Name: Obliterative 에어웨이 질환의 발전을 연구하는 모델로 사용 마우스의 Heterotopic 및 Orthotopic Tracheal 이식 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-01-20T18:15:00.000+00:00
Duration: 9 min 10 s
Description: 학습하세요 마우스의 이종 및 정위 기관 이식 모델을 통해 폐쇄성 기도 질환(OAD) 발전 메커니즘을 연구하는 방법을. 수술 기법과 질병 진행 과정을 비교 분석하여 이식 면역학 연구에 활용하세요.

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저자 크리스티안 Pahrmann (연구소 관리자)를 주셔서 감사합니다.

<ol><li> 남성 Balb / C 마우스 (8-12주)는 찰스 리버 연구소 (Sulzfeld, 독일)에서 구입하고 있습니다. 생쥐는 종래의 조건, 공급 표준 쥐 음식과 물 광고 libitum 아래에 위치해 있습니다. </li><li> 2 % Isofluran는 마취에 사용됩니다. </li></ol> 기증자 준비 <ol><li> 복부 머리를 면도하고 betaisodona를 사용하여 지역을 소독. </li><li> 미세한 보려면 아래에서 후두의 수준에서 흉골에 정중선 자궁 절개를 수행합니다. </li><li> 기관의 명확한 전망을 얻을 수있는 피하 지방과 스트랩 근육을 제거합니다. </li><li> 식도, 신경, 동맥, 그리고 결합 조직과 같은 모든 주변 조직에서 기관을 절개하다. </li><li> 전체 기관을 (분기점으로 후두에서)를 제거합니다. </li><li> 감기에 식염수에 이식를 플러시하고 4 그래프트를 저장 ° C. </li><li> 기증자는 기관의 수확 다음과 같은 자궁 전위에 의해 euthanized있다. </li></ol> 받는 사람 : HETEROTOPIC 이식 <ol><li> 절개 사이트 주변에 넓은 여백에 복부 머리를 면도하고 지역에게 알코올 다음 betaisodona (betadine)를 사용하여 세 번 소독. 눈을 밖으로 건조로부터 각막을 방지하기 위해 안과 연고 제품과 윤활해야합니다. </li><li> 중앙 분리대 개복술을 수행하고 살균, moistured 장갑에 소장을 놓으십시오. </li><li> 신중하게 더 큰 omentum을 전파. 중앙에 그래프트를 놓고 8-0을 (Prolene, Ethicon, 독일)를 사용하여 하나의 치료로 흥분시키는. </li><li> 완전 큰 omentum로 이식을 커버하고 하나의 봉합사를 8-0 (Prolene, Ethicon, 독일)와 그래프트를 수정. </li><li> 복부에 다시​​ 창자를 변경하고 폐쇄하기 전에 따뜻한 무균 식염수에 플러시. </li><li> 이 레이어에서 주변 지역 - 피부 근육과 7-0 Vicryl을위한 7-0 Prolene을 사용하여 지속적인 패턴으로 복벽과 피부의 레이어를. </li></ol> 받는 사람 : ORTHOTOPIC 이식 <ol><li> 절개 사이트 주변에 넓은 여백에 복부 머리를 면도하고 지역에게 알코올 다음 betaisodona (betadine)를 사용하여 세 번 소독. 눈을 밖으로 건조로부터 각막을 방지하기 위해 안과 연고 제품과 윤활해야합니다. </li><li> 전체 laryngotracheal 복잡한 시각화하기 위해 스트랩 근육을 나눕니다. </li><li> 신중하게, 주변 조직에서 기관을 절개하다 회귀 후두 신경을 보존하는데주의를 기울여야. </li><li> 반지의 꼬리기도 세 개의 반지를 나누십시오. 동물 tracheostomy를 통해 physiologic 호흡을 유지한다. </li><li> 받는 사람뿐만 아니라 이식에 tracheal 가장자리 청소를 보장합니다. </li><li> 이식은받는 tracheal 결함 및 해부 극성을 유지하기 위해 지향 사이 interposed입니다. </li><li> anastomose 말초 (mediastinal) 기관과 기증자의 수술이 (Prolene, Ethicon, 독일) 8-0를 사용. 문합의 후부 측면은 지속적으로 실행하는 방식으로 수행됩니다. 앞쪽에 나서 중단 바늘을 사용하여 완료됩니다. </li><li> 기도로부터 분비물을 제거합니다. </li><li> 근위 문합은 다음 말초 것과 같은 방식으로 완료됩니다. </li><li> 기도와 적절한, 자발적인 호흡의 무결성을 보장합니다. </li><li> 스트랩 근육을 재배치하고 피하 조직과 지속적인 패턴으로 6-0 봉합을 (Vicryl, Ethicon, 독일)를 사용하여 피부의 레이어를 닫습니다. </li><li> 따라서 동물이 호흡 관을 통해 생리 호흡 유지되며,받는 사람에 대한 사출 마취를 사용합니다. 75/1/0.2 MG / propofol, medetomidine 각각 펜타 닐의 kg의 조합은 생쥐에서 IP 마취에 사용됩니다. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/1437/1437Fig1.jpg" alt="그림 1" /> 그림 1 : 기증자 기관. 1A : 준비 후 현장에서 기증자 기관. 1B : Excised 공여 기관. 1C : explantation 후 기증자 기관. <img src="/files/ftp_upload/1437/1437Fig2.jpg" alt="그림 2" /> 그림 2 : Heterotopic 모델입니다. 2A : 이식은 큰 omentum의 중앙에 위치합니다. 2B : 이식이 단일 봉합과 함께 양쪽에 고정됩니다. 2C : 이식이 큰 omentum로 포장해서 하나의 봉합사로 고정됩니다. <img src="/files/ftp_upload/1437/1437Fig3.jpg" alt="그림 3" /> 그림 3 : Orthotopic 모델입니다. 3A : 이식이받는 tracheal 결함과 후부 벽 사이 interposed는 것은 지속적인 실행 방식에 anastomosed 있습니다. 3B : 앞쪽에 벽은 하나의 봉합사를 사용하여 완료됩니다. <img src="/files/ftp_upload/1437/1437Fig4.jpg" alt="그림 4" /> 그림 4 : 조직학. 4A : H + E 역 28 일 후에 복구된 heterotopic 이식 기관ining (15x). 100 % luminal 말살을합니다. 4B : H에서 60 일 후에 orthotopic 이식 기관을 복구된 + E 염색법 (15x). 최대한 달성 luminal 말살은 대략 45 %입니다. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Heterotopic Tracheal 이식 모델 </td><td> Orthotopic Tracheal 이식 모델 </td></tr><tr><td> 장점 </td><td> 수행할 + 쉬운 28일 후 완전한기도 폐색과 + Luminal 말살 OAD로 동물 + 대한 신체적 애정도 </td><td> 이식편의 + 물리적 환기 가능 + 코로도 약물 관리 이러한 alloreactive IgM 항체 생산 등 + 강한 면역 반응 + 생리 흉부 환경 + Tracheal - tracheal 문합은 임상 설정을 imitates </td></tr><tr><td> 단점 </td><td> - 이식 기관의 팬도 없다 - 흡입 병원균의 없음 평가 가능 - mucociliary 통관 및 보관 분비물의 억제 - 복막 microenvironment 대신 흉부 환경 </td><td> - 필요 외과 훈련 - luminal 폐색 애플 리케이션과 함께 Luminal 말살. 60일 후 45% - 동물 OAD의 증상을 개발할 수 있습니다 </td></tr></tbody></table> 표 1 : Heterotopic 및 Orthotopic Tracheal 이식의 장점과 단점.

