소뇌 운동 실조증의 마우스 모델을 평가하기위한 간단한 복합 표현형 점수 시스템

우리는 질병의 중증도와 진행을 평가하기 위한 복합 표현형 점수 시스템을 개발했습니다. 소뇌 운동실조증의 마우스 모델에서는 선반 테스트, 뒷다리, 걸음걸이, 후만증의 4가지 테스트를 수행하며, 각 테스트에 대해 0에서 3까지의 척도를 사용하여 0에서 12까지의 점수를 합산합니다. 네 가지 측정 모두에 대해 선반 테스트는 조정을 직접 측정하기 위해 수행되었습니다.

뒷다리 움켜쥐기는 신경 퇴행의 여러 마우스 모델에서 질병 진행의 지표입니다. 보행은 협응력과 근육 기능의 척도입니다. 후만증은 경추 흉부 부위의 척추 굴곡으로, 각 검사를 수행하고 점수를 기록하는 운동 시스템 및 척추 소뇌 신경 퇴행의 마우스 모델에서 흔히 볼 수 있습니다.

4개 점수의 평균 합계 또는 평균 복합 표현형 점수가 각 마우스 그룹에 대해 계산되고 플롯됩니다. 이 프로토콜을 다른 마우스 모델에 적용할 때 먼저 개별 테스트의 점수를 분석하여 설명된 4가지 측정값의 이상적인 조합을 결정하는 것이 중요합니다. 이 특정 프로토콜은 영향을 받은 개인과 영향을 받지 않은 개인을 구별하는 동시에 척추 소뇌 운동실조의 마우스 모델에서 질병 표현형의 진행을 정량화하기 위해 고안되었습니다.

7번 유형. 안녕하세요, 저는 워싱턴 대학교 신경학과 그웬 가든 박사 연구실의 스테파니 퍼입니다. 오늘 우리는 소뇌 운동 실조증의 마우스 모델에서 질병 중증도를 평가하는 간단하고 민감한 방법을 보여 드리겠습니다.

우리는 실험실에서 이 절차를 사용하여 척추 소뇌 운동 실조증 7형 또는 SCA 7형의 마우스 모델에서 표현형 차이를 정량화하고 시간이 지남에 따라 SCA 7 표현형의 진행을 추적합니다. 시작하겠습니다. 선반 검사는 소뇌, 운동 실조 및 기타 많은 신경 퇴행성 질환에서 손상된 조정력의 직접적인 측정입니다.

이것은 편향을 방지하기 위해 소뇌 운동 실조의 인간 징후와 가장 직접적으로 비교할 수 있는 것을 측정합니다. 평가를 수행하는 실험자는 동물의 유전자형에 대한 지식이 없어야 합니다. 평가하는 동안 개별 측정은 0에서 3까지의 척도로 점수가 매겨지며, 여기서 0은 표현형의 부재를 나타내고 3은 가장 심각한 징후를 나타냅니다.

케이지에서 마우스를 들어 올려 케이지의 난간에 놓는 것으로 시작합니다. 쥐가 우리 선반을 따라 걷다가 우리 안으로 내려가는 것을 관찰합니다. 야생형 쥐는 균형을 잃지 않고 난간을 따라 걷고 발을 사용하여 우아하게 우리 안으로 다시 내려갑니다.

이 동작에는 점수가 0으로 할당됩니다. 마우스가 난간을 따라 걷는 동안 발을 헛디뎌냈지만 그렇지 않으면 조정된 것처럼 보이면 1점을 받습니다. 뒷다리를 효과적으로 사용하지 않거나 케이지 안으로 우아하게 내려갈 수 없는 경우.

난간에서 떨어지거나 걷는 동안 또는 몸을 낮추려고 시도하거나 흔들리고 전혀 움직이기를 거부하는 경우 2점을 받습니다. 격려에도 불구하고 3점을 받습니다. 정확한 측정을 위해 선반 테스트를 세 번 수행하고 선반 테스트 점수를 기록합니다.

이제 뒷다리 잡기를 득점하는 방법을 살펴 보겠습니다. 뒷다리 움켜쥐기는 특정 소뇌 운동 실조증을 포함한 신경 퇴행의 여러 마우스 모델에서 질병 진행의 지표입니다. 평가를 시작하려면 꼬리 밑둥 근처를 잡고 주변의 모든 물체 중 가장 멀리 들어 올립니다.

