Name: 체외에서 피부 자극 시험 (SIT)는 인간 표피 (RHE) 모델 재구성 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-07-13T21:00:00.000+00:00
Duration: 21 min 16 s
Description: 배우세요 EpiDerm 피부 자극 시험을 통해 화장품 및 의약품 성분의 피부 자극성을 평가하는 방법을 알아보세요. 이 체외 시험법은 동물 실험을 대체하며 MTT 분석으로 세포 생존율을 측정합니다.

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저자는 수정 EpiDerm SIT (5 멀티 센터 국제 검증 연구에 참여하기 위해 BfR (독일), BASF SE (독일), IIVS 주식 회사 (미국), Zet - LSL (오스트리아)에서 ZEBET에 감사드립니다 ).

I. 조직 헤어드라 이어 - 주 영 <ol><li> EpiDerm 에피 - 200 - SIT 키트 수령시, 무결성에 대한 모든 키트 구성 요소 (키트 자세한 내용은 특정 시약 및 장비의 표 참조) 확인하십시오. </li><li> 모든 세 EpiDerm 조직 들어, 하나의 무균 6 웰 플레이트 분석 매체의 0.9 ML로 미리 채워진을 준비합니다. </li><li> 무균 조건에서 EpiDerm 조직을 포함하는 24 잘 플레이트가 들어있는 비닐 봉투를 열고 멸균 거즈를 제거합니다. </li><li> EpiDerm 조직을 포함하는 각각의 삽입을 제거하고 빈 24 잘 플레이트에 삽입을 배치 살균 집게를 사용하십시오. 이 단계 동안, 살균 필터 종이에 모래 바닥 부드러운하여 삽입의 바깥 양쪽에 부합하는 나머지 운송 아가로 오스를 제거합니다. </li><li> 다음 5 분 이내, 시각적으로 조직을 검사. 완전히 액체로 덮여 결함이 조직이나 조직을 사용하지 마십시오. </li><li> 멸균 면봉 팁 면봉을 사용하여 조심스럽게 조직의 표면을 건조. 직접 조직을 만지지 마 - 모세관 효과는 조직 표면에서 수분을 제거하기에 충분합니다. </li><li> 조직 표면을 건조 후 6 웰 플레이트 분석 매체의 0.9 ML로 미리 채워진 맨 윗줄 세 조직을 전송하기만하면됩니다. 삽입 아래에 갇혀있는 공기 방울을 릴리스합니다. </li><li> 60 인큐베이터에 삽입을 포함하는 6 자 번호판을 플레이스 ± 37 5 분 사전 부화 ± 1 ° C, 5 ± 1 % CO 2, 95 % RH (상대 습도). </li><li> 60 ± 5 분 사전 잠복기의 끝에, 6 잘 판의 아래쪽 우물에 상단 우물에서 삽입을 전송. 인큐베이터에 다시 접시를 놓고 (37 ± 1 ° C, 5 ± 1 % CO 2, 95 % RH) 사전 부화 (18 ± 3 시간) 하루를 위해. </li><li> 냉장고 (5 ± 3 ° C).로 분석 매체의 나머지 플레이스 사전 부화 하룻밤에 따라 테스트 화학 물질은 EpiDerm 조직에 적용할 수 있습니다. 참고 : 사전에 부화 절차 (조직 화요일 대신에 수요일에 도착하는 경우 예) 늦은 조직 배달의 경우 단축하실 수 있습니다. </li></ol> II. 화학 노출 - 1 일 <ol><li> 전용 0.9 ML로 당 잘 분석 매체의 상단을 작성하여 테스트 화학 당 하나의 6 - 플레이트 잘 준비. </li><li> 약 5 분 화학 물질에 노출되기 전에 계획, 인큐베이터에서 미리 에어컨 조직을 포함하는 6 자 번호판을 제거합니다. </li><li> 조직의 표면을 평가하고 소독면 도움말을 사용하는 수분을 제거합니다. </li><li> 시험 재료 코드 또는 이름을 가진 모든 6 - 웰 플레이트 뚜껑을 라벨. </li><li> 선량 일분 간격으로 테스트 화학 물질과 조직이 노출 후 테스트 화학 물질 rinsing 촉진합니다. 마지막으로 조직이 약을 복용 때까지 멸균 후드에 복용 조직과 접시 보관하십시오. </li><li> 액체 화학 물질을 테스트하려면 직접 조직 위에 솔루션을 30 μL를 분배하여 조직 표면에 나일론 메쉬를 놓습니다. 필요한 경우, 부드럽게 유리 파스퇴르 피펫으로 향하고 전구를 사용하여 메쉬의 위치. 조직 표면에 누르지 마십시오. </li><li> 테스트 semisolids 경우, 직접 조직 위에 30 μL 하는걸 긍정적인 변위 피펫을 사용합니다. 필요한 확산 파스퇴르 피펫으로 화학 물질이 조직 표면에 최대한. 가리면 </li><li> 고체 재료, 곧 시험 물질의 응용 프로그램을하기 전에 멸균 DPBS 25 μL로 조직 표면을 축축하게하다. 이것은 테스트 화학 물질로 조직 표면의 접촉을 향상시킬 것입니다. 잘게 지상 시험 물질의 약 25 MG와 25 MG 보정 날카로운 응용 프로그램 숟가락을 (또는 다른 적절한 도구를) 입력합니다. 조직 표면에 고체 테스트 화학을 적용합니다. 필요한 경우, 완전히 숟가락을 비우 파스퇴르 피펫으로 향하고 전구를 사용합니다. 부드럽게 표면에 고체의 확산을 개선하기 위해 삽입을 흔들. </li><li> 밀랍 일관성과 시험 물질의 경우, 직경 8mm에 대한 조각 평면 "같은 쿠키"를 형성하고 이전 살균 DPBS로 침수 있던 조직, 위에 그것을 배치하십시오. 시험 물질과 조직 사이의 연락을 개선하기 위해서, 스테인리스 스틸 또는 플라스틱 구호로 "쿠키"를 누르다. </li><li> 부정적인 제어 및 관리 조직에 대한 긍정적인 제어로 5% SDS와 같은 DPBS을 적용합니다. </li><li> 마지막으로 조직을 먹이지 후, humidified 인큐베이터 (37 ± 1 ° C, 5 ± 1 % CO 2, 95 % RH). 35에 대한 모든 접시 ± 1 분 전송 </li><li> 35 후 37 ± 1 분 보육 ° C 배양기에서 모든 접시를 제거하십시오. 멸균 후드에 접시를 놓고 60 분 화학 노출의 기간이 가장 먼저 약을 복용 조직에 대한 완료될 때까지 기다립니다. </li><li> 후 (insur하는 분 시간 간격마다 하나 삽입을 사용하여 세척 절차를 시작모든 삽입에 대한 총 노출 시간이) 60 분입니다 전자. </li><li> 무균 DPBS과 조직을 씻어 수있는 세척​​ 병을 사용합니다. DPBS의 지속적인 흐름을 이용하여 15 배 삽입 조직을 입력하고 (참고 그것을 빈 :. 나일론 메쉬와 조직을 위해, 조직의 표면, 5 번 세척하고 지적, 날카로운 집게와 함께 신중하게 메쉬를 제거 후, ​​나머지를 계속 10 씻는다). </li><li> 15 150 ML의 DPBS 완전히 잠수함, 삽입 3 번 씻어 병을 사용하여 씻어 시험 자료의 나머지 부분을 제거 흔들 후. </li><li> 마지막으로, 내부로부터 한번 조직 삽입을 씻어 한번 살균 DPBS와 함께 밖에서. </li><li> 부드럽게 삽입을 흔들림과 멸균 압지에 모래 바닥하여 조직에서 DPBS의 초과를 제거합니다. </li><li> 이전에 분석 매체로 미리 채워진 새로운 6 - 잘 판에 blotted 조직 삽입을 전송합니다. 다음 단계의 모든 (14-18)는 각각의 삽입을위한 1 분 이내에 이루어져야합니다. </li><li> 마지막으로 조직 씻어서 후 멸균 면봉 각 조직의 표면을 조심스럽게 건조 면봉 스쳐. </li><li> 24 ± 2 시간 동안 인큐베이터에서 조직을 품어 (37 ± 1 ° C, 5 ± 1 % CO 2, 95 % RH). 참고 : 각 분석 기술자는 아래 설명된대로 프로토콜을 따라 수 있도록, 단일 테스트 실행 (세트)의 부정과 긍정적인 컨트롤을 포함하여 6 개 이상의 시험 물질을 시험하지 말아야 </li></ol> III. 중간 교류 - 주 2 <ol><li> 24 후 ± 이시간 이후 부화는 6 자 판, 미디어 0.9 ML로 미리 채워진 하단 부분에 삽입을 전송하기만하면됩니다. 상단 행에서 미디어는 추가 끝점 (크린 시토킨, chemokines 등)의 분석을 위해 수집하실 수 있습니다. 