Name: 절연 및 마우스 배아 새싹 세포의 유도 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-10-22T14:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 1 s
Description: 배우세요 마우스 배아 생식소에서 원시생식세포를 분리하고 배양하는 방법을. 이 기술은 불임 및 암 연구에 필수적인 생식세포 분화 메커니즘을 이해하는 데 활용됩니다.

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; 박사 루시 센터, 닥터 Brigit Willeford 및 MSU ALAC 공인 마우스 시설에서 교육 및 동물 관리와 지원을위한 마이크 Basett, 박사 드웨인 와이즈 박사 닐 첫번째 원고 편집을위한 Kourtney 윌킨슨 : 저자의 귀중한 도움을 인정하고 싶습니다 세자르 Monroy, 한나 스우프 및 MSU에서 동영상 제작과 함께 자신의 도움 바비 허들 스턴, 현미경 및 이미지 캡처와 함께 자신의 도움을. 이 연구는 미시시피 주립 대학에서 기관 연구 및 생물 과학학과 사무실에서 후원했다.

1 부 : 임산부 마우스 개복술 <ol><li> 자궁 경부 전위를 사용하여, 10.5-11.5 DPC에서 임신 여성 C57BL6J 마우스를 안락사. </li><li> 다음 항균 비누로 복부를 청소하고, 그것을 면도. </li><li> 면도 후, 생리 식염수로 복부를 씻으십시오. </li><li> 그리고, 멸균 거즈로 복부를 건조. </li><li> 새로운 멸균 분야로 마우스를 커버. </li><li> 포셉 및 해부 가위를 사용하여 복부 절개를합니다. </li><li> 식별 및 복강에서 전체 자궁을 제거합니다. 마우스 배아는 자궁 안에 표시됩니다. </li><li> D - PBS로 가득 배양 접시에 자궁을 전송하고, 얼음에 보관하십시오. </li><li> 살균 메스와 집게를 사용하여 태반 및 각 배아의 여분의 배아 조직을 제거합니다. </li><li> D - PBS로 가득 신선한 페트리 접시에 배아를 전송합니다. </li><li> 마우스 배아의 길이를 측정합니다. 우리는 크기가 배아의 연령에 따라 다릅니다 것으로 나타났습니다. 예를 들어 8.5 DPC는 6mm의 평균 측정, 10.5 DPC는 11mm의 평균에서 측정하고, 12.5 DPC는 16 mm의 평균 측정. </li><li> 그런 다음, DNA 추출을 위해 자신의 꼬리를 제거합니다. </li></ol> 2 부 : Gonadal 리지 해부 stereomicroscope 및 광원 쇼트 Fostec 아래 <ol><li> 페트리 접시에 여과지를 놓습니다. 그런 다음, 배아를 건조하고 해부에 대한 고정하기 위해 필터 종이 위에 마우스 배아를 놓습니다. </li><li> 멸균 메스를 사용하여 탯줄의 기원 위에 마우스 배아의 가로 절단합니다. </li><li> stereomicroscope에서 살균 고급 포셉 및 살균 고급 괴롭히고 바늘을 사용하여 비뇨기 시스템이 볼 수 있도록 창자와 간장을 제거하십시오. 신장은 복강에 옆으로 위치하고 있으며, 방광은 신장에 비해 중간과 꼬리에 위치하고 있습니다. gonadal 산등성이가 방광의 양쪽에 위치하고 있기 때문에 배아는 남자로 확인할 수 있습니다. 여성에 gonadal 산등성이는 단단히 신장의 꼬리 끝에 측면에 붙어있다. </li><li> 그 뒤에 바늘을 슬라이딩하여 gonadal 리지 밖으로 껍질. gonadal 봉우리는 그것을 지원하는 조직을 떠나 절단하여 제거됩니다. </li><li> 신선한 D - PBS로 가득한 새로운 배양 접시에 gonadal 능선을 전송합니다. 미세, 남성 gonadal 능선은 크고 모양 타원형 송두리째해야합니다. 반면, 여성 gonadal 능선을 발견해야 길쭉한 모양을하고 남성 gonadal 능선에 비해 작은 수 있습니다. </li></ol> 파트 3 : Gonadal 리지 소화 아래 stereomicroscope : <ol><li> Mesonephros의 해부 : 좋은과 날카로운 바늘을 사용하여 mesonephros과 능선에서 분리 생식선. <ul><li> 그것은 PGC의 유도 과정에서 자라다하는 체세포 조직이기 때문에 gonadal 산등성이에서 mesonephros을 제거하는 것이 중요합니다. </li></ul></li><li> Gonadal 리지 소화 : 신선한 D - PBS의 0.5ul 드롭 깨끗한 gonadal 산등성이를 수집합니다. Collagenase / Dispase 솔루션 20 ML (1mg/ml 최종 농도)를 추가합니다. <ul><li> 배아는 개별적으로 처리되어야합니다. 각각의 배아 자체 별도의 표시 페트리 접시가 있어야합니다. </li></ul></li><li> 리지가 민싱 Gonadal : 살균 멸균 바늘과 좋은 포셉 제 4를 사용하여 작은 조각으로 gonadal 리지 컷. </li><li> 배양 : 배양 접시가 37 인큐베이터으로 전송됩니다 ° C 15 분. <ul><li> 배양 시간은 조직간에 다를 수 있습니다. </li></ul></li><li> Pipetting : 15 분 후, 조직 pipetting하여 dissociated 수 있습니다. 40 -100 mm 사이의 직경과 함께 뽑아 유리 모세관 pipettes를 사용하면하고 아래로 pipetting하여 작품을 브레이크. 