약 10초 동안 뒷다리 위치를 관찰합니다. 뒷다리가 복부에서 바깥쪽으로 일관되게 벌어지면 점수가 0으로 할당됩니다. 한쪽 뒷다리가 매달려 있는 시간의 50% 이상 동안 복부 쪽으로 후퇴하면 1점을 받습니다.

양쪽 뒷다리가 매달려 있는 시간의 50% 이상 동안 복부 쪽으로 부분적으로 후퇴하면 2점을 받습니다. 뒷다리가 완전히 수축되어 매달려 있는 시간의 50% 이상 동안 복부에 닿으면 3점을 받습니다. 테스트를 세 번 수행하고 뒷다리 걸쇠 점수를 기록합니다.

이제 보행을 평가하는 방법을 살펴보겠습니다. 보행 테스트는 협응력과 근육 기능을 측정한 것입니다. 테스트를 시작하려면 케이지에서 마우스를 제거하고 머리가 조사관과 반대쪽을 향하도록 평평한 표면에 놓습니다.

쥐가 걷는 것을 뒤에서 관찰합니다. 마우스가 체중을 모든 팔다리에 지탱하고 복부가 땅에 닿지 않고 양쪽 뒷다리가 고르게 참여한 상태에서 정상적으로 움직이면 0점을 받습니다. 떨림을 보이거나 걷는 동안 절뚝거리는 것처럼 보이거나 발이 몸에서 약간 멀어지면 1점을 받습니다.

심한 떨림, 심한 절뚝거림, 골반 저하 또는 운동 중 발이 몸에서 더 심하게 멀어지는 경우 할당됩니다. 2. 마우스가 앞으로 나아가는 데 어려움을 겪고 복부를 땅을 따라 끌면 3을 받습니다. 마우스 GA를 세 번 관찰하고 스케이트 점수를 기록했습니다.

이제 보자. 후만증 검사(blurosis test)후만증은 척추의 특징적인 등쪽 만곡입니다. 이는 마우스 모델에서 척추 소뇌 운동 실조증을 포함한 운동 시스템과 관련된 신경 퇴행성 질환의 일반적인 증상입니다.

이는 신경 퇴행에 이차적으로 발생하는 척추 근육의 근육 긴장도 손실로 인해 발생합니다. 시작하려면 케이지에서 마우스를 꺼내 평평한 표면에 놓습니다. 걷는 것을 관찰하십시오.

마우스가 걸을 때 척추를 쉽게 곧게 펼 수 있고 지속적인 후만증이 없으면 0점을 받습니다. 쥐가 가벼운 후만증을 보이지만 척추를 곧게 펼 수 있으면 1점을 받습니다. 몸을 곧게 펴지 못하고 지속적이지만 가벼운 후만증을 유지하는 경우 2점을 받습니다.

쥐가 걸을 때나 앉아 있는 동안 뚜렷한 후만증을 유지하면 3점의 점수가 할당됩니다. 마우스의 후만증 점수를 세 번 관찰합니다. 마우스를 케이지에 다시 넣고 후만증 점수를 기록합니다.

다음은 Flocked SCA 7 92 Q로 알려진 murn 형질전환 척추, 소뇌 운동 실조증 7형 모델의 복합 표현형 평가의 대표적인 그래프입니다. 각 마우스에 대해 4가지 측정의 점수를 합산하고 각 연령의 두 유전자형에 대해 평균 복합 점수를 계산했습니다. 여기서 f Fluxed, SCA 7 92 Q 마우스는 nont 형질전환 깔짚 짝과 현저하게 다른 A 프로그레시브 SCA 7 표현형을 나타냅니다. 중요한 것은 시간이 지남에 따라 증가하는 표현형 점수가 인간 질병의 진행성 특성과 일치한다는 것입니다.

방금 복합 표현형 점수 시스템을 활용하여 소뇌 운동 실조증의 마우스 모델에서 질병의 중증도와 진행을 평가하는 방법을 보여 드렸습니다. 이 절차를 수행할 때 비만이 설명된 네 가지 테스트 모두에서 혼란스러운 요소라는 것을 기억하는 것이 중요합니다. 개별 테스트의 결과를 개별적으로 분석하여 먼저 마우스 모델에 가장 적합한 복합 표현형 채점 시스템에서 이상적인 조합을 결정할 수 있습니다.

그게 다야. 시청해 주셔서 감사드리며 실험에 행운을 빕니다.