 지원하기 위해 무대 아래에 위치합니다. 우리는 비행을 가까이 개방 진공을 가지고 있으며 개방의 직경을 줄이기 위해 진공 챔버에 연결된 비행 아래 장착된 4mm 유리관을 사용합니다. </li><li> 포셉를 사용하여 무대에 닿는 파리를 놓습니다. </li><li> 매력적인 냄새 (애플 시더 식초가 잘 작동), 그리고 시각 비행은 그 냄새를 추적하는지 확인을 켭니다. 파리는 냄새에 대한 선호를 사용하지 않으려면 나타나는 경우, 다음 세 단계를 따르십시오. 이것은 몇 파리, 여러 시련을 요구할 수 있습니다. </li><li> 파리는 냄새를 추적하기 위해 나타날 때까지 악취 포트의 위치를​​ 조정합니다. 우리는 파리의 머리에 냄새 micromanipulators에 포트 (시스키유 주)와 위치 4mm 지느러미와 3mm 앞쪽에를 탑재. </li><li> 파리는 냄새를 추적하기 위해 나타날 때까지 질량 유량을 조정하십시오. 우리의 설정은 7ml/min (사블 시스템 국제 MFC - 4). </li><li> 파리는 냄새를 추적하기 위해 나타날 때까지 진공의 흐름 속도를 조정합니다. 우리는 흐름 레귤레이터 (콜 파머)를 사용 13l/min에서 진공 흐름 속도를 설정할 수 있습니다. 참고 : 빌딩 진공 공급 라인이 플륨 구조의 변화를 일으키는 시간이 지남에 따라 변동될 수 있습니다. 그것은 일정한 진공 흐름 조건에 대한 유량 조절기에 외부 진공 펌프를 연결하는 것이 유용할 수 있습니다. </li><li> 항구와 흐름 속도의 위치가 설정되면, 정기적으로 가스 멀티플렉서를 사용하여 전환을 사용하여 구현 물 증기 및 냄새의 증기 사이에 스위치와 시각 냄새가 때 비행은 그 냄새를 추적하는지 확인합니다. 때때로 그 냄새 포트 내부의 잔류 냄새 그 냄새가 꺼져 냄새 추적을 이끌어내는 수 있습니다. 이것은 에탄올과 피하 튜브를 작성하고 Kimwipe와 함께 배달 끝에 수집하여 제대로 위치 악취 포트를 제거하지 않고 제거하실 수 있습니다. 압축 공기를 사용하여 남아있는 에탄올을 날려와 실험을 재개. </li></ol> 대표 결과 : 다음 단계가 제대로 준수하면 두 가지가 관찰해야합니다. 첫째, 지속적인 회전 시각적 자극이 아래 OMT에 배치 닿는 파리가 원활하게 편주 축에서 360도 회전한다. &quot;손으로&quot;전환에 (saccades라고도 함) 지속적인 시각적 자극의 부재에서 자연 터닝 동작의 특징입니다. 파리는 분명히 원활하게 회전 수없는 경우, 부적 절한 gluing (1 부 참조)하고 고르지 자석이 (2 부 참조) 비난 수 있습니다. 둘째, 그 냄새가 켜져있을 때, 즉시 그 냄새의 방향으로 머리를해야합니다. 냄새가 해제되면 파리가 무대에 하나의 위치에 대한 설정을 자발적 saccade해야합니다. 파리 적극적으로 악취 플륨, 악취 포트의 위치, 공기 흐름 속도 및 / 또는 진공 흐름 속도를 추적하지 않는 경우 (파트 3 참조) 조정이 필요할 수 있습니다.

<ol><li>Bender, J. A., Dickinson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+stimulation+of+saccades+in+magnetically+tethered+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Visual stimulation of saccades in magnetically tethered Drosophila.</a> J. Exp. Biol. 209, 3170-3182 (2006).</li>
<li>Tammero, L. F., Dickinson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collision-avoidance+and+landing+responses+are+mediated+by+separate+pathways+in+the+fruit+fly%2C+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Collision-avoidance and landing responses are mediated by separate pathways in the fruit fly, Drosophila melanogaster.</a> J. Exp. Biol. 205, 2785-2798 (2002).</li>
<li>Duistermars, B. J., Frye, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crossmodal+visual+input+for+odor+tracking+during+fly+flight%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Crossmodal visual input for odor tracking during fly flight.</a> Curr. Biol. 18, 270-275 (2008).</li>
<li>Reiser, M. B., Dickinson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modular+display+system+for+insect+behavioral+neuroscience%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">A modular display system for insect behavioral neuroscience.</a> J. Neurosci. Methods. 167, 127-139 (2008).</li>
<li>Frye, M. A., Dickinson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+output+reflects+the+linear+superposition+of+visual+and+olfactory+inputs+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Motor output reflects the linear superposition of visual and olfactory inputs in Drosophila.</a> J. Exp. Biol. 207, 123-131 (2004).</li>
</ol>