이것은 작은 대단히 짧은 시간을 형성합니다. 최종 세척을 위해 미리 예열 D - PBS 드롭의 0.5ml에 대단히 짧은 시간을 전송합니다. </li><li> 세척 후, eppendorf 튜브에 대단히 짧은 시간을 전송하기만하면됩니다. <ul><li> 이상 collagenase로 조직을 노출시키지 마십시오. </li><li> 단일 세포 현탁액을하지 마십시오. 이것은 식민지 형성에 중요합니다. 그것이 하나의 세포 현탁액 경우, PGCs는 차별과 마이 그 레이션하는 경향이 있습니다. </li><li> 이 과정은 20 분 이상하지 않아야, 또는 세포 생존을 잃게됩니다. </li></ul></li><li> 실온에서 5 분간 2000 rpm으로 원심 분리기. </li><li> centrifuging 후, 뜨는을 제거하고, 미디어 밖으로 보충 노크 (37 ° C에서 미리 예열)의 0.5 ML의 펠렛을 resuspend. </li></ol> 4 부 : 원시 종자 세포 문화 "당신은 격리와 유도를위한 PGCs의 생존을 유지하기 위해 신속하게 다음 단계를 수행합니다. <ol><li> 24시간이 과정을하기 전에 장 J. 외 2008 프로토콜에 따라 mitotically inactivated MEF - CF1 피더 레이어를 준비한다. <ul><li> 한 pregna 20 요리를 준비NT 여성 마우스 (6-8 배아). </li><li> MEFs은 5-6 구절 후 (성장을 도모하고 차별을 방지) 피더 레이어 수있는 능력을 잃게됩니다. </li><li> 48시간보다 오래된 MEFs를 사용하지 마십시오. </li></ul></li><li> 즉시 도금 PGCs 전에 MEF 매체는 서서히 MEF 피더 레이어에서 제거되어야합니다. </li><li> 그렇다면, 0.5 ML / 음의 MEF 피더 계층에 미리 예열 보충 녹아웃 매체를 추가합니다. <ul><li> MEF 미디어 PGCs의 차별을 유도 태아 소 혈청이 포함되어 있습니다. </li><li> 마네 매체가 정화 특정 성장 요인과 함께 보충해야하는 것은 바로 전에 성장 인자의 활동을 보장하기 위해 사용합니다. </li></ul></li><li> MEF 피더 층 이상의 대칭 유통, 판 PGCs을 사용합니다. <ul><li> 이 조각이 너무 가까이있다면, 그들은 집계하는 경향과 저조한 첨부하거나 차별 시작 밀도 식민지합니다. </li><li> 문화 요리는 배아 본원 세포주 이름, 통로 번호 및 날짜와 함께 표시해야합니다. </li></ul></li><li> 신중하게, 37 ° C와 5% CO 2 배양기에 문화 요리를 전송할 수 있습니다. </li><li> 세포마다 24 시간 모니터링합니다. </li><li> 48 시간 후, 식민지의 첨부 파일을 방해하지 않도록하기 위해 문화의 맨에서 미디어 250 ML를 제거합니다. 그런 다음, 신선한 보충 노크 아웃 미디어 250 ML (37 ° C에서 미리 예열)을 추가합니다. </li><li> 7 단계 후, 또 다른 48 시간을 기다린 후, 완전히 모든 미디어를 제거하고 신선한 노크 아웃 보충 미디어 (37 ° C에서 미리 예열)로 바꾸십시오. PGC 식민지 양식까지 80~10일이 이일 모든 마십시오. </li></ol> 제 5 부 : 본원 배아 세포 <ol><li> PGC 절연 10 일 후, 본원 배아 세포 식민지가 형성됩니다. </li><li> 태아의 새싹 세포 라인 수동 구절마다 80-10일에 의해 생명을 유지하고 있습니다. 그들은 undifferentiated 형태를 제시하고 같은 alkalyne 인산 가수 분해 효소, 10 - 4, SSEA - 1, 및 SOX - 2로 pluripotency 마커를 표현하기 위해 계속 </li></ol> 노트 <ul><li> 멸균 / 무균 조건은 문화 실에 필수적입니다. </li><li> 파생 문화, PGCs는 정수기 클래스 II 바이오 안전 내각에 처리됩니다. </li><li> Incubations가 humidified 37 아르 ° C와 5% CO 2 배양기. </li><li> 모든 미디어 및 시약 4에 저장된 음 0.2 필터 ° C에서 사용하기 전에 필터링하고, 사용하기 전에 ° C 37 미리 예열하고 있습니다. </li><li> 해부 단계 동안, 모든 배아와 조직은 얼음에 보관해야합니다. </li><li> 모든 시약의 flasks는 캐비닛에 배치하기 전에 에탄올로 소독하고 있습니다. </li><li> 장갑, 연구실 코트, 그리고 간호사 모자의 사용은 필수입니다. </li></ul> 결론 우리는 당신이 분리하는 방법을 보여줍니다 비디오, 파생 및 10.5-11.5 DPC 마우스 배아의 gonadal 산등성이에서 문화 배아 새싹 세포를 제공하고 있습니다. 배아 새싹 세포 라인의 재현성 분리 및 장기 문화가 초기 배아 발달, 유전 및 epigenetic 본원 패턴, 생식선 형성의 연구를위한 중요한 기반을 제공, 남자와 여자 태아에 gametogenesis의 발달 과정에서 주변 장기의 환경적 영향, 그리고 암, 불임로 연결 통로의 결정. <img src="/files/ftp_upload/1635/1635figure1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1">