<ol><li>Adams, B., Berry, G., Huang, X., Shorthouse, R., Brazelton, T., Morris, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunosuppressive+therapies+for+the+prevention+and+treatment+of+obliterative+airway+disease+in+heterotopic+rat+trachea+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Immunosuppressive therapies for the prevention and treatment of obliterative airway disease in heterotopic rat trachea allografts.</a> Transplantation. 69, 2260-2266 Forthcoming.</li>
<li>Adams, B., Brazelton, T., Berry, G., Morris, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+respiratory+epithelium+in+a+rat+model+of+obliterative+airway+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">The role of respiratory epithelium in a rat model of obliterative airway disease.</a> Transplantation. 69, 661-665 Forthcoming.</li>
<li>Deuse, T., Schrepfer, S., Reichenspurner, H., Hoyt, G., Fischbein, M., Robbins, R., Pelletier, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+for+experimental+heterotopic+and+orthotopic+tracheal+transplantations+%26%23x2013%3B+when+to+use+which+model%3B+Transplant+Immunology+17%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Techniques for experimental heterotopic and orthotopic tracheal transplantations &#x2013; when to use which model; Transplant Immunology 17.</a> , 255-261 (2007).</li>
<li>Hele, D., Yacoub, M., Belvisi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+heterotopic+tracheal+allograft+as+an+animal+model+of+obliterative+bronchiolitis%5BTitle%5D)+AND+%22Respiratory+Research%22%5BJournal%5D)">The heterotopic tracheal allograft as an animal model of obliterative bronchiolitis.</a> Respiratory Research. 2, 169-183 Forthcoming.</li>
<li>Hertz, M., Jessurun, J., King, M., Savic, S., Murray, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reproduction+of+the+obliterative+bronchiolitis+lesion+after+heterotopic+transplantation+of+mouse+airways%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Reproduction of the obliterative bronchiolitis lesion after heterotopic transplantation of mouse airways.</a> American Journal of Pathology. 142, (1993).</li>
<li>McDyer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+and+murine+obliterative+bronchiolitis+in+transplant%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+American+Thoracic+Society%22%5BJournal%5D)">Human and murine obliterative bronchiolitis in transplant.</a> Proceedings of the American Thoracic Society. 4, 37-43 Forthcoming.</li>
<li>Schrepfer, S., Deuse, T., Hoyt, G., Sheikh, A., Hoffmann, J., Reichenspurner, H., Robbins, R., Pelletier, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+orthotopic+tracheal+transplantation%3A+the+stanford+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Experimental orthotopic tracheal transplantation: the stanford technique.</a> Microsurgery. 27, 187-189 (2007).</li>
</ol>

