Name: 마우스 부신 Chromaffin 셀 절연 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-01-05T00:00:00.000+00:00
Duration: 18 min 30 s
Description: 배우세요 마우스 부신 수질에서 크로마핀 세포를 분리하는 방법을 통해 흥분-분비 결합을 체외에서 연구하세요. 이 프로토콜은 신경내분비학 및 세포생물학 연구에 필수적인 단일 세포 현탁액을 제공합니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

약어 : ACCs - 부신 Chromaffin 세포, E. Soln - 효소 솔루션, E. DMEM - 풍부한 Dulbecco의 수정된 이글 매체 <ol><li> 준비 <ol><li> E. Soln (40 단위 papain / 1ml E. Soln.) 중 원하는 수량에 papain을 추가합니다. </li><li> 얼음 약 15 분 carbogen와 papain을 활성화합니다. 산소 로크의 얼음 버퍼뿐. </li></ol></li><li> 해부 <ol><li> 80~10주 마우스를 사용합니다. </li><li> 제거 소화하기 전에 로크의 버퍼와 얼음 장소 산소. </li><li> 절개 절차에 대한 비디오를 참조하십시오. </li><li> 일단 excised에서 장소 땀샘은 로크의 버퍼를 산소. </li></ol></li><li> 수유기의 준비 <ol><li> 글랜드에서 지방 제거합니다. </li><li> 글랜드에서 피질을 스트립. </li></ol></li><li> 효소 소화 <ol><li> 무균 필터 papain을 산소. </li><li> 배양 접시에 산소 papain 네 가지 풀을하십시오. <ol><li> 3 수영장 100uls에 대해해야합니다. </li><li> 수영장의 1 400uls에 대해해야합니다. </li></ol></li><li> 풀을 통해 medullae 와시 <ol><li> 3 100ul 수영장으로 첫번째. </li><li> 다음 400ul 수영장을 통해 </li><li> microfuge 튜브에 400ul 수영장에서 Pippette 300ul E. Soln와 모수의 조각. </li><li> 37 microfuge 튜브 및 장소에 Qrap parafilm ° C 20 분에 대한 물 목욕. </li><li> papain을 포함한 산소 나머지 E. Soln 계속 잊지 마십시오. </li><li> 후 이십분 살균 필터 더 E. Soln. </li><li> 새로 필터링 E. Soln와 오래된 E. Soln의 입욕 medullae를 교체합니다. </li></ol></li></ol></li><li> Triturations <ol><li> 기음과 E. Soln을 삭제. </li><li> 1ml E. DMEM에 medullae 씻으십시오. </li><li> 기음과 E. DMEM을 삭제. </li><li> 1ml 팁과 300ul E. DMEM과 씹다 20X를 추가합니다. </li><li> 무균 면도날로 200ul 팁 컷. </li><li> 컷 200ul 팁 5 - 10X 씹다. </li><li> E. DMEM의 입욕 medullae 조각을 폐기하십시오. 매체 파편이 포함됩니다. </li><li> 조각 medullae하는 300uls 신선한 E. DMEM을 추가합니다. </li><li> 200ul 팁 20x와 씹다 </li><li> Pippette E. DMEM는 튜브 withough medullae 조각을 microfuge 수 있습니다. 매체 무료 ACCs이 포함됩니다. </li><li> 조각 medullae하는 300uls 신선한 E. DMEM을 추가합니다. </li><li> 23.5 게이지 주사기 바늘 20x와 medullae를 씹다. </li><li> 두 triturations에서 E. DMEM을 결합합니다. Medullae 조각은 존재하지 않아야 지금 featherlike 모습이 있어야합니다. </li></ol></li><li> 도금 <ol><li> 3.7g S.에서 2.5 분 마지막 두 분쇄 단계에서 Microfuge E. DMEM </li><li> 후속 실험에 따라 50uls - 200 E. DMEM에 Resuspend 펠릿. </li><li> 플레이트 유리 coverslip 10 - 30uls. </li><li> 준수하는 세포 15 분 동안 기다리십시오. </li><li> E. DMEM의 750uls를 추가합니다. </li></ol></li></ol>

저자들은 공개할 이해관계가 없습니다.

마우스 부신 chromaffin 셀 절연

Mouse Adrenal Chromaffin Cell Isolation

부신 골수의 chromaffin 세포 배양 시스템은 체외 설정에의 자극 - 분비 커플링 연구를 위해 매우 유용합니다. 이 프로토콜은 adrenals을 해부하다 다음 부신 피질 멀리 벗겨진하여 골수의 영역을 분리하는 데 사용되는 방법을 보여줍니다. 단일 chromaffin 세포로 골수의 소화는 다음 증명됩니다.

마우스 부신 Chromaffin 셀 절연

부신 수질 크롬친화성 세포 배양 시스템은 인비트로(in vitro) 환경에서 흥분-분비 결합(excitation-secretion coupling)을 연구하는 데 매우 유용합니다. 이...

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 비디오는 기계적 해리 기술을 사용하여 쥐의 등뿌리 신경절(DRG)에서 대식세포를 분리하는 효소가 없는 프로토콜을 보여줍니다. 새로 채취한 DRG 조직의 균질화가 완료되면 대식세포의 세포 표면 수용체에 대한 항체를 사용하여 세포를 형광으로 라벨링한 다음 유세포 분석을 수행하여 샘플에 대식세포의 존재를 확인합니다.