<ol><li>DeFelici, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDeFelici%2C+M+%22Cell+Biology%3A+A+laboratory+Handbook%22">Cell Biology: A laboratory Handbook</a>. 1, Second Edition, 73-85 (1998).</li>
<li>Donovan, P. J., De Miguel, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Turning+Germ+Cells+into+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Genetics+and+Development%22%5BJournal%5D)">Turning Germ Cells into Stem Cells.</a> Current Opinion in Genetics and Development. 13, 463-471 (2003).</li>
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</ol>

미시시피 주립 대학에서이 연구 검토 및 기관 애니멀 케어 및 마우스 프로토콜 # 08030 (프로토콜을 개최하고 사육 반응 산소 세균 라인 개발 및 종양 형성에 종 - ROS의 역할)의 이용위원회 (IACUC) 승인 후 실시했다.

포셉 제 14, 15, 메스 35mm, 해부 가위, 외과 분야, 항균 비누, 생리 식염수 0.9 %, 거즈, 얼음 폼 컨테이너, 면도날, 메스 35mm, 괜찮아요 포셉 제 4, 5, 괜찮아요 올린 바늘로 핸들, 종이 시트를 필터링하고, 유리 pipettes를 추출.<br /<br /&gt; 장비 : 해부 stereomicroscope, 광원 쇼트 Fostec, 거꾸로 현미경, micropipette 10 200ul, 원심 분리기, 바이오 안전 내각.

