Name: 규아 샤 프로 시저에 헴 Oxygenase - 1 Upregulation의 Bioluminescence 이미징 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-08-28T09:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 39 s
Description: 학습하세요 생체 발광 이미징을 이용한 귀사 시술 후 헴 옥시게나아제-1(HO-1) 상향 조절 분석 방법을 생쥐 모델에서. 이 기술은 전통 중의학의 치료 효과를 실시간으로 관찰하는 데 활용됩니다.

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K. 웡, STC 왕은 기능 및 분자 이미징 센터, 브리검 앤드 위민스 병원에서 기금에서 지원하는 K. 웡, STC 왕은 생명 공학 및 정보학, 메소 디스트 병원 연구소, 웨일 코넬 메디컬 칼리지를위한 센터에 의해 지원됩니다. KK 크왕, 난 첸, JQ 르네는 바이오 메디컬 이미징, 매사 추세츠 종합 병원에 대한 Athinoula A. Martinos 센터에서 기금에 의해 지원됩니다. Lenuta Kloetzer, 브래든 쿠오는 Neuroenteric 연구 센터, 매사 추세츠 종합 병원의 기금에 의해 지원됩니다 저자 DRS 감사합니다. Q. Zeng 및 광학 이미징 연구소, 브리검 및 기술 지원을위한 여성 병원의 X. 쑤.