소냐 Schrepfer는 독일 Forschungsgemeinschaft (DFG) (SCHR992/3-1)에서 연구 부여를 받았습니다.] 모든 동물은 실험실 동물 관리의 원칙을 준수 인간의 치료를받은, 동물 실험에 의해 출판 연구소 동물의 관리 및 사용을위한 의료 연구 및 설명서에 대한 국립 협회가 정한 지침과 규정에 따라 수행되었습니다 보건 국립 연구소 (보건 간행물 85-23 국립 연구소, 1985 개정). 모든 동물은 찰스 리버 연구소 (Sulzfeld, 독일)에서 얻은되었고 대학 병원 함부르크 Eppendorf의 동물 보호 시설에서 유지되었다. 동물 표준 차우와 물 광고 libitum을 받았습니다.

마우스는 다른 transgeneic 및 녹아웃 모델에서 사용할 수 있으며, OAD (4)에 관한 기계론의 질문을 연구하는 것이 적합합니다. 이 동영상에 표시된 tracheal 이식의 두 모델은 OAD 개발 연구에 대한 안정적인 모델로 사용할 수 있습니다. 그러나 각 모델은 장점과 한계를 보여줍니다. heterotopic tracheal 이식은 수행하기 쉬운 특별 외과 훈련 (3, 5) 필요하지 않습니다. heterotopic 이식 후, luminal 말살 빠르고 완전한기도 폐색 (3, 4, 6) 28 일 후에 나타납니다 발생합니다. 자신의 유기체 heterotopic 이식 기관에 의존하지 않기 때문에 동물은 물리적, OAD 개발에 의해 영향을받지 않습니다. 단점은 이식 기관 (7, 6)의 환기​​의 부족이며, 따라서 그것은 흡입 병원균의 영향 (3, 7)을 평가하는 것은...

obliterative 에어웨이 질환의 발전을 연구하는 모델로 사용 마우스의 heterotopic 및 orthotopic tracheal 이식

Heterotopic and Orthotopic Tracheal Transplantation in Mice used as Models to Study the Development of  Obliterative Airway Disease

Obliterative 에어웨이 질병 (OAD)가 장기 생존 (1-7)를 제한 폐 transplantations 후 주요 합병증입니다. pathophysiology을 공부하려면, 설치류에 tracheal 이식의 OAD 다른 동물 모델의 치료 및 예방은 (1-7) 개발되었습니다. 여기, 우리는 기관 이식, heterotopic 및 orthotopic 모델의 두 설립 모델을 사용하고 자신의 장점과 한계를 보여줍니다. 기증자 기관이 orthotopic 모델에서 엔드 - 투 - 엔드 문합에 의해 anastomosed 반면 heterotopic 모델, 기증자 기관은받는 사람의 큰 omentum에 싸여있다. 두 모델, 임상 OAD과 비슷한 histological obliterative 병변의 개발 (1-7) 증명되었습니다. 이 동영상이 모두를 수행하는 방법을 보여줍니다, heterotopic뿐만 아니라 orthotopic tracheal 이식 기법 마우스에서하고 조직학를 사용하여 두 모델 OAD 개발의 시간 코스를 비교합니다.