절연 및 마우스 배아 새싹 세포의 유도

Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

배아 새싹 세포의 기능 (예) 암, 불임에 관한 우리의 가설을 해결하기 위해 완벽한 모델​​입니다 초기 발달 단계 동안 원시 종자 세포 (PGCs)로 나중에 gametes로 구별합니다. 이 프로토콜은 10.5-11.5 일 게시물 coitum (DPC) 마우스 배아의 개발 생식선에서 원시 종자 세포를 분리하는 방법을 보여줍니다. 마우스 배아에서 gonadal 능선을 개발 (C57BL6J) 다음 이전 mitotically 녹아웃 미디어의 존재에있는 mitomycin C와 inactivated과 백혈병 억제제로 보충되었다 마우스 배아 fibroblast 공급기 층 (MEF - CF1)에 도금 collagenase와 기계 파괴에 의해 dissociated되었습니다 팩터 (난생), 기본 Fibroblast의 성장 인자 (bFGF), 그리고 줄기 세포 계수 (SCF). 문화 조건 PCG 식별, 격리 및 설립을위한 이러한 최적화 방법을 사용하면 40 개 이상의 일간 EG 세포의 장기적인 문화를 수 있습니다. 태아의 새싹 세포 라인은 pluripotent 국가의 일반적인 사용 마커의 배아 표현형과 표현을 보여주었다. 분리 및 문화에 새싹 세포의 유도는 체외에서 개발을 이해하고 산화 스트레스에 노출 후 유전 및 epigenetic 수준에서 누적 손상을 모니터링하는 기회를 제공하는 도구를 제공합니다.

초기 개발 단계 동안 원시 종자 세포로 차별화하는 배아 새싹 세포의 능력은 암, 불임에 관한 우리의 가설을 해결하기 위해 완벽한 모델​​입니다. 이 프로토콜은 10.5-11.5 일 게시 coitum 마우스 배아의 개발 생식선에서 원시 종자 세포를 분리하는 방법을 보여줍니다.

초기 발달 과정 동안 배아 생식세포(EG)가 원시 생식세포(PGCs)로, 이후에는 생식세포로 분화하는 능력은...