<ol><li> 여성 HO - 1 - 루시페라제 유전자 변형 생쥐 (4-6 주 세)가 도착되면, 주식 타코닉 팜에서 구입할 수 있으며, 생쥐는 숙박 시설을 허용하는 최소 4 일 동안 동물의 주택 시설에 배치됩니다. </li><li> bioluminescence 이미징을위한 준비 : <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> 각 HO - 1 마우스의 무게를. 동물의 무게 luciferin의 복용량을 계산이 필요합니다. </li><li> 제모 : 또는 다시 동물의 복부 및 /여 머리 제거제 나이르 ®를 적용하는 면으로 스왑을 사용합니다. 5-10초 기다 리면서. 머리를 닦아으로 깨끗한 면봉 스왑을 사용합니다. 깨끗한 남은 머리를 닦아 증류수에 조직의 한 조각을 찍어. </li><li> 배경 잡음을 줄이기 위해 IVIS 100 역의 이미징 플랫폼 이외의 형광 검은 종이 (스트라 스 모어 Artagain ® 검은 종이)를 놓으십시오. </li><li> luciferin (Xenogen 회사에서) 7.5 MG / ML (멸균 H 2 O에 용해)의 농도에 솔루션을 준비합니다. luciferin의 복용은 65.5 밀리그램 / kg 체중이다. 따라서, 20g의 마우스 0.175 ML luciferin 솔루션의 intraperitoneal 주사를 필요로합니다. 이것을 달성하기 위해, luciferin 솔루션 (0.175ml)의 단일 사출 량은 26 게이지 바늘로 주사기에 미리입니다 </li></ol></li><li> 규아 샤 절차 : 규아 샤는 bioluminescence 이미징 프로토콜을 실행하기 전에 한 번만 적용됩니다. 규아 샤는 통증이 아니므로, 마우스는 진정 isoflurane으로 간단히 anesthetized해야합니다. 규아 샤 절차는 다음 단계를 포함 : <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> 규아 샤 절차 중 규아 샤에 의해 몇 시간을 목표로 피부 부분에 기름칠을하는 요리 기름이나 증류수를 적용합니다. </li><li> 반복 세라믹 수프 스푼이나 플라스틱 숟가락을 사용하여 부드러운하지만 회사 강제에서 마우스 뒤쪽의 머리카락이없는 지역을 다쳤어요. </li><li> 다시 피부가 빨간색 때까지​​ 힘든 계속, 어떤은 일반적으로 2-3분 이내에 달성 피하 혈액 넘쳐 흐름의 표시입니다. </li></ol></li><li> HO - 1 upregulation은 몇 시간에 걸쳐 천천히 쌓아이므로 Bioluminescence 이미징은 규아 샤 후 즉시 또는 몇 시간이 시작될 수 있습니다. bioluminescence 이미징을위한 절차는 다음과 같습니다 <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> isoflurane (1.5 %) 및 ​​의료 등급 공기의 혼합물로 채워진 마취 유도 챔버에 마우스를 마취. </li><li> 마우스 anesthetized되면​​, IVIS 100 광학 이미징 역에서 이미징 챔버 마우스를 이동합니다. 나태한 자세 (최대 복부)에 마우스를 위치. 이미징 챔버가 계속 isoflurane의 1.5 %로 들어갈 수 있습니다. 이미징 플랫폼은 37 가열 ° C에서 마우스 보온 수 있습니다. </li><li> &quot;중간 비닝 &#39;에서 이미지 수집 30 초 설정 노출 시간을 설정합니다. 이미지를 얻기 시작합니다. 수동 또는 자동으로 이미지 획득 매일 3 분 반복하는 기계를 설정합니다. 첫 번째 이미지의 취득 후, 관심 (ROI)의 지역은 복부, 가슴 및 머리 영역을 커버하기 위해 그려진 것입니다. 이것은 투자 수익 (ROI)은 다음 복사와 &quot;생활 이미지 ®&quot;IVIS 100 스테이션을 함께 소프트웨어를 사용하여 다음과 같은 이미지에 붙여넣을 수 있습니다. </li><li> 신호 강도는 초당 광자 단위로 측정됩니다. 마크 시간은 신호 강도에 대한 최대 가치를 도달하고 최고 시간 이후 약 5-10분위한 이미징 마우스 계속. </li><li> 부정사 위치에 이미지 인수가 완료되면, 마우스를 뒤집과 발생하기 쉬운 위치 (백업)의 그것을 믿는다. 이제 소프트웨어 &quot;생활 이미지 ®&quot;의 사용에 다시하고 머리 영역을 커버하기 위해 그린 투자 수익 (ROI)과 5-10분위한 이미징 동물을 계속합니다. 이미지의 선택은 나태한 자세 후 쓰러진 자세는 임의입니다. 하나는 관심의 주요 장기에 따라 발생하기 쉬운 위치로 시작하도록 선택할 수 있습니다. 또 다른 옵션은 이미지를 별도의 실험에서 부정사와 발생하기 쉬운 위치를하는 것입니다. </li><li> 쓰러진 자세에서 이미징 인수가 완료되면, isoflurane 끄고 복구 유도 실로 이미징 챔버에서 마우스를 이동합니다. 유도 챔버는 현재 의료에만 공기와 마우스는 보통 미만 분 깨어나서 함께 들어갈 수 있습니다. </li><li> 후처리에 대한 영상 자료를 저장합니다. </li><li> 초기 이미징 연구 이후, 추가 영상 인수는 규아 샤 후 몇 일 동안 실시됩니다. 하나의 샘플 일정은 12 일 시간, 24 번째 시간, 36 번째 시간, 48 번째 시간, 72 차 시간 120 일 시간에 영상을 반복하지만 이미징 일정의 정확한 타이밍은 유연성입니다. 더 이상 후속이 필요한 경우 추가 이미지 세션 추가할 수 있습니다. 이미징 전에 머리를 다시 성장이있다면 절차를 제거하는 머리를 반복합니다. </li></ol></li><li> 컨트롤 그룹에 대한 모든 절차를 반복하지만 규아 샤 (3 단계)를 건너 뛰십시오. 생쥐 같은 그룹은 제어와 규아 샤, 제어 EXP 모두 사용하는 경우eriment는 한 달쯤 후에 규아 샤 절차 전에 선호 수행하거나해야합니다. </li></ol> 대표 결과 : 규아 샤에 대응 HO - 1의 생체내 upregulation 그림의 bioluminescence 이미지 1 보여줍니다. 그림 2의 그래프는 규아 샤와 관련된 동일한 마우스의 몸 전체에서 광학 흐름 (광자 / 초) 120 시간 이상의 양적 시간적 변화를 보여주는 ... <img src="/files/ftp_upload/1385/figure1tmb.jpg" alt="그림 1" border="0" /> 그림 1. 왼쪽부터 각각 18시간 36 시간 1백20시간 게시 규아 샤에서 규아 샤 전에 같은 마우스의 전면보기 (부정사)의 권리, 대표 이미지, 있습니다. 규아 샤 후, 하나는 위장관, 성기 트랙트, 간, 신장 (뒷면보기에서 표시되지 않습니다), 그리고 다른 사람의 영역을 포괄 여러 장기에 상당한 신호 강도 증가의 진행 상황을 관찰. 하시기 바랍니다 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1385/figure1.jpg">여기를 클릭</a> 그림 1의 더 큰 버전을 위해. <img src="/files/ftp_upload/1385/figure2tmb.jpg" alt="그림 2" border="0" /> 그림 2. 그림 1 같은 마우스 규아 샤에 따라 120시간 이상 추적 몸 전체에서 자속의 양적 변화 (광자 / 초). 하시기 바랍니다 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1385/figure2.jpg">여기를 클릭</a> 그림 2의 더 큰 버전을 볼 수 있습니다.