이 동영상은 쇼, 생쥐의 obliterative기도 질환 (OAD)의 개발, heterotopic 및 orthotopic tracheal 이식 모델을 연구하는 두 실험 모델을 비교합니다.

Obliterative 에어웨이 질환의 발전을 연구하는 모델로 사용 마우스의 Heterotopic 및 Orthotopic Tracheal 이식

폐성 폐쇄성 기도질환(Obliterative airway disease, OAD)은 폐 이식 후 장기 생존을 제한하는 주요 합병증입니다 (1-7).
...를 연구하기 위해

이소성 및 정위 기관 이식은 모두 이소성 이식을 위한 공여 기관의 적출부터 시작됩니다. 수 recipient의 복부를 절개하고 장을 글로브 위에 올려놓습니다. 정위 이식을 위해 공여 기관을 대망의 중앙에 배치하고 두 군데를 봉합하여 고정합니다.수혜자의 경부 절개를 수행한 후, 기관 주변 조직을 제거하고 절단합니다. 그다음 공여자의 기관을 수혜자 기관의 양 끝단 사이에 삽입하고, 두 기관을 서로 봉합합니다. 안녕하세요, Sonya Refa입니다.저는 함부르크 대학 심장 센터 심혈관 외과 교실에서 면역학 및 심장 외과 교수로 재직 중입니다. 제 연구실은 이식 면역학과 줄기세포 면역생물학에 중점을 두고 연구하고 있습니다. 오늘은 Moon Auto 주제와 이곳의 twig 이식 모델에 대해 소개해 드리겠습니다.안녕하세요, TSI 연구실의 캐리 완(Carrie Wan)입니다. 저희는 폐쇄성 기도 질환의 발생 기전을 연구하기 위해 동종 및 이종 기관 이식 마우스 모델을 사용하고 있습니다. 저는 스탠퍼드 대학교의 학생이자 Drer 교수님의 TSI 연구실 여름 펠로우로 활동하고 있습니다.이제 시작하겠습니다. 이 절차를 시작하기 전, 경추 부위의 털을 깎고 beta isod를 사용하여 해당 부위를 소독하십시오. 발가락 꼬집기 반사가 없는 것을 확인하여 공여 마우스가 완전히 마취되었는지 확인하십시오.현미경 시야 하에서 후두 수준부터 흉골까지 정중 경부 절개를 실시합니다. 기관을 명확하게 관찰하기 위해 피하 지방과 흉쇄유돌근 및 흉골설골근 등의 띠근육(strap muscles)을 제거합니다. 식도, 신경, 동맥 및 결합 조직과 같은 주변 조직으로부터 기관을 박리합니다.후두에서 분기점까지의 기관 전체를 제거합니다. 이식용 기관을 차가운 식염수로 세척하고 이식편을 4°C에서 보관합니다. 마취된 수혜 마우스의 발가락 꼬집기 반사가 없는 것을 확인한 후, 절개 부위 주변을 넓게 제모하고 해당 부위를 소독합니다.beta is Sedona와 알코올을 사용합니다. 정중선 복강 절개술을 시행하고 장을 습윤 장갑에 넣습니다. 대망을 펼칩니다.이식편을 중심부에 조심스럽게 배치하고 8-0 prolene 봉합사 두 개로 고정합니다. 대망으로 이식편을 완전히 덮고 8-0 prolene 봉합사 하나로 이식편을 고정합니다. 장을 다시 복강 내로 되돌려 놓습니다.7-0 proline 봉합사를 이용한 연속 봉합법으로 복벽과 피부층의 두 층으로 절개 부위를 폐쇄합

heterotopic-orthotopic-tracheal-transplantation-mice-used-as-models

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

Obliterative bronchiolitis는 폐 이식받는 사람의 장기 생존의 열쇠 장애와 강력한 잠복기 모델의 부족이다 obliterative bronchiolitis의 immunopathogenesis를 검토 걸로. 다른 고형 장기 이식과는 달리, vascularized 마우스 폐 이식이있다는 최근에 개발되었습니다. 여기 murine orthotopic 단일 폐 이식 후 당사 독자 개발한 obliterative bronchiolitis 모델을 보여줍니다.