보조 종점의 분석은 선택 사항입니다. </li><li> 이후 부화를 계속 (37 ± 1 ° C, 5 ± 1 % CO 2, 95 % RH) 또 다른 18 ± 3 시간. </li></ol> IV. MTT의 생존 분석 - 3 일 <ol><li> 화학 이름이나 코드와 함께 레이블이 24 잘 접시. 하나의 플레이트는 MTT와 조직 배양을 위해 봉사하고 추출 단계에 대한 다른 것입니다. </li><li> MTT 집중 (5 MG / ML)를 해동 및 MTT의 희석제로 diluting하여 MTT 솔루션을 준비합니다. MTT 용액의 최종 농도는 1 MG / ML입니다. </li><li> 24 잘 판의 각 우물에 MTT 용액 피펫 300 μL. </li><li> 인큐베이터에서 6 자 번호판을 제거 압지에 삽입의 바닥 얼룩하고, MTT 사전 채워진 24 잘 판에 그들을 전송합니다. </li><li> 인큐베이터에서 24 잘 플레이트 플레이스 (37 ± 1 ° C, 5 ± 1 % CO 2, 95 % RH)와 3 시간 동안 품어 ± 5 분. 엄밀히 3 시간 준수 ± 다른 MTT의 수치 사이의 편차를 피하기 위해 5 분 배양 시간을. </li><li> MTT 보육이 완료되면 부드럽게 모든 우물에서 MTT 매체 대기음하는 흡입 펌프를 사용합니다. </li><li> 리필 DPBS와 우물과 다시 대기음. 이 rinsing 두 번 더 반복하고 조직은 지난 흡인 후 건조되었는지 확인합니다. </li><li> 세척은 새로운 24 잘 판에 삽입을 전송 후. 부드럽게 각 삽입이 ML의 extractant 솔루션 (이소프로판올)를 pipetting하여 삽입 젖어. 수준은 따라서 완전히 조직을 잠수함이 잠수, 삽입의 위쪽 가장자리 극복할 것입니다. </li><li> extractant 증발을 억제하기 위해 24 잘 플레이트 (Parafilm 또는 씰링 봉투를 사용하는 예) 인감. 접시 흔드는 (~ 120 RPM)에 부드러운 잡고 실온에서 최소 2 시간 동안 조직에서 MTT의 압축을 풉니다. 떨지 않고 숙박 추출도 사용할 수 있습니다. </li><li> 추출 기간이 완료되면, 피어스 주사 바늘이나 전구 파스퇴르 피펫을 페르시와 추출물이 삽입이 수행된하는 잘으로 실행할 수 있도록 함께 삽입합니다. </li><li> 구멍 삽입을 취소하고 동질 때까지 깨끗이 아래 세 번에서 솔루션을 피펫. </li><li> 각 조직의 경우, 96 - 웰 플랫 바텀 microtiter 접시에 보라색 formazan 솔루션의 두 200 μL aliquots를 전송. 이 비디오 프로토콜을 함께 스프레드 시트에 지정된 고정 플레이트 디자인에 따라 복사본을 전송합니다. 공백 들어, 이소프로판올를 사용합니다. </li><li> 참조 필터없이 570 NM (540-580)의 파장을 사용하여 96 - 웰 플레이트 분광 광도계에서 MTT 추출물의 광학 밀도 (OD)를 참조하십시오. </li><li> 결과 자동 계산 (그림 1)의 스프레드 시트에 결과를 입력합니다. </li><li> MTT 분석에 의해 결정 %의 조직 생존이 대조군에 비해 &lt;50 %면 시험 화학은 '자극'을 (R38 또는 GHS 분류 2) 표시됩니다. 참고 : MTT는 유독하므로 취급시 보호 장갑을 착용해야합니다. MTT와 정도 보호빛과, MTT 이후 lutions 구분 빛입니다. 그것이 시간이 지남에 따라 저하하기 때문에 준비 후 몇 시간 이내에 MTT 솔루션을 사용합니다. </li></ol> V. 분석 품질 컨트롤 <ul><li> EpiDerm 에피 - 200 - SIT 키트 접수 기준 : 체외 RHE 모델에서뿐 아니라 검증 프로세스 (8) 중에, 시간이 지남에 따라 일관성있는 고품질의 데이터를 제공해야합니다. 장기 분석 재현성과 성능을 보장하기 위해 권장 지침 "은 성능을위한 각 많은 샘플링 세포 또는 조직의 전체 특성 ... 및 분석 성능의 일관성 보장을 제공하는 컨트롤 및 벤치마킹 화학 물질의 일반적인 사용"(9) 포함 . 아래에 설명된 검정 합격 기준 이외에, EpiDerm 각 생산 많이 (1 % 트리톤 X - 100) 추가 벤치 마크에 대한 화학 물질 제조 업체에서 품질 테스트를 컨트롤입니다. 노출 시간은 트리톤 Triton X - 100이 결정되는 50 % (동부 표준시 - 50)에 조직 생존을 줄이기 위해 필요. EpiDerm 들어, 연간 평균 동부 표준시 - 50 값은 5.9 시간에서 7.5 시간으로 원거리있다. 부정적인 제어 조직에 대한 많은 정보 CV (베이스 라인 생존의 다양성 즉,)로 많은 1996 년부터 매년 7.5 % 이하 평균 있습니다. 위해 각 생산 많이 ET50 값은 1996 (;; 로우어 수용 한도 = 4.8h 상위 수용 한도 = 8.7h 즉, 동부 표준시 - 50 = 6.7 시간)의 설립 역사적인 평균 트리톤 X - 100 ET50의 2 표준 편차 이내에 가을에해야합니다 제조 업체에서 사용하기 위해 공개합니다. </li><li> 에피 - 200 - SIT 분석 접수 기준 1 : 대조군 : MTT - 시험에서 대조군 (NC) 조직 (멸균 DPBS 대우)의 절대 OD이 절차를 운송 및 저장 후 사용 특정 조건 하에서 테스트 실험실에서 얻은 조직 생존의 지표이다. NC 조직의 평균 OD 570이 ≥ 1.0 ≤ 2.5 경우 검정의 합격 기준을 준수합니다. </li><li> 에피 - 200 - SIT 어세이 접수 기준 2 : 긍정적인 제어 5 % SDS (H 2 O)을 솔루션은 긍정적인 제어 (PC)로 사용 테스트 화학 물질과 동시에 테스트합니다. PC 각 분석에서 테스트하기 위해 아니지만 하나 이상의 PC가 일 당 테스트가 필요합니다 있다고 동시 의미합니다. 긍정적인 통제의 생존은 역사적 데이터의 95 % 신뢰 구간 내에 있어야합니다. 부정적인 통제 조직의 %가 20 %로 PC의 조직의 평균 생존이 표현하는 경우 분석은 수용 기준을 만족합니다. </li><li> 에피 - 200 - SIT 분석 접수 기준 3 표준 편차 (SD) 피부 irritancy 3 단일 조직 결정 평균 생존의 예측 따라서 조직의 다양성은 acceptably 낮은되어야 복제됩니다. 동일 취급 3의 개별 %의 조직 viabilities에서 계산 SD가 &lt;18 %예요 복제하는 경우 분석은 수용 기준을 만족합니다. </li></ul> 대표 결과 <div style="border:1px #000000 solid; width:100%; padding-bottom:5px;"><img src="/files/ftp_upload/1366/1366fig1.jpg" alt="그림 1"> <img src="/files/ftp_upload/1366/1366fig1_2.jpg" alt="그림 2"> <img src="/files/ftp_upload/1366/1366fig1_3.jpg" alt="그림 3"> </div> 그림 1 6 시험 기사, NC 및 PC ​​컨트롤에 대한 얻은 결과 -. 결과의 계산을위한 자동 스프레드 시트의 일부. NC에 참조 50% 아래 조직 생존을 감소 테스트 화학은 irritants으로 분류됩니다. 테스트는 충분히 멀리 따라서 분석의 견고를 증가 분류 컷 - 오프 (50 % 생존)에서 아르 결과를 제공하기 위해 최적화되어 있습니다. <div style="background-image:url(../index_RES_1me8j21/c1vzp1s1_strip23px.png); background-position:0 100%; background-repeat:repeat-x; height:24px; width:100%;"><div style="padding-left:26px; padding-right:4px; padding-top:4px; width:100%;"> 자료 </div></div><img src="/files/ftp_upload/1366/materialstable.jpg" alt="자료 목록">