<ol><li>Zhang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selection+of+potential+therapeutics+based+on+in+vivo+spatiotemporal+transcription+patterns+of+heme+oxygenase-1%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Selection of potential therapeutics based on in vivo spatiotemporal transcription patterns of heme oxygenase-1.</a> J Mol Med. 80, 655-6564 (2002).</li>
<li>Zhang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+in+vivo+functional+analysis+of+transgenes+in+mice+using+whole+body+imaging+of+luciferase+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Transgenic+Res%22%5BJournal%5D)">Rapid in vivo functional analysis of transgenes in mice using whole body imaging of luciferase expression.</a> Transgenic Res. 10, 423-434 (2001).</li>
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<li>Morse, D., Choi, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heme+oxygenase-1%3A+from+bench+to+bedside%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Heme oxygenase-1: from bench to bedside.</a> Am J Respir Crit Care Med. 172, 660-670 (2005).</li>
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<li>Calabrese, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitagenes%2C+dietary+antioxidants+and+neuroprotection+in+neurodegenerative+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Biosci%22%5BJournal%5D)">Vitagenes, dietary antioxidants and neuroprotection in neurodegenerative diseases.</a> Front Biosci. 14, 376-397 (2009).</li>
<li>Contag, P. R., Olomu, I. N., Stevenson, D. K., Contag, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescent+indicators+in+living+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Bioluminescent indicators in living mammals.</a> Nat Med. 4, 245-247 (1998).</li>
</ol>

저자들은 공개할 이해관계가 없습니다.

HO - 1, 헴 oxygenase의 inducible 양식의 전사는 헴, 과산화수소, UV 조사, hypoxia, 물리적 스트레스 등 많은 요인에 의해 upregulated 있습니다. 이러한 보고된 HO - 1 bioluminescence 프로토콜로 온몸의 화상은 여러 장기에서 체계적 HO - 1 표현의 빠른 스냅샷을 제공합니다. 작은 동물에서, bioluminescence 이미징은 높은 감도에 - 생체내 유전자 발현 체계의 변경을 실시간으로 양적 세로 광학 평가, 그림과 같이 있습니다. Bioluminescence 분자 이미징은 비용을 절감하고 실천 빠르게 복잡한 시스템 생물학 가설의 조사에 필요한 통계 전력을 달성하고 제안 제약 및 기타 치료 개입의 전신 효과에 대한 평가하고, 작은 동물의 유전자 표현 assays의 처리량을 증가시킵니다. 한 제한은 해부학의 낮은 공간 해상도입니다. 단층 기능이 새로운 광학 이미징 시스템은 문제를 완화합니다. 마이크로 - CT 또는 MRI 작은 동물의 이미지 수집 및 등록 제대로 해부학을...

<table><tbody><tr><td>루시페린(Luciferin)</td><td>Caliper Life Sciences</td><td>P/N 122796</td><td>이전 Xenogen</td></tr><tr><td>IVIS 100</td><td>Caliper Life Sciences</td><td></td><td>이전 Xenogen</td></tr></tbody></table>

규아 샤 프로 시저에 헴 oxygenase - 1 upregulation의 bioluminescence 이미징

Bioluminescence Imaging of Heme Oxygenase-1 Upregulation in the Gua Sha Procedure

규아 샤는 피하 microvascular 혈액 넘쳐 흐름과 타박상을 일으킬 힘든 피부를 고용하고 중국의 전통 민속 요법입니다. 의 발광 생물 광학 이미징을위한 프로토콜 HO - 1 -<em&gt; 루시페라제</em이 논문에 보고된&gt; 유전자 변형 생쥐는 급속한를 제공합니다<em&gt; 생체내에</em의 upregulation의&gt; 분석 헴 oxygenase - 1 (HO - 1) 규아 샤 절차에 대한 응답으로 유전자 발현. HO - 1 길이 산화 스트레스에 대한 cytoprotection를 제공하는 것으로 알려져있다. bioluminescence 출력에 의해 평가 HO - 1의 upregulation은, 규아 샤 발표 순환 헤모글로빈 제품 산화 반응을 나타내는 것으로 생각됩니다. 규아 샤는 점상 (스플린터 출혈) 또는 피하 모세 혈관에서 혈액의 넘쳐 흐름을 나타내는 출혈 (멍) 관찰 때까지 뒤로 또는 유전자 변형 마우스의 다른 목표 부위에 윤활 피부를 통해 부드러운 스푼의 가장자리 반복 스트로크에 의해 관리되었다. 규아 샤 후, bioluminescence 이미징 세션은 여러 내부 장기에 HO - 1 표현의 역학에 따라 몇 일 동안 매일 실시했다.

