Name: 마우스 부신 Chromaffin 셀 절연 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-01-05T00:00:00.000+00:00
Duration: 18 min 30 s
Description: 배우세요 마우스 부신 수질에서 크로마핀 세포를 분리하는 방법을 통해 흥분-분비 결합을 체외에서 연구하세요. 이 프로토콜은 신경내분비학 및 세포생물학 연구에 필수적인 단일 세포 현탁액을 제공합니다.

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약어 : ACCs - 부신 Chromaffin 세포, E. Soln - 효소 솔루션, E. DMEM - 풍부한 Dulbecco의 수정된 이글 매체 <ol><li> 준비 <ol><li> E. Soln (40 단위 papain / 1ml E. Soln.) 중 원하는 수량에 papain을 추가합니다. </li><li> 얼음 약 15 분 carbogen와 papain을 활성화합니다. 산소 로크의 얼음 버퍼뿐. </li></ol></li><li> 해부 <ol><li> 80~10주 마우스를 사용합니다. </li><li> 제거 소화하기 전에 로크의 버퍼와 얼음 장소 산소. </li><li> 절개 절차에 대한 비디오를 참조하십시오. </li><li> 일단 excised에서 장소 땀샘은 로크의 버퍼를 산소. </li></ol></li><li> 수유기의 준비 <ol><li> 글랜드에서 지방 제거합니다. </li><li> 글랜드에서 피질을 스트립. </li></ol></li><li> 효소 소화 <ol><li> 무균 필터 papain을 산소. </li><li> 배양 접시에 산소 papain 네 가지 풀을하십시오. <ol><li> 3 수영장 100uls에 대해해야합니다. </li><li> 수영장의 1 400uls에 대해해야합니다. </li></ol></li><li> 풀을 통해 medullae 와시 <ol><li> 3 100ul 수영장으로 첫번째. </li><li> 다음 400ul 수영장을 통해 </li><li> microfuge 튜브에 400ul 수영장에서 Pippette 300ul E. Soln와 모수의 조각. </li><li> 37 microfuge 튜브 및 장소에 Qrap parafilm ° C 20 분에 대한 물 목욕. </li><li> papain을 포함한 산소 나머지 E. Soln 계속 잊지 마십시오. </li><li> 후 이십분 살균 필터 더 E. Soln. </li><li> 새로 필터링 E. Soln와 오래된 E. Soln의 입욕 medullae를 교체합니다. </li></ol></li></ol></li><li> Triturations <ol><li> 기음과 E. Soln을 삭제. </li><li> 1ml E. DMEM에 medullae 씻으십시오. </li><li> 기음과 E. DMEM을 삭제. </li><li> 1ml 팁과 300ul E. DMEM과 씹다 20X를 추가합니다. </li><li> 무균 면도날로 200ul 팁 컷. </li><li> 컷 200ul 팁 5 - 10X 씹다. </li><li> E. DMEM의 입욕 medullae 조각을 폐기하십시오. 매체 파편이 포함됩니다. </li><li> 조각 medullae하는 300uls 신선한 E. DMEM을 추가합니다. </li><li> 200ul 팁 20x와 씹다 </li><li> Pippette E. DMEM는 튜브 withough medullae 조각을 microfuge 수 있습니다. 매체 무료 ACCs이 포함됩니다. </li><li> 조각 medullae하는 300uls 신선한 E. DMEM을 추가합니다. </li><li> 23.5 게이지 주사기 바늘 20x와 medullae를 씹다. </li><li> 두 triturations에서 E. DMEM을 결합합니다. Medullae 조각은 존재하지 않아야 지금 featherlike 모습이 있어야합니다. </li></ol></li><li> 도금 <ol><li> 3.7g S.에서 2.5 분 마지막 두 분쇄 단계에서 Microfuge E. DMEM </li><li> 후속 실험에 따라 50uls - 200 E. DMEM에 Resuspend 펠릿. </li><li> 플레이트 유리 coverslip 10 - 30uls. </li><li> 준수하는 세포 15 분 동안 기다리십시오. </li><li> E. DMEM의 750uls를 추가합니다. </li></ol></li></ol>

저자들은 공개할 이해관계가 없습니다.

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배우세요 마우스 부신 수질에서 크로마핀 세포를 분리하는 방법을 통해 흥분-분비 결합을 체외에서 연구하세요. 이 프로토콜은 신경내분비학 및 세포생물학 연구에 필수적인 단일 세포 현탁액을 제공합니다.

마우스 부신 Chromaffin 셀 절연

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