파리 Tethering이 분야에서 안정적인 냄새 추적을 도출하는 것은 비교적 간단합니다. 그것은 연습, 인내와 시행 착오가 필요합니다. 이 분야의 많은 부분이 더욱 최적화된 또는 실험적인 잠재력에 변화를 얻을 수로 대체 수 있습니다. 예를 들어, 진공 챔버의 최신 버전이 훨씬 작은하며 무대 아래에 더 많은 공간을 허용합니다. 또한, 강도와 희토류 자석의 종류가 약간 변경될 수 있으며, 추가로 악취 포트는 냄새 유형 및 / 또는 실험에 활용 농도의 수를 증가하여 추가할 수 있습니다. 우리는 장비에 변화가 맞게 최적화를 필요로됩니다. 여기에 설명한 바와 같이, OMTA 사용자가 악취 지방화에 대한 시각적 단서의 효과를 테스트할 수 있습니다. 시스템이 여러 수준에서 visuo - 후각 통합을 탐험하는 잠재력을 제공하는 악취 전달 시스템의 다목적 및 확장성과 함께 할 때 시각적 자극의 다양한는 LED 패널 시스템을 제공하고 있습니다. 이 시스템은 특히 비행 어른의 동작을 특성화를위한, Drosophila에 대한 양적 행동 assays의 증가로 추가됩니다.

<table><tbody><tr><td>냉각 스테이지</td><td>Teca</td><td>LHP-300CP</td><td></td></tr><tr><td>황동 냉각 블록</td><td>주문제작</td><td></td><td>~4 x 8 x 2cm</td></tr><tr><td>사코파구스(Sarcophagus)</td><td>주문제작</td><td></td><td>자세한 내용은 문의 바람</td></tr><tr><td>UV 경화 접착제</td><td>Kemxert corp</td><td>KOA300</td><td>1oz 병으로 수년간 사용 가능</td></tr><tr><td>패널 시스템</td><td>Caltech</td><td>http://www.dickinson.caltech.edu/panels</td><td>[4]</td></tr><tr><td>미세 핀</td><td>Fine Science Tools</td><td>26002-20</td><td></td></tr><tr><td>하단 링 자석</td><td>Rare-earth-magnets.com</td><td>NSN0615</td><td>5 - 0.75&quot; 외경 x 0.375&quot; 내경 x 0.125&quot;</td></tr><tr><td>상단 로드 자석</td><td>Rare-earth-magnets.com</td><td>NSN0750</td><td>0.125&quot; x 1&quot;</td></tr><tr><td>V-쥬얼 베어링</td><td>Small Parts, Inc.</td><td>VJ-0469-01</td><td></td></tr><tr><td>MFC-4 유량 조절기</td><td>Sable Systems International</td><td></td><td></td></tr><tr><td>가스 멀티플렉서</td><td>Sable Systems International</td><td></td><td></td></tr><tr><td>테플론 튜브</td><td>Small Parts, Inc.</td><td>STT-20-C</td><td></td></tr><tr><td>20 게이지 피하 주사 튜브</td><td>Small Parts, Inc.</td><td>HTX-20R-06</td><td></td></tr><tr><td>유리 튜브</td><td></td><td></td><td>4mm 외경</td></tr><tr><td>진공 유량 조절기</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-32464-52</td><td></td></tr></tbody></table>

drosophila에서 visual과 강한 중재 플라이트 컨트롤을 맡은 이후로 자기 테더 시스템

A Magnetic Tether System to Investigate Visual and Olfactory Mediated Flight Control in Drosophila