규아 샤, 중국어 번체 치료 피부 스크레이핑은 피하 microvascular 혈액 넘쳐 흐름을 발생합니다. 우리의 bioluminescence 이미징의 프로토콜보고 HO - 1 -<em&gt; 루시페라제</em규아 샤는 헴을 upregulates는 것을 입증하는&gt; 유전자 변형 생쥐 oxygenase - 1 여러 장기 (HO - 1).

규아 샤 프로 시저에 헴 Oxygenase - 1 Upregulation의 Bioluminescence 이미징

괄사(Gua Sha)는 피부를 긁어 피하 미세혈관의 혈액 외출혈과 멍을 유도하는 중국의 전통 민간 요법입니다. 해당 프로토콜은...

안녕하세요, 저는 하버드 의과대학의 교육 병원인 브리검 여성 병원 방사선과 신경방사선 분과의 Jeffrey Young입니다. 안녕하세요, 저는 매사추세츠 종합병원 소화기 유닛 및 내과, 그리고 Martino 방사선 센터의 Brad Quo입니다.오늘은 살아있는 마우스 모델에서 heme oxygenase-1 조절을 생물발광 이미징으로 관찰하는 절차를 보여드리겠습니다. 저희 실험실에서는 피부를 긁어내는 중국 전통 의학 기법인 Gua Sha라는 절차를 통해 heme oxygenase-1의 전신적 상향 조절을 연구하기 위해 이 기술을 사용합니다.이제 시작하겠습니다. 암컷 HO one 루시퍼레이즈 형질전환 마우스의 제모를 시작하기 전, 나중에 정확한 루시퍼린 용량을 계산할 수 있도록 마취 전에 체중을 측정합니다. 발가락 꼬집기 반사가 없는 것을 확인하여 마우스가 완전히 마취되었는지 확인하십시오.그런 다음 면봉을 사용하여 동물의 등 부위에 제모제를 도포합니다. 5~10초 동안 기다린 후, 깨끗한 면봉으로 털을 닦아냅니다. 그 후 증류수에 적신 티슈를 사용하여 남아 있는 털을 깨끗이 닦아냅니다. 시술 과정 중에 gua 대상 피부 부위가 건조해지지 않도록 증류수를 몇 번 도포하여 윤활 상태를 유지합니다.플라스틱 스푼을 사용하여 마우스 등의 털이 없는 부위를 부드럽지만 단단하게 긁어냅니다. 등 피부가 붉게 변할 때까지 계속 긁어주는데, 이는 피하 혈액 유출의 징후입니다. 이 과정은 보통 2~3분 이내에 완료됩니다.다음 섹션에서 설명할 Lucifer 용액을 준비하는 동안 마우스를 유도 챔버에 넣으십시오. Lucifer를 멸균수에 녹여 7.5 mg/mL Lucifer 용액을 준비합니다. Lucifer의 투여량은 체중 kg당 65.5 mg입니다.26 gauge 바늘이 장착된 주사기에 Lucifer 용액의 전체 용량이 포함된 단일 분주액을 미리 채웁니다. 마우스의 복부에 바늘을 빠르게 삽입하고 전체 용량을 한 번에 주입합니다. IVIS 100 스테이션의 이미징 영역 위에 형광이 없는 검은색 종이를 놓습니다.영상 촬영 중 배경 노이즈를 줄이기 위함입니다. 영상 촬영을 시작하려면 마우스를 IVUS 100 광학 영상 스테이션의 영상 챔버로 옮깁니다. 마우스의 마취 상태를 유지하기 위해 영상 챔버에는 1.5%의 isof fluorine이 지속적으로 주입되며, 마우스를 배와 닿는 면이 위로 향하는 앙와위(supine position)로 배치합니

bioluminescence-imaging-heme-oxygenase-1-upregulation-gua-sha

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

hypoxia inducible 인자 - 1α 활동 Bioluminescence 이미징은 유방암 뇌 전이의 마우스 모델에서 종양 intracranial hypoxia 개발을 모니터에 적용됩니다.