Orthotopic 폐 이식의 Murine 모델에 Obliterative Bronchiolitis의 개발

우리는 2.0 mm 검경과 이경을 사용하여 직접 후두경을 통해 마우스에서 기관 내 삽관을위한 간단하고 신뢰할 수있는, 그리고 상대적으로 저렴한 방법을 개발했습니다. 이 기술은 atraumatic이고 만성 실험에서 반복 측정에 사용될 수있다. 우리는 우수한 기관 절개 또는 이전에 비수술 적 방법을보고 찾을 수 있습니다.

마우스의 기관 내 삽관<em&gt;를 통해</em이경 사용&gt; 직접 후두경

인간 폐 질환의 상태를 본뜬 모델의 사용은 특정 질환의 병태 생리학 및 / 또는 병인을 연구 및 치료 적 개입을 개발에 중요하다. 여기에 직접 마우스의 폐에 외인성 물질을 제공 할 수있는 비 침습적 인 기관 내 삽관 방법이 제시된다.

비 침습적 기관 내 삽관 마우스 폐의 병리학 및 생리학을 연구하는

고형 장기 및 혈관 복합 동종 이식을 결합하기 위해 경추 비봉합 커프 기술을 사용하여 마우스에서 새로운 이종성 흉벽, 흉선 및 심장 이식 모델을 설명합니다.

마우스의 소설 미세 수술 이소성 모델, 욕실 공산권 가슴 벽, 흉선, 및 심장 이식

이 문서에서는 삽관을 통해 마우스 기관에 직접 블레오 마이신 관리를위한 신속하고 간단한 방법을 제공합니다. 이러한 방법의 주요 장점은 마스터 높은 재현성 쉽고, 특수 장비 나 긴 회복 시간을 요구하지 않는다는 점이다.

마우스의기도 신속 삽관 용 개선 된 방법

이식 협 조직 설계 기도 교체에서 중요 한 장애물을 포즈. 협 기본 셀룰러 메커니즘을 조사, 우리 시드 골 단 세포 (BM-MNC)와 조직 설계 tracheal 교체의 murine 모델을 활용 합니다. 여기, 우리가 우리의 프로토콜을 비 계 제조, BM MNC 절연, 이식 시드, 및 주입을 포함 하 여 선발.

시드 및 마우스 모델에서 생 합성 조직 설계 Tracheal 이식의 이식

선천성 횡격막 탈장 및 태아 기관 폐색의 다양한 동물 모델은 윤리적 문제, 비용, 수술 어려움, 크기, 생존율 및 유전 도구의 가용성에 관한 장점과 단점을 제시합니다. 이 모델은 기관 폐색과 폐 발달에 대한 증가된 발광 압력의 영향을 연구하는 새로운 도구를 제공합니다.

쥐의 트랜스테린 태아 기관 폐색 모델

이 원고의 목적은 마우스에서 이종 후두 이식을 수행하는 데 필요한 미세 수술 단계를 설명하는 것입니다. 후두 이식의 다른 동물 모델과 비교하여이 마우스 모델의 장점은 비용 효율성과 면역 학적 분석 및 데이터의 가용성입니다.

후두 이식 연구를 위한 이종 마우스 모델

쥐 폐내 기관 이식(IPTT) 모델은 폐 이식 후 폐쇄성 기도 질환(OAD)을 연구하는 데 유용합니다. 높은 재현성으로 동종 이식 후 기도 소멸에서 폐 특이적 면역학적 및 혈관 형성 거동에 대한 통찰력을 제공합니다. 여기에서는 IPTT 절차와 예상 결과에 대해 설명합니다.

쥐 폐내 기관 이식: 폐 이식 후 폐쇄성 기도 질환을 조사하기 위한 모델

임의의 점 kinematograms과 컴퓨터 - 생성 무척추 동물의 비디오 재생을 고용 op​​erant 조절 패러다임을 사용하는 도마뱀의 시각적 감도를 테스트.

도마뱀의 운동의 속도와 방향에 시각 민감도 테스트

학습하세요 마우스의 이종 및 정위 기관 이식 모델을 통해 폐쇄성 기도 질환(OAD) 발전 메커니즘을 연구하는 방법을. 수술 기법과 질병 진행 과정을 비교 분석하여 이식 면역학 연구에 활용하세요.

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