<ol><li>Kandárová, H., Liebsch, M., Genschow, E., Gerner, I. ngrid, Traue, D., Slawik, B., Spielmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+the+EpiDerm+Test+Protocol+for+the+upcoming+ECVAM+Validation+Study+on+In+Vitro+Skin+Irritation+Tests%5BTitle%5D)+AND+%22ALTEX%22%5BJournal%5D)">Optimization of the EpiDerm Test Protocol for the upcoming ECVAM Validation Study on In Vitro Skin Irritation Tests.</a> ALTEX. 21, 107-114 (2004).</li>
<li>Kandárová, H., Liebsch, M., Gerner, I., Schmidt, E., Genschow, E., Traue, D., Spielmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EpiDerm+Skin+Irritation+Test+Protocol+-+Assessment+of+the+performance+of+the+optimized+test%5BTitle%5D)+AND+%22ATLA%22%5BJournal%5D)">EpiDerm Skin Irritation Test Protocol - Assessment of the performance of the optimized test.</a> ATLA. 33, 351-367 (2005).</li>
<li>Kandárová, H., Hayden, P., Klausner, M., Kubilus, J., Kearney, P., Sheasgreen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vitro+Skin+Irritation+Test%3A+Improving+the+Sensitivity+of+the+EpiDerm+Skin+Irritation+Test+Protocol.Accepted+for+publication%5BTitle%5D)+AND+%22ATLA%22%5BJournal%5D)">In Vitro Skin Irritation Test: Improving the Sensitivity of the EpiDerm Skin Irritation Test Protocol.Accepted for publication.</a> ATLA. , Forthcoming (2009).</li>
<li>Spielmann, H., Hoffmann, S., Liebsch, M., Botham, P., Fentem, J., Eskes, C., Roguet, R., Cotovi, J., Cole, T., Worth, A., Heylings, J., Jones, P., Robles, C., Kandárová, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ECVAM+International+Validation+Study+on+In+Vitro+Tests+for+Acute+Skin+Irritation%3A+Report+on+the+Validity+of+the+EPISKIN+and+EpiDerm+Assays+and+on+the+Skin+Integrity+Function+Test%5BTitle%5D)+AND+%22ATLA%22%5BJournal%5D)">The ECVAM International Validation Study on In Vitro Tests for Acute Skin Irritation: Report on the Validity of the EPISKIN and EpiDerm Assays and on the Skin Integrity Function Test.</a> ATLA. 35, 559-601 (2007).</li>
<li>Follow-up validation of the modified EpiDerm Skin Irritation Test (SIT): results of a multicentre study of twenty reference test substances. Liebsch, M., Gamer, A., Curren, R., Frank, J., Genschow, E., Tharmann, J., Remmele, M., Bauer, B., Raabe, H., Barnes, N., Hilberer, A., Wilt, N., Lornejad-Schäfer, M. R., Schäfer, C., Spiller, E., Hayden, P., Kandárová, H. 15th Congress on Alternatives to Animal Experimentation, 2008 September 19-21, Linz Austria, , (2008).</li>
<li>United Nations. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Globally+Harmonized+System+of+Classification+and+Labeling+of+Chemicals+%28GHS%29%22">Globally Harmonized System of Classification and Labeling of Chemicals (GHS)</a>. , Second revised edition, UN. New York and Geneva. (2007).</li>
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<li>Rispin, A., Stitzel, K., Harbell, J., Klausner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ensuring+quality+of+in+vitro+alternative+test+methods%3A+Current+practice%5BTitle%5D)+AND+%22Regul+Toxicol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Ensuring quality of in vitro alternative test methods: Current practice.</a> Regul Toxicol Pharmacol. 45, 97-103 (2006).</li>
</ol>