기계적 해리를 이용한 마우스 등뿌리 신경절에서 대식세포의 격리(Isolation of Macrophages from Mouse Dorsal Root Ganglion Using Mechanical Dissociation)

이 비디오는 성체 마우스의 복막강에서 성숙한 결합 조직형 비만 세포를 분리하기 위한 복막 세척 방법을 보여줍니다. 복막강에서 1차 면역 세포의 혼합물을 분리한 후, 적절한 배양 조건에서 비만 세포의 선택적 증식을 수행합니다.

쥐 복막강에서 일차 비만 세포를 분리하는 기술

편광 기반의 전반사 형광 현미경 (pTIRFM)은 세포막 역학의 실시간 감지를 할 수 있습니다. 이 문서는 규제 세포 외 유출 동안 막 리모델링의 연구 pTIRFM의 구현을 설명합니다. 기술은 직접적으로 또는 간접적으로 막 형상의 변화를 수반 세포 생물학의 다른 프로세스에 일반화이다.

pTIRFM와 이미징 플라즈마 막 변형

세포외이입 후, 융합된 원형질막은 세포내이입(endocytosis)으로 알려진 과정을 통해 회수됩니다. 이 메커니즘은 다음 방출을 위해 새로운 시냅스 소포를 형성합니다. 개별 내포성 이벤트는 마우스 부신 크로마핀 세포에서 세포 부착 커패시턴스 기록을 사용하여 캡처되고 분석됩니다.

마우스 부신하는 chromaffin 세포에서 세포 부착 된 정전 용량 측정을위한 방법

뇌 미세혈관 내피 세포(BMEC)는 혈액과 중추신경계(CNS), 이른바 혈액-뇌-장벽(BBB)을 분리하는 고도로 조절되는 장벽을 형성하는 특정 접합 단백질에 의해 상호 연결되어 있습니다. 이 프로토콜에서 논의된 바와 같이 1차 쥐 뇌 미세혈관 내피 세포의 분리는 BBB의 상세한 체외 연구를 가능하게 합니다.

차 설치류 뇌 미세 혈관 내피 세포의 분리

삼투성 스트레스에는이 과정을 발표 하는 신경 전달 물질의 양과 exocytosis 영향을 줍니다. 전송 전자 현미경 검사 법 함께 전기 화학 방법 결합 수 있습니다 사용 하는 방법을 exocytosis 활동, 소포 quantal 크기, 출시 하는 신경 전달 물질의 양과에 extracellular 삼투성 압력의 효과 연구 설명 동안 exocytosis.

분 비 소포 및 Exocytosis 삼투성 스트레스의 효과 모니터링

여기 우리는 마우스에서 아드레날린을 분리, 조직, 그들, 섹션 고치고 면역 형광 염색 법을 수행 하는 방법을 제시.

절연, 고정, 및 마우스 아드레날린의 면역 형광 이미징

부 신 피 질에서 분 비 하는 호르몬은 스트레스와 질병에 대 한 동물에 대 한 중요 합니다. 여기, 우리는 문화 기본 쥐 프로토콜 부 신 셀을 제시. 그것은 부 신 steroidogenesis와 지질 생 합성의 약의 메커니즘을 조사 하기 위한 좋은 생체 외에서 플랫폼을 수 있습니다.

쥐 Adrenocortical 셀 및 Steroidogenic 기능의 분석 실험의 기본 문화

이 프로토콜은 소 부신 크로마핀 세포에서 세 가지 융합 모드를 검출하기 위한 공초점 이미징 기술을 기술한다. 이러한 융합 모드에는 1) 융합 기공 개폐 및 폐쇄를 포함하는 근접 융합 (키스 앤 런이라고도 함), 2) 융합 기공 개방 및 개방 된 기공 유지를 포함하는 체류 융합, 3) 융합 된 소낭 수축을 포함하는 수축 융합이 포함됩니다.

부신 크로마핀 세포에서 융합 기공 역학의 세 가지 모드를 측정하는 공초점 현미경 검사

이 연구는 쥐 중간막 세포(MC)와 생체 외 세포 배양을 위한 최적화된 프로토콜을 개발했습니다. 이러한 세포는 세포 성장이나 단백질 발현을 손상시키지 않고 여러 번 배양, 동결, 재생 및 배양할 수 있습니다.

Optimizing Isolation and Purification of Murine Glomerular Mesangial Cells

마우스 부신 피질에 대해 대(zona glomelosa) 및 다소 포시큘라타(zona fasciculata) 풍부 세포의 2D 1차 배양을 확립하는 견고하고 재현 가능한 접근법이 개발되었습니다. 이 시스템은 각 영역의 핵심 분자 및 기능적 특징을 보존하여, 신호 전달 경로, 호르몬 생성, 부신 피질 세포 행동에 대한 체 외 내 집중 연구를 가능하게 합니다.

마우스 부신 피질에서 존 강화된 1차 배양 형성

배우세요 마우스 부신 수질에서 크로마핀 세포를 분리하는 방법을 통해 흥분-분비 결합을 체외에서 연구하세요. 이 프로토콜은 신경내분비학 및 세포생물학 연구에 필수적인 단일 세포 현탁액을 제공합니다.

마우스 부신 Chromaffin 셀 절연

더 많은 동영상 탐색