안녕하세요, 미시시피 주립 대학교 재생 유전학 및 줄기세포 연구소의 Har Moreno입니다. 안녕하세요, 미시시피 주립 대학교 재생 유전학 및 줄기세포 연구소의 Clara St.입니다. 원시 생식세포(PGC)는 각각 난소의 난모세포와 정소의 정모세포의 전구 세포입니다.생쥐 배아에서 PGC는 8.5일에서 9.5일 사이에 후장(hindgut)으로부터 이동하여 생식능선을 가로지릅니다. 이후 PGC는 10.5일에서 11.5일 사이에 생식능선에 도달합니다.원시생식세포(PGCs)가 이동하여 암컷에서는 생식샘 ridge를 형성하기 시작합니다. PGCs는 신장의 외측 끝으로 이동하여 암컷 생식샘 ridge를 형성하기 시작합니다. 반면, 수컷의 경우 PGCs는 방광의 양측으로 이동합니다.이제 시작하겠습니다. 수컷 알리지(alridge) 생식세포는 불임 및 암의 원인인 산화적 스트레스 환경에서의 생식세포 발달 경로를 연구하는 데 매우 훌륭한 연구 모델입니다. 그럼 시작하겠습니다.오늘은 Postum 마우스 배아의 10.5일에서 11.5일 된 발달 중인 생식능선에서 PV Cs를 수집하고 분리하는 방법을 보여드리겠습니다. 생식능선은 기계적 파쇄를 통해 해리되어 마우스 배아 섬유아세포 층 위에 식립됩니다. 최적화된 조건에서 10일 동안 배양하면, 배아 생식세포 콜로니가 배아 표현형을 나타내게 됩니다. 또한, 계대 배양 후에는 다분화능 마커의 발현을 통해 이를 확인할 수 있습니다.무균 해부를 위한 이 단계에는 다음 재료들이 필요합니다. 멸균 구역, 포셉, 가위, 면도날, 항균 비누, 식염수, 얼음 위에 PBS Pep을 채운 페트리 접시 및 거즈가 포함된 패키지가 필요합니다. 임신 10.5~11일 차의 BL6 암컷 마우스를 경추 탈골법으로 안락사시킵니다. 항균 비누로 복부를 세척한 후, 털을 제모합니다.식염수를 사용하여 복부를 세척합니다. 멸균 거즈로 물기를 제거합니다. 마우스를 새로운 멸균 포로 덮습니다.포셉과 가위를 사용하여 복부 절개를 수행하고 해부합니다. 복강에서 자궁 전체를 확인하여 제거합니다. 자궁 내부에서 배아를 확인할 수 있습니다.매우 주의 깊게 진행하십시오. 자궁각에 여전히 부착되어 있는 인대들을 통해 통과시킵니다. 질을 따라 가로로 절단하여 해부를 완료합니다.GPVS가 담긴 페트리 접시에 자궁을 옮기고 얼음 위에 보관하십시오. 멸균된 메스와 핀셋을 사용하여 배아와 배외 조직을 분리하십시오.입 부위 배아를 DPBS가 채워진 새로운 페트리 접시로 옮깁니다. 입 부위 배아의 길이를 측정합니다. 배아의 연령에 따라 크기가 다른 것을 확인하였습니다.예를 들어, coum 후 8.5일에는 평균 6 mm, coum 후 10.5일에는 평균 11 mm, coum 후 12.5일에는 평균 16 mm로 측정되었습니다. DNA 추출을 위해 꼬리를 제거합니다. 해부를 위해 실체 현미경, 생물안전작업대, PDS, 멸균 메스 등의 재료가 필요합니다.멸균된 미세 핀셋, 핸들이 달린 멸균 미세 티징 니들, 페트리 접시, 거름종이 시트. 페트리 접시에 거름종이를 깔고, 그 위에 입기 배아를 올려 배아의 수분을 제거하고 해부를 위해 고정시킵니다. 멸균된 메스를 사용하여 입체 현미경 하에서 탯줄의 기원부 윗부분의 입기 배아를 횡단 절개합니다.멸균된 미세 핀셋과 멸균된 미세 해부침을 사용하여 비뇨기계가 보일 수 있도록 장과 간을 제거합니다. 방광은 내측면에 위치해 있습니다.생식 능선이 방광의 양측에 위치하므로 배아를 수컷으로 식별할 수 있습니다. 멸균된 미세 핀셋과 멸균된 미세 바늘을 사용하여, 지지 조직을 절단하여 오른쪽 수컷 생식 능선을 제거합니다. 동일한 절차를 사용하여 왼쪽 수컷 생식 능선을 제거합니다.현미경으로 관찰하며 두 수컷 생식능선을 신선한 DPDS가 담긴 작은 페트리 접시에 옮깁니다. 수컷 생식능선이 중신장관(mesonephric duct)에 부착되어 있는 것을 확인할 수 있습니다. 