저자들은 본 논문에서 사용된 시약 및 도구를 생산하는 MatTek 사의 직원입니다.

이 비디오에서는, 우리는 EpiDerm의 피부 자극 시험 (EpiDerm SIT) 개발 및 미용 및 제약 원료를 포함한 화학 물질의 체외의 피부 자극 시험에 대한 확인을 증명하고있다. 이 방법을 수행할 때, 그것은 프로토콜의 편차가 다른 결과를 일으킬 수 있기 때문에, 무균 조건에서 작동하고 엄격하게 검증 프로토콜을 수행하는 것이 중요합니다. 검정의 일부 수정이 가능하지만, 프로토콜 변경 사항은 저자와 직접 논의해야합니다. 이 방법의 유일한 한계는 MTT의 종점과 시험 물질의 가능한 간섭이다. 직접 MTT을 감소 색의 시험 물질 혹은 (그리고 따라서 세포 mitochondria 탈수소 효소의 활동을 모방)은 MTT 끝점를 방해할 수 있습니다. 그러나 이러한 시험 물질이 계속 (또는)에 조직을 제시하는 경우에만 MTT 검사 (예 : 42시간 시험 물질에 노출된 후) 시험 물질의 충분한 양을 시점에있다면 문제가 있습니다. 이 가능성 이벤트 (True)로 신진 대사 MTT 감소 및 기여 색깔 시험 자료 또는 제공한 분석 표준 작업 절차에 자세히 설명되어있는 절차에 의해 계량 수있는 시험 자료에 의해 (FALSE) 직접 MTT 감소의 경우 MatTek 주식 회사

체외에서</emepiderm를 사용하여> 피부 자극 시험 (sit)는 인간 표피 (rhe) 모델 재구성

An In Vitro Skin Irritation Test (SIT) using the EpiDerm Reconstructed Human Epidermal (RHE) Model

EpiDerm의 피부 자극 시험 (EpiDerm SIT)이 개발되었습니다<sup&gt; (1,2,3)</sup&gt; 및 확인<sup&gt; (4,5)</sup&gt;에 대한<em&gt; 체외에서</em화장품 및 제약 원료를 포함한 화학 물질&gt; 피부 자극 테스트. EpiDerm에 앉아는 3D를 활용<em&gt; 체외에서</em&gt; 재건축 인간 표피 (RHE) 모델 EpiDerm. 이 프로토콜에서 설명하는 절차는 GHS 분류의 irritants 2 비 irritants 사이의 차별을 허용<sup&gt; (6)</sup&gt;. 시험은 사전 부화, 60 분 노출, 42 시간 후 부화 및 MTT의 생존 분석 구성된, 4 일 기간 동안 수행됩니다. 조직 영수증과 하룻밤 사전 부화 (주 0) 후, 조직은 몸에 붙이기도 액체, 반 고체, 고체 또는 왁스 수있는 테스트 화학 물질 (1 일)에 노출되어 있습니다. 세 조직은 각각의 시험 화학뿐만 아니라 긍정적인 컨트롤 (5 % AQ. SDS 솔루션), 그리고 대조군 (DPBS)에 사용됩니다. 화학 노출은 조직이 37 인큐베이터에 보관 35 분 중 60 분 ° C. 지속 시험 물질은 다음 광범위한 세척 절차에 의해 조직 표면에서 제거됩니다. 조직의 삽입은 blotted 신선한 매체로 전송됩니다. 24 시간의 잠복기 (2 일) 후, 매체 교환됩니다. 매체 크린 시토킨 또는 관심사의 다른 끝점의 자세한 분석을 위해 저장할 수 있습니다. 매체 교환 후, 조직은 추가 18 시간 동안 incubated 수 있습니다. 포스트 부화 (3 일) 전체 42h의 끝에서, 조직은 노란색 MTT 용액으로 전송하고 3 시간 동안 incubated. mitochondrial 신진 대사에 의해 주로 형성 결과 보라색 - 블루 formazan 소금은, 이소프로판올를 사용하여 2 시간 동안 추출됩니다. 압축을 푼 formazan의 광학 밀도는 분광 광도계를 사용하여 결정됩니다. 화학 물질은 대조군 처리 조직에 상대적인 조직 생존가 50 % 이하로 감소하는 경우 자극으로 분류됩니다. 이 절차는 EU 규정에 맞게 화학 물질의 위험 식별 및 라벨에 대한 생체내 래빗 피부 자극 시험에 가득 교체로 사용될 수<sup&gt; (7)</sup&gt;.