그것은 곤충들이 바람 스트림의 제목을 안정화시키기 위해 시각적 단서를 사용하는 것이 여러 해 동안 명확되었습니다. 많은 동물이 바람에 실시 냄새를 추적할 수 있습니다. 맞바람의 등, 영상 안정화는 냄새 추적에 직접 에이즈 추적. 그러나 후각 신호를 직접 바람의 단서에서 독립적으로 시각 추적 행동에 영향을합니까? 또한, neurophysiology 및 Drosophila에서 후각의 neurobehavioral 유전학 연구의 최근 홍수가 훨씬 더 기술적으로 세련되고 양적 행동 assays 동기가있다. 여기, 우리는 원래 좁은 판상 흐름 냄새 plumes과 무대를 갖춘하여 시력 실험 고안 자기 테더 시스템을 수정했습니다. 비행기는 작은 강철 핀 접착하고 자유롭게 편주 수 있도록 자기 분야에서 일시 중지되었습니다. 작은 직경의 음식 냄새 plumes은 배고픈 파리로 안정적인 추적을 도출, 비행의 머리 아래로 이동합니다. 여기서 우리는 자석을 정렬 악취 플륨을 고안하고, 안정적인 냄새 추적을 확인, tethering의 중요한 역학에 중점을두고 있습니다.

여기 우리는 어떻게 밧줄 후각 자기 - 밧줄 (OMT) 기기에서 플라이를 설명합니다. 우리는 희토류 자석 및 악취 포트 및 최적의 냄새 추적을 달성하기 위해 자극 전달 및 진공 흡입 모두 질량 흐름 속도를 설정할 수를 정렬하는 방법에 대해 설명합니다.

Drosophila에서 Visual과 강한 중재 플라이트 컨트롤을 맡은 이후로 자기 테더 시스템

곤충이 바람의 흐름 속에서 자신의 진행 방향을 안정시키기 위해 시각적 단서를 사용한다는 사실은 수년 전부터 명확해졌습니다. 많은 동물들이 바람에 실려 오는 냄새를 추적합니다. ...