입체 현미경 하에서 수컷 생식능선은 줄무늬가 있는 크고 타원형인 모양으로 보여야 합니다.멸균된 미세 핀셋과 멸균된 미세 해부용 바늘을 사용하여 장을 제거합니다. 신장은 복강의 외측에 위치하며, 방광은 신장에 비해 더 내측 및 미측에 위치합니다. 암컷의 생식샘 능선은 형태와 해부학적 위치가 수컷의 생식샘 능선과 다릅니다.암컷 생식선 융기는 신장의 꼬리 쪽 외측 말단에 단단히 부착되어 있습니다. 멸균된 미세 핀셋과 멸균된 미세 바늘을 사용하여, 생식선 융기를 신장에 부착시키고 있는 조직을 절개하여 왼쪽 암컷 생식선 융기를 제거합니다.동일한 절차를 반복하여 오른쪽 암컷 생식선 능선을 제거합니다. 두 암컷 생식선 능선을 신선한 PDS가 들어 있는 작은 페트리 접시로 현미경 하에서 옮깁니다. Neso Nera에 부착된 수컷 생식선 능선을 시각화할 수 있습니다.멸균된 가늘고 날카로운 바늘을 사용하여, 암컷 성선 능선(gonadal ridge)이 수컷 성선 능선에 비해 길쭉한 형태이며 크기가 더 작음을 확인해야 합니다. 멸균된 가늘고 날카로운 바늘을 사용하여 중신경 및 기타 체성 조직으로부터 암컷 성선 능선을 분리하십시오. 중신경 및 기타 체성 조직으로부터 수컷 성선 능선을 분리하십시오.PGC 유도 과정에서 과성장할 수 있는 체세포 조직이므로, 생식 능선(gonad ridge)에서 중신경(meso Neros)을 제거하는 것이 중요합니다. 콜라게나제 소화액이 포함된 신선한 DPVS 0.5 µL 방울 내에 생식 능선을 수집합니다. 실체 현미경 하에서, 멸균된 가늘고 날카로운 바늘을 사용하여 생식선 조직을 작은 조각으로 절단합니다.페트리 접시를 37 °C의 인큐베이터로 옮겨 15분 동안 배양합니다. 15분 후, 40에서 100 µm 사이의 다양한 직경을 가진 풀드 글라스 모세관 피펫을 사용하여 피펫팅함으로써 조직을 해리할 수 있습니다. 피펫팅을 반복하여 조직 조각들을 분쇄합니다.이렇게 하면 작은 덩어리가 형성됩니다. 세척 후, 이 작은 덩어리들을 0.5 µL의 DPDX로 세척합니다. 그 후 2000 RPM에서 5분 동안 Eend 큐브로 옮깁니다.원심 분리 후 상온에서 상층액을 제거하고, 37 °C에서 24시간 동안 가온한 보충된 knockout 배지 0.5 mL로 펠릿을 현탁합니다. 이 과정에 앞서, PGC를 플레이팅하기 직전에 마이토신으로 불활성화된 생쥐 배아 섬유아세포(MEF) CCF1 피더 층을 준비해야 합니다. 준비된 MEF 피더 층에서 배지를 제거해야 합니다.그 다음, 37°C에서 미리 가온한 보충된 knockout 배지 수 mL를 meth 피더 층 위에 첨가합니다. 실체 현미경 하에서 대칭적으로 분포하도록 하여, 소량의 PT GC 펌프를 meth 피더 층 위에 도말합니다. 이 조각들이 서로 가까우면 응집되어 밀집된 콜로니를 형성하는 경향이 있으며, 이는 부착력이 떨어지거나 분화 배양이 시작될 수 있습니다.배양 접시에는 배아 생식세포주 이름, 계대 배수 및 날짜를 표시해야 합니다. 분리 후 10일이 지나면 배양 접시를 37°C, 5% CO₂ 조건의 인큐베이터로 조심스럽게 옮기십시오. 이때 특유의 형태학적 특징을 바탕으로 배아 생식세포 콜로니를 식별할 수 있습니다. 또한, 첫 번째 계대 배양 후에는 alkaline phosphatase, OCT4, SSEA-1 및 SSEA-3와 같은 다능성 마커의 발현을 통해 이를 식별할 수 있습니다.오늘은 10.5~11.5일령 생후 마우스의 PGC로부터 배아 생식세포를 분리 및 배양하는 방법을 살펴보겠습니다. GA 줄기세포의 전구체로서 배아 생식세포의 특성을 분석하는 것은 생식세포 형성, 가임력 및 암과 관련된 연구에 필수적입니다.영상을 시청해 주셔서 감사합니다. 귀하의 실험에 좋은 결과가 있기를 바랍니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 비디오는 마우스 배아의 배측 뇌파에서 1차 대뇌 피질 세포를 분리하고 배양하는 프로토콜을 보여줍니다.