이 비디오에서는, 우리는 EpiDerm의 피부 자극 시험 (EpiDerm SIT) 개발에 대한 검증을 보여주<em&gt; 체외에서</em화장품 및 제약 원료를 포함한 화학 물질&gt; 피부 자극 테스트.

체외에서</emEpiDerm를 사용하여> 피부 자극 시험 (SIT)는 인간 표피 (RHE) 모델 재구성

EpiDerm 피부 자극 시험(EpiDerm SIT)은 ...을 포함한 화학 물질의 인 비트로(in vitro) 피부 자극 시험을 위해 개발(1,2,3) 및 검증(4,5)되었습니다.

Epiderm은 Matt Tech Corporation에서 개발한 정상 인간 세포 유래 체외 재구성 인간 표피 모델입니다. EC VM이 검증한 Epiderm 피부 자극 시험 프로토콜은 화장품, 원료 및 산업용 제제와 같이 인체 피부에 접촉하게 될 제품에 대해 기존의 동물 기반 시험을 대체합니다. 본 시험은 피부 자극 키트와 Epiderm 조직이 실험실에 도착하는 0일 차에 시작되며, 이후 하룻밤 동안 배양한 뒤 분석 배지로 전처리를 수행합니다.1일 차에 표피 조직의 비정형 표면을 추정 자극 화합물에 1시간 동안 노출시킨 후, 2일 차에 세척 단계를 통해 자극제를 제거합니다. 24시간 배양 후, 배양 인서트를 신선한 배지에 옮기고 기존 배지는 방출된 사이토카인 및 케모카인 분석에 사용할 수 있습니다. 조직을 MTT라고 알려진 화합물과 반응시키면, 미토콘드리아 환원효소에 의해 암자색으로 전환되어 maoz 및 salt 분석에 사용됩니다.세포 생존력을 판독합니다. 시료에서 진한 보라색이 나타나지 않는 것은 생존력이 감소했음을 나타냅니다. 또한, 테스트 화합물의 비색 판독값이 음성 대조군의 50% 미만일 경우, 해당 테스트 화합물은 자극제로 분류될 수 있습니다.안녕하세요, Matt Corporation의 Helena Kava입니다. 오늘은 재구성된 인간 피부 모델인 epiderm을 이용한 인비트로(in vitro) 피부 자극 시험 절차를 보여드리겠습니다. 이 절차는 규제 요구 사항에 따라 인비보(in vivo) 급성 피부 자극 시험을 완전히 또는 부분적으로 대체하는 용도로 사용될 수 있습니다.이 새로운 인 비트로(in vitro) 절차는 화학 물질 및 화장품 원료의 위해성 확인 및 라벨링에 사용될 수 있습니다. 이제 시작하겠습니다. Epiderm은 인간 표피 각질 형성 세포 배양에서 유래하여 인간 표피의 3차원적, 다층적 및 고도로 분화된 모델을 형성합니다.해당 조직들은 유사분열 및 대사 활동이 활발하며, 구조적 및 생화학적으로 생체 내 대응 조직을 밀접하게 모방하고, 인간 표피와 같이 보장된 재현성을 가집니다. Epiderm은 조직화된 기저층, 가시층, 과립층 및 다층의 각질층으로 구성됩니다. 각질층에는 생체 내에서 발견되는 것과 유사한 패턴으로 배열된 세포 간 라멜라 지질층이 포함되어 있습니다.이 조직들은 무혈청 배지에서 배양됩니다. 각 조직은 개별 세포 배양 인서트에서 성장시킵니다. 96웰 고처리량 형식을 포함한 다른 구성도 가능합니다.조직 생산은 완료까지 약 3주가 소요되며, 이 과정의 특정 시점에 조직을 공기-액체 계면(air liquid interface)으로 올리고 조직의 APIC 표면에서 모든 액체를 제거합니다. 조직은 기저측 표면을 통해서만 영양분을 공급받으며, 이 표면은 MatTech의 독자적인 배양 배지와 접촉 상태를 유지합니다. 전형적인 Epiderm 키트는 직경 9mm의 조직이 각각 들어있는 24개의 조직 배양 인서트와 이 피부 자극 시험을 수행하기에 충분한 분석 배지를 포함하고 있습니다.24개의 인서트가 중간 주입된 AGA 로즈 겔 위에 단단히 안착되어 있으며, 표준 24웰 플레이트의 각 웰에 조직이 하나씩 들어 있습니다. 화학 물질 테스트를 시작하기 전, 3~4°C의 온도에서 익일 배송 서비스를 통해 운송됩니다. EPIDERM 테스트 시스템을 사용하여, 서면 프로토콜에 설명된 대로 분석에 사용되는 모든 기구와 도구를 준비하고 멸균하십시오. 면봉과 같은 일부 재료는 멸균 포장된 상태로 제공되거나 오토클레이브 처리되어야 합니다.포셉과 같은 기구의 멸균에는 70% ethanol을 사용해야 하며, 세척병의 멸균에는 UV 또는 감마선 조사를 사용해야 합니다. 분석에 사용되는 두 가지 핵심 용액은 미리 준비된 DPBS와 5% SDS 용액입니다. 24개의 표피 조직이 포함된 키트 하나당, 분석에는 증류수로 제조한 pH 7의 멸균 DPBS 약 2L가 사용됩니다.멸균 DPBS는 세척액뿐만 아니라 음성 대조군으로 사용됩니다. 5% SDS를 준비하여 양성 대조군으로 사용해야 합니다. 피부 자극 시험은 EPIDERM EPI 200 SIT 키트를 수령한 후 즉시 시작합니다.모든 키트 구성품의 무결성을 확인하고, 문제가 있을 경우 즉시 Mat Tech 사에 문의하십시오. 모든 구성품이 갖춰져 있다면 다음 단계로 진행하십시오. 테스트를 시작하려면 키트에 제공된 분석 배지가 실온에 도달하도록 하십시오. 라미나 플로우 후드 내에서 미리 가열하지 마십시오.표피 조직 인서트 3개당 멸균된 6-well 플레이트 1개를 준비하고, 멸균 조건 하에서 각 웰에 분석 배지 0.9 milliliters를 피펫으로 분주합니다. 멸균된 공기 흐름 하에서 표피 조직이 포함된 24-well 플레이트가 담긴 플라스틱 백을 엽니다. 멸균 거즈를 제거하고 멸균 핀셋을 사용하여 표피 조직이 포함된 각 인서트를 조심스럽게 꺼냅니다.멸균 거즈나 필터 페이퍼로 가볍게 닦아내어 인서트 외측에 남아 있는 아가로스(agarose)를 제거합니다. 