Joof 후각 연구 분야의 성장으로 인해 후각 자기 결속 장치(olfactory magnetic tether apparatus, OMT)와 같은 더욱 정교한 행동 분석법의 필요성이 대두되었습니다. 이 절차는 초파리의 등면 흉부를 mnuchin 핀에 접착하는 과정을 포함합니다. 핀을 적절한 피치로 조절하여 초파리를 30도 각도로 매단 후, 두 개의 희토류 자석 사이에 정렬시킵니다.올바르게 수행되면 자유로운 가동 범위가 확보됩니다. 그런 다음, 전달 노즐에서 초파리의 머리를 거쳐 진공 챔버로 부드럽게 흐르는 기류가 생성되도록 냄새 포트를 정렬합니다. 이후 시각적 자극이 있는 상태에서 초파리가 휘발성 향료를 찾는 능력을 테스트합니다.안녕하세요, 저는 캘리포니아 대학교 로스앤젤레스(UCLA) 생리과학과의 Mark Fry 박사 연구실 소속 Brian DeMars입니다. 오늘은 후각 자기 고정 장치(olfactory magnetic tether apparatus)에 사용하기 위해 초파리를 고정하는 방법을 보여드리겠습니다. 또한 자석과 냄새 포트를 정렬하고, 냄새 전달 시스템의 질량 유량을 설정하는 방법도 함께 설명하겠습니다.본 실험실에서는 초파리의 시각 및 후각 매개 비행 제어를 연구하기 위해 이 절차를 사용합니다. 이제 시작하겠습니다. 테더링을 시작하려면 성충 우화 후 4~6일 된 파리를 수집하여 4~6시간 동안 굶깁니다.건조를 방지하기 위해 젖은 Kimwipe가 들어 있는 먹이 튜브에 보관합니다. 다음으로, 별표 표시된 파리 무리를 4 °C로 설정된 펠티어 냉각 스테이지의 황동 블록에 삽입된 작은 튜브로 옮깁니다. 이 온도에서 파리들은 약 30초 이내에 마취됩니다.습기를 흡수할 수 있도록 냉각 스테이지 위에 Kim wipe를 놓습니다. 다음으로 마취된 초파리를 스테이지 위에 올려놓고 분리한 뒤, 테더링을 위해 가장 큰 암컷들을 선택합니다. 미세 브러시를 사용하여 야생형 암컷 초파리 한 마리가 들어갈 수 있도록 제작된 맞춤형 사르코파구스(sarcophagus)의 정해진 위치로 초파리를 밀어 넣습니다.이제 현미경을 사용하여 초파리의 등 쪽이 위로 향하도록 올바르게 배치되었는지 확인하십시오. 초파리의 앞부분이 당신을 향하고 뒷부분이 반대편을 향해야 합니다. 다음으로, 마이크로 매니퓰레이터에 장착된 마그네틱 로드가 달린 미뉴친 핀(minuchin pin)을 배치하십시오.핀의 뭉툭한 끝부분이 초파리의 등쪽 가슴을 향하도록 정렬해야 합니다. 이 위치는 머리 바로 뒤쪽, 양쪽 날개 사이입니다. 초파리는 세 개의 축을 따라 핀 위에 올바르게 배치되어야 합니다.피치, 롤, 요를 고려할 때, 정면에서 눈을 바라보았을 때 핀은 완벽하게 수직이어야 하며, 파리와 핀 사이에 아주 적은 양의 롤이라도 허용되지 않습니다. 핀과 몸체의 장축 사이의 측면 뷰 각도 또는 피치는 수평선 대비 30도 상향 각도가 되어야 합니다. 최적의 계류 운용을 위해 핀의 길이를 조정해야 할 수도 있음을 유의하십시오.이는 현수 자석 사이의 거리에 따라 달라집니다. Mnuchin 핀이 정렬되면, 가는 강철 와이어를 사용하여 Mnuchin 핀의 뭉툭한 끝부분에 UV 경화 접착제를 소량 도포하십시오. 이제 핀을 조절하여 접착제 방울이 초파리의 머리 바로 위 가슴 부위에 닿게 하십시오.접착제를 너무 많이 사용하지 않도록 주의하십시오. 적절한 방울 크기로 도포했을 때, 접착제가 핀에서 가슴 부위로 굽어 흐르는 형태가 되어야 합니다. 그런 다음, UV 라이트를 2초씩 두 번 조사하여 접착제를 경화시키십시오.테더링이 완료되면, 파리가 본능적으로 내려앉으려는 반사가 있으므로 핀셋을 사용하여 각 파리에게 작은 정사각형의 킴와이프(Kim wipe)를 제공하십시오. 파리들이 킴와이프를 잡게 됩니다. 1시간의 회복 시간을 거친 후, 테더링된 파리들은 실험 준비가 완료됩니다.원활한 360도 가동 범위를 구현하려면 자석을 적절하게 정렬하는 것이 매우 중요합니다. 이를 위해 플라스틱 슬리브를 사용하여 하단 링 자석들을 수평으로 잡고 투명 진공 챔버 바로 위에 배치합니다. 상단 로드 자석은 하단 자석들로부터 약 3/4인치 위에 수직으로 고정하며, 상단 자석의 바닥면에는 V 듀얼 베어링이 에폭시로 부착되어 있습니다.이렇게 하면 초파리의 위치를 표준화하고 회전 마찰을 최소화할 수 있습니다. 