Isolation and Culturing of Cells from Mouse Embryo Dorsolateral Telencephalons(쥐 배아에서 세포 분리 및 배양)

최근 몇 년 동안 체외 배양 방법에서 사용하는 생식 세포의 형성은 체세포 줄기 세포의 여러 가지 유형을 사용하여 증명되었습니다. 이 문서에서는 시각적으로 초기 난 모세포 - 유사 세포로 신생아 마우스 유래 줄기 세포의 분화를 발표 할 예정이다.

세균과 같은 세포로 신생아 마우스 피부 유래 줄기 세포의 분화<em&gt; 체외</em

우리는 축 발달과 병행하여 자기 조직화, 대칭 파괴 및 신장을 표시하는 마우스 배아 줄기 세포의 응집체를 생성하는 프로토콜을 개발했습니다. 이 기술을 사용하면 축 방향 발달 과정과 단층 배양에서 수행하기 어려운 세포 유형의 생성을 연구할 수 있습니다.

마우스 배아 줄기 세포의 집계의 세대 대칭 속보, 양극화 및 응급 집단 행동은보기가<em&gt; 체외</em

이 프로토콜은 마우스 착상 전 배아 계통 명세서를 연구하는 단백질 발현의 정량적 분석 시츄, 단일 셀을 수행하는 방법을 제시한다. 포배의 수집에 필요한 절차, 단백질의 면역 검출을 전체 마운트, 공 초점 현미경, 핵 세분화 및 이미지 분석에 샘플 영상은 설명한다.

단백질 발현의 정량 분석​​은 마우스 착상 전의 배아에서 리니지 사양을 공부하기

조혈 줄기 및 전구 세포 (HSPC)는 아직 작은 일부 내피 세포는 혈액이 형성되기 위해 지정하는 과정에 대해 알려진, 개발 과정에서 전문 (hemogenic) 내피 세포에서 파생. 우리는 뮤린 배아 조직으로부터 hemogenic 내피 세포 HSPC 동시에 아이솔레이션을 허용하는 유동 세포 계측법 기반 방법을 보여준다.

쥐 배아 Hemogenic 내피 세포의 분리

여기에 설명된 프로토콜은 최소 전사 인자 세트의 과발현을 통해 마우스 배아 섬유아세포에서 혈액 프로그램의 유도를 자세히 설명합니다. 이 기술은 조혈, 혈액 질환 및 조혈 줄기 세포 이식에 대한 향후 연구를 위한 플랫폼을 제공하기 위해 인간 시스템으로 변환될 수 있습니다.

전사 인자와 마우스 배아 섬유 아 세포를 재 프로그램하는 것은 Hemogenic 프로그램을 유도하는

이 문서는 효율적으로 파생 하 고 만능 마우스 배아 줄기 세포 라인 blastocyst 단계에서 문화 프로토콜을 설명 합니다.

마우스 Preimplantation 배아에서 줄기 세포 라인의

여기, 전자13 마우스 배아 절 예 하에서 신경 줄기 세포의 분리에 대 한 새로운 microsurgical 기술을 소개합니다.

절연 및 마우스 배아 신경 줄기 세포의 문화

여기서 우리는 성인 마우스 고환에서 살아있는 메이오틱 및 후 메이오성 세균 세포를 격리하는 간단하고 효율적인 방법을 제시합니다. 낮은 세포 독성, 보라색 흥분 DNA 결합 염료 및 형광 활성화 세포 분류를 사용 하 여, 하나는 많은 다운 스트림 응용 프로그램에 대 한 고도로 농축 된 정자 세포 인구를 격리할 수 있습니다.

보라색 흥분 세포 투과성 DNA 결합 염료를 사용하여 뮤린 정자 세포의 격리

이 문서는 반 복제 배아의 건설을 위한 정액을 대신하기 위하여 parthenogenetic haploid 배아 줄기 세포의 사용을 입증하는 것을 작정입니다.

정자의 대체로 마우스 파르테노유전학 Haploid 배아 줄기 세포의 응용 프로그램

이 논문은 단일 세포 및 핵의 염기서열 분석을 위한 gastrulating mouse embryos의 고품질 single-cell 및 nuclei suspensions를 위한 파이프라인을 설정합니다.

돌연변이 전체 마우스 배아의 단일 세포 RNA 염기서열 분석: epiblast에서 gastrulation 말기까지

배우세요 마우스 배아 생식소에서 원시생식세포를 분리하고 배양하는 방법을. 이 기술은 불임 및 암 연구에 필수적인 생식세포 분화 메커니즘을 이해하는 데 활용됩니다.

절연 및 마우스 배아 새싹 세포의 유도

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