그 후 5분 이내에 조직을 빈 멸균 24 웰 플레이트에 옮깁니다. 인서트를 육안으로 점검합니다.조직의 결함이나 표면의 과도한 수분을 기록하십시오. 결함이 있는 조직이나 액체로 완전히 덮인 조직은 사용하지 마십시오.최적의 조직 인서트. 표면이 건조해야 하며, 분리된 부분, 고르지 않은 부분 또는 표면의 과잉 액체가 없어야 합니다. 다음으로, 멸균 면봉을 사용하여 조직의 표면을 조심스럽게 건조시킵니다.조직을 직접 만지지 않도록 주의하십시오. 표면을 건조시킨 후에는 모세관 현상만으로도 표면의 수분을 충분히 제거할 수 있습니다. 6개씩 묶인 각 행의 상단 줄에 조직 3개를 옮기십시오.0.9 milliliter의 분석 배지를 미리 채운 웰 플레이트입니다. 인서트 아래에 갇혀 있는 기포를 제거하십시오. 다음으로 인서트가 포함된 6-웰 플레이트를 인큐베이터에 넣고 1시간 동안 둡니다.37 °C에서 사전 배양합니다. 첫 번째 사전 배양 기간이 끝나면, 인서트를 6-well 플레이트의 상단 웰에서 하단 웰로 옮깁니다. 플레이트를 다시 인큐베이터에 넣고 하룻밤 동안 사전 배양합니다.나머지 분석 배지를 냉장고에 넣습니다. 하룻밤 동안의 사전 배양 후, 테스트 화학 물질을 표피 조직 인서트에 처리할 수 있습니다. 화학 물질 노출 분석을 시작하기 전, 필요한 모든 장치, 용액 및 테스트 화학 물질을 실온에 둡니다.멸균 후드 내에서, 모든 비멸균 재료 병을 후드 안에 넣기 전 70% ethanol로 닦아냅니다. 음성 대조군 멸균 DPBS, 양성 대조군, 5% SDS 및 증류수 또한 후드 내의 실온 상태로 준비해 둡니다. 폐기물 수거를 위한 큰 바이알을 따로 마련합니다.각 화학 물질당 6-웰 플레이트를 하나씩 준비하고, 상단 행의 각 웰에만 0.9 milliliters의 분석 배지를 채웁니다. 각 플레이트에 조직 번호와 화학 물질 이름을 표시합니다.화학 물질에 노출시키기로 계획한 시간의 약 5분 전에, 전처리가 완료된 조직이 담긴 6-웰 플레이트를 인큐베이터에서 꺼냅니다. 그런 다음 조직의 표면 상태를 육안으로 평가합니다.멸균 면봉을 사용하여 모든 수분을 제거하되, 조직 표면을 누르지 마십시오. 마지막으로, 6-웰 플레이트 뚜껑에 테스트 물질의 코드 또는 이름을 표시합니다. 음성 및 양성 대조군을 각각 3회 반복 측정하는 것을 포함하여, 한 번의 테스트 과정에서 6가지 이상의 화학 물질을 테스트하지 마십시오.이미 알려진 테스트 물질을 취급할 때는 화학 물질 도포 및 세척 간격을 1분으로 설정하십시오. 코드가 부여되었거나 알 수 없는 시료의 경우, 물질안전보건자료(MSDS)에 기재된 지침을 따르십시오. 화학 안전 가이드라인을 준수하고 환기 장치가 설치된 캐비닛을 사용하십시오.장갑을 착용하고 눈과 얼굴을 보호하십시오. 노출 후 시험 화학물질의 세척을 용이하게 하기 위해 1분 간격으로 조직에 화학물질을 투여하며, 마지막 조직에 투여할 때까지 투여 조직이 담긴 플레이트를 층류 후드(laminar hood) 안에 보관하십시오. 조직과 시험 화합물을 다루기 위해 전체 과정 동안 벌브 형태의 팁이 달린 파스퇴르 피펫을 사용합니다. 액체 화학물질을 시험하기 위한 벌브 모양의 팁은 분젠 버너의 불꽃을 이용하여 만들 수 있습니다.액체 테스트 물질 30 µL를 조직 위에 직접 분주하고, 즉시 타이머를 시작하여 시간을 측정합니다. 조직 표면에 나일론 메쉬를 배치합니다. 타이머가 1분에 도달하면 두 번째 액체 화합물을 추가합니다. 테스트 화학 물질당 3개의 조직을 사용하며, 각 화합물을 1분 간격으로 추가해야 함을 유의하십시오.반고체 제형을 테스트하려면, 양압 변위 피펫(positive displacement pipette)을 사용하여 30 µL를 조직 위에 직접 분주하십시오. 필요한 경우, 파스퇴르 피펫을 사용하여 화학 물질을 조직 크기에 맞게 펴 바르십시오. 고체 물질을 도포하기 직전에, 조직 표면과 테스트 화학 물질의 접촉을 개선하기 위해 25 µL의 멸균 DPBS로 조직 표면을 적신 후, 25 mg 정밀 도포 스푼에 미세하게 분쇄된 테스트 물질을 채우십시오.고체 테스트 화학 물질을 조직 표면에 도포합니다. 필요한 경우, 멸균된 벌브 헤드 피펫을 사용하여 스푼의 내용물을 완전히 비웁니다. 인서트를 가볍게 흔들어 고체 물질이 표면에 잘 퍼지도록 합니다.조직 크기에 맞게 피펫 끝에 전용 팁(bulb head)을 장착하여 사용할 수 있습니다. 조직 표면을 누르지 마십시오. 마지막으로, 마지막 조직에 투여한 후 대조군으로서 DPBS(음성 대조군)와 5% SDS(양성 대조군)를 각각 3반복으로 조직 인서트에 적용하고, 모든 플레이트를 습도가 유지되는 37 °C 인큐베이터에서 35 ± 1분 동안 배양하십시오.배양하는 동안 세척 단계에 필요한 모든 재료를 후드 안에 준비하십시오. 35분간의 배양이 끝나면 인큐베이터에서 모든 플레이트를 꺼냅니다. 이를 멸균 후드로 옮기고, 첫 번째 투여 조직의 화학 물질 노출 시간이 60분 동안 완료될 때까지 기다립니다.다음으로, 세척 절차를 시작합니다. 멸균된 DPBS로 조직을 15회 헹굽니다. 잔류 시험 물질을 제거하기 위해, 조직 표면에서 1.5 centimeters 떨어진 곳에서 DPBS를 지속적으로 흘려보내 조직 인서트를 채운 후 비웁니다.DPBS 스트림이 너무 약하면 시험 물질이 제거되지 않으므로 주의하십시오. 나일론 메쉬를 사용하여 조직 4개를 5회 세척할 때 1분 간격의 시간 차를 유지하고, 뾰족한 핀셋으로 메쉬를 조심스럽게 제거하십시오. 