이러한 자석은 위험할 수 있으며, 잘못 사용할 경우 장비가 손상되거나 가벼운 신체적 부상을 입을 수 있으므로 주의하시기 바랍니다. 다음으로, 상단 및 하단 자석의 위치를 시각적으로 대략 맞춥니다.상단 막대 자석을 하단 링 자석의 중심점 바로 위에 배치하고, 미세 조정을 위해 상단 자석을 마이크로 매니퓰레이터에 부착하는 것이 유용합니다. 이제 아레나에 초파리를 넣고, 모든 실험의 시작 단계에서 초파리가 360도 부드럽고 안정적으로 회전할 수 있을 때까지 상단 자석의 수평 및 수직 위치를 조정하십시오. 자석이 제대로 정렬되었는지와 mnuchin 핀이 손상되지 않았는지 확인하기 위해 각 초파리의 부드러운 회전 여부를 점검해야 합니다. 설정이 잘못된 경우 초파리가 전혀 회전하지 않을 수 있습니다.운동 범위가 제한되었거나 불규칙한 속도로 회전할 수 있습니다. 이는 접착 과정의 문제일 수 있으며, 초파리 앞에 줄무늬 격자를 회전시켜 omo 반응을 유도함으로써 확인할 수 있습니다. 초파리가 회전하지 않거나 불규칙하게 회전하는 경우, 다른 초파리로 교체하십시오.만약 파리가 제대로 회전하지 않고 모든 파리에서 이러한 문제가 발생한다면, 이는 자석의 정렬 문제일 가능성이 높으며 안정적인 냄새 전달을 위해 추가 조정이 필요합니다. 냄새 시스템의 초기 설정을 추적하려면 가스 멀티플렉서에서 맞춤 제작된 수성 냄새 바이알까지 좁은 게이지의 Teflon 튜빙을 연결해야 합니다. 이 바이알의 배출구는 동일한 Teflon 튜빙을 사용하여 하이포더믹 포트 튜브에 직접 연결되어야 합니다.다음으로, 자석을 지지하기 위해 투명 아크릴 진공 챔버를 아레나 아래에 배치합니다. 파리 아래에 장착되어 진공 챔버와 연결된 4 mm 유리 튜브를 사용하여 진공 개구부를 파리에 더 가깝게 가져가고 개구부의 직경을 줄입니다. 이제 포셉을 사용하여 결박된 파리를 아레나에 넣습니다.초파리가 정해진 위치에 놓이면 유인 향기를 켭니다. 향기가 공급될 때 초파리가 향기 포트 방향으로 향하는지 시각적으로 확인할 수 있습니다. 초파리가 향기에 대해 특별한 선호도를 보이지 않는 경우, 시행착오 방법을 통해 OMT를 최적화하십시오.이를 위해 먼저 파리가 냄새를 추적하는 것으로 보일 때까지 냄새 포트의 위치를 조정하십시오. 본 실험에서 냄새 포트는 마이크로 조작기(micromanipulator)에 장착되어 있으며, 파리 머리를 기준으로 등쪽으로 4 mm, 앞쪽으로 3 mm 지점에 위치합니다. 냄새 포트의 위치를 변경해도 냄새 추적이 개선되지 않는 경우, 파리가 냄새를 추적하는 것으로 보일 때까지 질량 유량을 조정하십시오.설정값은 분당 7 mL로 사용합니다. 질량 유량을 조절해도 냄새 추적 능력이 개선되지 않는 경우, 초파리가 냄새를 추적하는 것처럼 보일 때까지 진공 유량을 조절하십시오. 유량 조절기를 사용하여 진공 유량을 분당 13 L로 설정합니다.포트의 위치와 유량이 설정되면, 전환 가능한 가스 멀티플렉서를 사용하여 수증기와 냄새 증기의 공급을 주기적으로 전환합니다. 장치를 올바르게 설정했다면 두 가지 현상을 관찰할 수 있어야 합니다. 첫째, 지속적인 회전 시각 자극 하에서 OMT에 고정된 초파리는 수직 또는 ya 축을 따라 부드럽게 360도 회전해야 합니다. 지속적인 시각 자극이 없을 때 나타나는 자발적 회전 행동의 특징인 kos라고 불리는 갑작스러운 회전이 나타나서는 안 됩니다.초파리가 부드럽게 회전하지 못한다면, 부적절한 접착이나 자석의 정렬 불량이 원인일 수 있습니다. 둘째로, 냄새가 공급될 때 초파리가 냄새 포트 방향으로 향하는지 확인해야 합니다. 냄새 공급이 중단되면, 초파리는 아레나 내의 특정 위치에 대한 선호 없이 자발적으로 회전해야 합니다.초파리가 냄새 플룸을 능동적으로 추적하지 않는다면, 이는 냄새 포트의 위치, 공기 흐름 속도 또는 진공 흐름 속도를 조정해야 함을 의미할 수 있습니다. 지금까지 후각 자기 테더 장치에서 사용할 수 있도록 초파리를 테더링하는 방법을 보여드렸습니다. 또한 자석과 냄새 포트를 적절하게 정렬하는 방법과 냄새 전달 시스템의 질량 유량을 설정하는 방법도 살펴보았습니다.이상입니다. 시청해 주셔서 감사드리며, 실험에 좋은 결과가 있기를 바랍니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