유방암 뇌 전이의 종양 Hypoxia 역학 생체내의 Bioluminescence 이미징에서는 마우스 모델에서

NADPH 산화 효소가 phagocytes에서 반응성 산소 종의 주요 소스 (ROS)입니다. 때문에 ROS의 임시 자연의, 그것은 생활 동물의 ROS 수준을 측정하고 모니터링하기가 어렵습니다. 생활 쥐 ROS의 일련 정량화하기위한 최소한 침입 방법 설명되어 있습니다.

다른 동물 모델에서 NADPH 산화 효소 활동의 Bioluminescence 영상

발광 생물 세균 이미징<em&gt; 생체 내</em

Source: Hunt, A. M. A., et al. Come to the Light Side: In Vivo Monitoring of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections in Chronic Wounds in a Diabetic Hairless Murine Model. J. Vis. Exp.(2017).This video demonstrates the procedure for assessing infection clearance and healing progression in a wounded diabetic mouse using bioluminescent and microscopic images.

Bioluminescence Imaging to Track Bacterial Infection and Wound Healing in a Mouse Model

우리는 염증 단계를 구별하기위한 비 침습 이미징 방법을 설명합니다. 루미놀의 전신 배달 호중구의 MPO 활동에 의존 급성 염증의 영역을 보여준다. 대조적으로, lucigenin의 주입은 대 식세포에서 Phox 활동에 의존 만성 염증으로 시각화 할 수 있습니다.

생체 내 이미징 방법에 급성 및 만성 염증을 구별하는

이 원고 xenobiotic 유발 산화 스트레스의 시험에 대 한 유전자 인코딩된 fluorogenic 기자 라이브 셀 이미징 응용 프로그램에서 사용을 설명합니다. 이 실험 방법은 많은 독성 산화 스트레스의 검색에 사용 되는 기존 방법의 단점을 피하는 동안 탁월한 spatiotemporal 해상도, 감도 및 특이성을 제공 합니다.

유전자로 인코딩된 Fluorogenic 센서를 사용 하 여 독성 산화 스트레스의 평가에 접근을 이미징

우리는 비-침략 적 vivo에서 이미징 프로토콜을 간소 하 고 비용 효율적인, L-012, chemiluminescent luminol 아날로그, 시각화 하 고 계량 상처 excisional 마우스 모델에서 생성 된 반응성 산소 종 (선생님)을 활용 하 여 설명 합니다.

Vivo에서 영상에는 Murine 반응성 산소 종의 상처 모델

이 프로토콜은 이중 생물 발광 이미징에 의해 종양 진행 및 혈관신생을 실시간으로 모니터링하는 종양 베어링 마우스 모델의 확립을 설명합니다.

종양 진행 및 혈관 신생의 이중 생물 발광 이미징

이 프로토콜의 목적은 마우스 피부에서 치명적이지 않은 수준의 활성 산소 종(ROS)의 일시적인 생체 내 생산을 유도하여 조직의 생리적 반응을 더욱 촉진하는 것입니다.

활성 산소 종의 전환 가능한 protoporphyrin IX 의존성 광생성에 의한 마우스 피부의 줄기 세포 틈새 및 조직 재생 자극 in situ

생체발광-루시퍼라제 효소에 의해 방출되는 광은 소분자 기질인 루시페린-광감각 단백질을 활성화시키기 위해 이용될 수 있고, 이로써 광 자극에 또 다른 차원을 추가하고 시간적 및 공간적 스케일에 걸쳐 세포에서 다수의 광-매개 기능의 조작을 가능하게 한다.

생체 발광 광유전학 2.0 : 생체 발광을 활용하여 체외 및 생체 내에서 광감각 단백질을 활성화 합니다.

이 프로토콜은 만성 피로 증후군 진단을 받은 인간 대상에서 구리 편석 괄사를 수행하는 표준화된 단계별 절차를 설명합니다. 이 기술은 구리 합금 스크레이퍼를 특정 경락 경로(관장과 방광경선)와 지정된 경혈점에 적용하는 것을 포함합니다. 절차적 워크플로우와 데이터 수집 방법을 설명하기 위해 대표적인 개입 전후 관찰 데이터를 포함합니다.

인간 대상 만성 피로 증후군 치료를 위한 표준화된 구리 랭석 구아사 프로토콜

학습하세요 생체 발광 이미징을 이용한 귀사 시술 후 헴 옥시게나아제-1(HO-1) 상향 조절 분석 방법을 생쥐 모델에서. 이 기술은 전통 중의학의 치료 효과를 실시간으로 관찰하는 데 활용됩니다.

규아 샤 프로 시저에 헴 Oxygenase - 1 Upregulation의 Bioluminescence 이미징

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