그 후 나머지 10회 세척을 계속 진행하고, 15회째 세척 후에는 세척병을 사용하여 인서트를 150 mL의 DPBS에 3회 완전히 담가 헹구고 흔들어 남은 시험 물질을 제거하십시오.마지막으로 조직을 헹굽니다. 멸균된 DPBS를 사용하여 내부에서 한 번, 외부에서 한 번 인서트를 삽입합니다. 인서트를 부드럽게 흔들고 멸균 흡수지로 닦아내어 조직에서 과잉의 DPBS를 제거합니다.다음으로, 블로팅된 조직 인서트를 어세이 배지가 미리 채워진 새로운 6-웰 플레이트로 옮깁니다. 다시 한번, 각 노출 시료의 노출 시간을 60분으로 유지하기 위해 이 모든 단계가 1분 간격 내에 완료되어야 함을 기억하십시오. 마지막 조직의 세척이 끝나면, 멸균 면봉을 사용하여 각 조직의 표면을 조심스럽게 건조시킵니다.표면에 화학 물질의 흔적이 여전히 남아 있다면, 멸균된 면봉을 사용하여 이를 제거하십시오. 마지막으로, 조직을 인큐베이터에서 향후 24시간 동안 배양합니다. 배양 시작 시간을 방법 기록지에 기록하십시오.또한 방법 문서 시트에 모든 다른 응용 사례를 기록하십시오. 후드 내에서 플레이트를 이동하는 Mat Tech Corporation 제공 표준 작업 절차서의 부록을 참조하십시오. 0.9 milliliter 배지가 미리 채워진 6-well 플레이트의 하단부로 인서트를 옮기십시오.상단 열에서 배지를 수집하여 미리 라벨을 붙인 24-웰 플레이트에 옮긴 후, -20°C에 보관하십시오. 분석 전까지 배양액으로 방출된 사이토카인 및 케모카인의 분석은 선택적 단계입니다. MTT 분석을 위해 18 ± 3시간 동안 추가로 배양하십시오. 2개의 24-웰 플레이트에 화학 물질의 이름이나 코드를 기입하여 라벨을 붙이십시오.MTT는 독성이 있으므로 취급 시 반드시 보호 장갑을 착용하십시오. MTT 농축액을 해동한 후 MTT 희석액으로 희석하여 MTT 용액을 준비합니다.MTT는 빛에 민감하므로 빛으로부터 보호하고 2~3시간 이내에 사용하십시오. MTT는 시간이 지남에 따라 분해되므로, 24웰 플레이트의 각 웰에 MTT 배지 300 µL를 피펫으로 분주합니다. 이제 인큐베이터에서 6웰 플레이트를 꺼냅니다.블로팅 페이퍼로 인서트 바닥의 액체를 닦아낸 후, MTT가 미리 채워진 24웰 플레이트로 옮깁니다. 24웰 플레이트를 인큐베이터에 넣고 3시간 동안 배양합니다. MTT 판독값의 편차를 방지하기 위해 3시간의 배양 시간을 엄격히 준수해야 하며, MDS에 MTT 배양 시작 시간을 기록하는 것을 잊지 마십시오. MTT 배양이 완료되면, 독성 폐기물 트랩이 장착된 석션 펌프를 사용하여 모든 웰에서 MTT 배지를 조심스럽게 흡입하여 제거합니다.웰을 DPBS로 다시 채운 후 흡입하여 제거합니다. 이 세척 과정을 두 번 더 반복하며, 마지막 흡입 후에는 조직이 건조한지 확인하십시오. 세척이 끝나면 인서트를 새로운 24웰 플레이트로 옮기고, 각 인서트에 2 mL의 추출액을 조심스럽게 피펫팅하여 인서트를 침전시킵니다.액위가 인서트의 상단 가장자리보다 높아져 양쪽 모두에서 조직이 완전히 잠기게 됩니다. 추출물 손실과 증발을 막기 위해 히트 실러 또는 파라필름을 사용하여 24웰 플레이트를 밀봉하십시오. 방법 기록지에 추출 시작 시간을 기록하고, 플레이트 쉐이커에서 완만하게 흔들어주며 상온에서 최소 2시간 동안 추출합니다. 추출 기간이 완료되면, 주사 바늘이나 팁 끝이 둥근 파이펫을 사용하여 인서트를 뚫고 추출물이 인서트가 들어있던 웰로 흘러 들어가게 하십시오.천공된 인서트를 폐기하고, 웰 안의 용액이 균질해질 때까지 피펫으로 세 번 위아래로 섞어줍니다. 각 조직에 대해 120 RPM으로 설정된 플레이트 셰이커를 사용할 수도 있습니다. 블루 포르마 용액 200 µL씩 두 분량을 96-웰 평저 마이크로타이터 플레이트로 옮깁니다.공시료(blank)를 위해 이 비디오 프로토콜에 제공된 스프레드시트의 고정 플레이트 설계에 따라 중복 시료를 옮깁니다. ISO propanol을 사용하여 96-웰 플레이트 분광광도계로 레퍼런스 필터 없이 570 nanometers 파장에서 광학 밀도(OD)를 측정합니다. 결과값의 자동 계산을 위해 결과를 스프레드시트에 입력합니다.첨부된 프로토콜에 설명된 대로 시험 화학 물질의 간섭으로 인한 보정 사항을 고려하며, 시험 화학 물질은 자극성 물질로 표시됩니다. 분광 광도 분석 후 조직 생존율이 50% 이하인 경우, NC 조직의 OD 570은 1 이상 2.5 이하입니다. 또한 음성 대조군 조직의 백분율로 표시된 PC 조직의 평균 생존율은 20% 미만이며, 동일하게 처리된 3개 반복군의 개별 조직 생존율 백분율로부터 계산된 SD는 18% 미만입니다. 세포 생존율 값이 50% 미만으로 나타나는 화합물은 자극성 물질로 간주될 수 있습니다.지금까지 재구성된 인간 피부 모델인 Epiderm을 사용하여 검증된 60분 및 42시간 피부 자극 시험을 수행하는 방법을 보여드렸습니다. 이 절차를 수행할 때, 시험의 대부분이 무균 또는 무균 상태에서 진행된다는 점을 기억하는 것이 중요합니다. 방법의 수정이 필요하거나 절차 단계에 대해 더 자세한 설명이 필요한 경우, 주저하지 말고 저희에게 연락하여 도움과 조언을 구하시기 바랍니다.이상입니다. 시청해 주셔서 감사하며, 실험에 좋은 결과가 있기를 바랍니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 보고서에서는, 우리는 3 차원의 피부 구조와 구성에 인간의 피부를 모방 모델을 재구성 설명합니다. Melanocyte 생리, 흑색증의 진행 및 피부 줄기 세포의 운명은 피부 모델을 재구성 사용하여 조사되었습니다. 모델은 또한 약물 평가를위한 잠복기 도구로 유용합니다.