토크 미터와 닿는 Drosophila의 편주 토크를 측정하는 것은 실험 동물의 자극 상황의 신경학 절묘한 컨트롤을 수 있습니다. 함께 과일 파리에서 사용할 수있는 고유한 유전자 도구를 사용하여,이 패러다임은 신경 생물학 연구의 광범위한 사용됩니다.

토크 미터에서 Drosophila의 Operant 학습

여기서 우리는 후각 자기 - 밧줄 (OMT) 장치에 대한 취득 비디오 이미지를 최적화하는 방법에 대해 설명합니다. 우리는 또한 visuo - 후각 융합을 공부 두 가지 샘플 실험 프로토콜을 설명합니다.

Drosophila의 비행 중 시각 인한 악취 추적

유전자 인코딩 optogenetic 도구에서 특정 뉴런의 비 침투 조작을...

의 이스케이프 문제의 Optogenetic의 자극<em&gt; Drosophila melanogaster</em

우리는 초기 변성 단계에서 Manduca sexta에 전극을 이식하는 새로운 수술 절차를 제시합니다. 이 기술을 사용하면 신경근 조직과 기계적으로 안정적이고 전기적으로 신뢰할 수 있는 결합을 통해 비행 신경생리학 역학을 연구할 수 있습니다. 우리는 또한 곤충 요에 대한 밧줄 연구를 위한 새로운 자기 부상 플랫폼을 제시합니다.

곤충 비행 동작 모니터링에 대한 초기 변성 삽입 기술

여기에서 우리는 높은 처리량 검사를 가능하게 초파리의 비행 성능의 신속하고 정확한 측정하는 방법을 설명합니다.

비행 성능의 정확하고 빠른 측정을위한 개선 된 방법에<em&gt; 초파리</em

자동화 추적 시스템 Flywalk는 초파리에서 냄새 유도 행동 고해상도 정량화를 위해 사용된다.

에서 냄새 유도 행동의 고해상도 정량화<em&gt; 초파리</em사용&gt;<em&gt; Flywalk</em&gt; 패러다임

기계감각에 영향을 미치는 새로운 돌연변이를 식별하기 위해 MARCM 방법에 의해 생성된 돌연변이 클론에서 파리 강모의 촉각 자극에 대한 행동 반응을 측정하는 분석을 설계했습니다. 이 기술의 결합을 통해 그렇지 않으면 치명적일 수 있는 기계민감성 돌연변이를 식별할 수 있습니다.

의 Mechanosensation에 대한 행동 분석 클론의 MARCM은 기반<em&gt; 초파리</em

여기에서는 최대 100마리의 식초파리(Drosophila melanogaster)의 후각 반응을 분석하기 위한 행동 설정 및 데이터 분석 방법을 설명합니다. 이 시스템은 단일 또는 다중 후각 자극과 함께 사용할 수 있으며 신경 세포 하위 집합의 광유전학적 활성화 또는 침묵에 적응할 수 있습니다.

의 컴퓨터 추적하여있는 분석 후각 행동<em&gt; 초파리</em&gt; 네 사분면의 후각에

이 프로토콜 분석 초파리 애벌레 동시 optogenetic 그것의 후 각 신경의 자극에 대 한 응답에서의 탐색 동작 합니다. 630 nm 파장의 빛은 빨간색 이동 채널 rhodopsin 표현 개별 후 각 신경 세포를 활성화 하는 데 사용 됩니다. 애벌레의 움직임이 동시에 추적 하 고 디지털 기록, 사용자 작성 소프트웨어를 사용 하 여 분석.

초파리 애벌레 동작 Optogenetic 후 각 신경의 자극에 대 한 응답 추적

이 프로토콜은 보다 유연한 비행 밀 설계를 만들기 위해 메이커 스페이스에 있는 3차원(3D) 프린터와 레이저 커터를 사용합니다. 이 기술을 사용하여 연구원은 테더드 곤충 비행 연구를 위해 비행 공장을 건설할 때 비용을 절감하고 설계 유연성을 향상시키며 재현 가능한 작업을 생성할 수 있습니다.

테더드 곤충 비행 연구를 위한 향상된 비행 밀 구축

학습하세요 Drosophila에서 후각 자기 테더(OMT) 장치를 이용한 행동 분석 방법을. 파리의 등흉부를 핀에 고정하고 자석을 정렬하여 냄새 추적 능력을 평가하는 이 기법은 시각 자극 존재 하에서도 후각 처리 메커니즘을 연구하는 데 활용됩니다.

Drosophila에서 Visual과 강한 중재 플라이트 컨트롤을 맡은 이후로 자기 테더 시스템

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