3 차원의 인간 피부 모델을 재구성 : 도구는 일반 피부와 흑색증의 진행을 공부하기

이 비디오는 흑색종 진행을 연구하기 위해 체외 3D 유기형 피부 재건을 생성하기 위한 자세한 프로토콜을 설명합니다. 이 피부 모델은 생체 내 장기의 구조와 다세포 복잡성을 모두 모방합니다.

유기형 전체 피부 재구성 생성: 인간 피부 샘플을 사용하여 3D 피부 모델을 구축하는 절차

이 프로토콜의 목표는 자연 피부와 유사한 3차원 전체 두께 피부를 구축하는 것입니다. 특별히 제작된 자동 상처 제거 장치를 사용하면 무균 상태를 유지하면서 정확하고 재현 가능한 상처를 생성할 수 있습니다.

3 차원 전체 두께 피부의 세대 동등한 및 자동화 부상

우리는 세 가지 차원 재구성 된 인간의 각막과 같은 상피 (RHCE) 조직 모델을 활용하여 눈 자극 테스트를 개발했습니다. 시험은 안구 자극과 부식성 물질 (GHS 분류 1과 결합 2) 및 표시 (GHS 없음 카테고리)를 필요로하지 않는 사람들을 구별 할 수있다.

복원 된 인간의 각막 모양의 상피 (RHCE) 조직 모델을 사용하여 눈에 자극성 화학 물질의 위험 식별을위한 눈 자극 시험 (EIT)

이 논문의 목표는 표피 각질세포와 활력을 잃은 인간 진피로부터 유전적으로 변형된 인간 유기형 피부를 생성하는 방법에 대한 포괄적이고 상세한 프로토콜을 제공하는 것입니다.

약화 된 인간의 진피를 사용하여 유전자 변형의 Organotypic 피부 문화의 생성

우리는 고분자 crowders (MMC)를 이용하여 세포 외 기질 단백질이 풍부한 세포 - 유래 매트릭스를 획득하기 위해 프로토콜을 제시한다. 또, 구조의 성숙을 유지하면서 배양 시간을 단축 차원의 Organotypic 피부 공동 배양 세대에서 MMC를 포함하는 프로토콜을 제시한다.

개선 2D 및 3D 스킨<em&gt; 체외</em거대 분자의 크라우 딩 사용&gt; 모델

이 프로토콜은 재현 가능하고 견고한 방식으로 3차원 재구성된 인간 표피를 육성하는 간단한 방법을 설명합니다. 또한 표피 장벽 모델의 구조 기능 관계를 특성화합니다. 선동적인 자극에 재구성된 인간 표피의 생물학 반응은 또한 제시됩니다.

대규모로 3차원 재건 된 인간 표피 를 육성

이 프로토콜의 목표는 장기 문화를 위한 접근가능하고 간단한 기술을 사용하여 혈관화된 인간 피부 등가물의 생성 및 체적 분석을 설명하는 것입니다. 가능한 한, 단계에 대한 근거는 연구원이 연구 요구에 따라 사용자 정의 할 수있는 능력을 허용하기 위해 설명된다.

자가 조립 혈관 인체 피부 등가물의 생성

여기서는 마이크로머신 마이크로유체 플랫폼을 사용하여 3차원 단순화 및 미분화 피부 모델을 생성하는 프로토콜을 제시합니다. 병렬 흐름 접근법은 주사기 펌프에 의해 제어되는 상피 세포의 파종을 위해 진피 구획의 시상 증착을 허용합니다.

마이크로머신 마이크로유체 플랫폼의 간소화된 3차원 스킨 온-어칩 모델 생성

여기에서는 세포 배양 실험실에서 일상적인 연구를 위해 다양한 3D 피부 모델을 소개하는 저렴하고 간단한 절차를 제시합니다. 연구원은 상업적으로 이용 가능한 모델에 의존하지 않고 필요에 맞는 모델을 만들 수 있습니다.

2차원(2D) 단일 배양에서 3차원(3D) 다중 배양에 이르기까지 다양한 응용 분야를 위한 피부 모델 구축

본 프로토콜은 in vitro에서 숙주-병원체 상호 작용을 조사하기 위한 유기형 조직 모델의 적용을 개략적으로 설명합니다. 특히, 설명된 모델 시스템은 구강 건강 대 질병의 맥락에서 생물막(치석)과 관련된 미생물에 노출된 다층 구강 상피를 사용합니다.

In vitro에서 숙주-병원체 상호 작용을 조사하기 위한 유기형 조직 모델 시스템

배우세요 EpiDerm 피부 자극 시험을 통해 화장품 및 의약품 성분의 피부 자극성을 평가하는 방법을 알아보세요. 이 체외 시험법은 동물 실험을 대체하며 MTT 분석으로 세포 생존율을 측정합니다.

체외에서 피부 자극 시험 (SIT)는 인간 표피 (RHE) 모델 재구성

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