Name: 인간 제대 베인 내피 세포의 절연 (HUVEC) (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-04-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 19 s
Description: 배우세요 인간 제대 정맥 내피 세포(HUVEC) 분리 및 배양 방법을 혈관생성 연구에 활용하는 기술입니다. 콜라게나아제와 특수 배지를 사용하여 신뢰할 수 있는 세포 분리 프로토콜을 제공합니다.

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절차 <ol><li> 초과 피를 닦아 패드와 지문에 대한 코드를 놓는다. 코드의 양쪽에 신선한 상처를 확인하십시오. </li><li> 정맥로, ON 플라스틱 바늘 피복과 함께 21 1 / 2 G 바늘을 삽입합니다. (정맥 최대 개방이며 2 작은 것들은 동맥 있습니다) </li><li> hemostat과 장소에 바늘을 고정하고 바늘로 행크스의 20cc 주사기를 첨부합니다. </li><li> 적당한 압력으로 정맥을 통해 행크스 밀어. 표백제와 함께 비커에 쓰레기를 수집합니다. (추진하는 것은 혈관 밖으로 터지는 바늘을 예방할하면서 한손으로 바늘과 코드를 개최.) 정맥에서 피를 많이있다면, 두 번째 시간을 씻으십시오. </li><li> 패드에 코드를 배치하고 정맥의 다른 쪽 끝을 클램프. 코드를 따라 누수를 확인하기 위해 행크스 몇 ML로 채웁니다. 5 ML를 철회하고 아래의 클램프를 분리합니다. </li><li> 20cc 주사기를 분리하십시오. 10cc 주사기의 플런저를 제거합니다. 10ml collagenase에 기름을 붓고 플런저를 교체, 바늘에 10cc 주사기를 첨부하십시오. 당신을 가장 먼저 금액은 오픈 엔드를 종료 나타날 때까지 정맥에 collagenase 밀어. 오픈 엔드를 다시 클램프 및 정맥의 중간 팽창가있을 때까지 collagenase와 함께 입력합니다. 평활근 오염에 너무 많은 팽창 결과입니다. </li><li> 부드럽게 코드를 마사지. </li><li> 15 분 37 DPBS에 품어 코드가 (첨부 hemostats, 바늘과 주사기 포함) ° C. </li><li> 잠복기 동안, 2 차 코드와 같이 1-8 계속합니다. </li><li> 부화 후 비커의 코드를 꺼내 50mL 튜브를 통해 코드를 누른 상태에서하면 하단 클램프 위의 끝부분을 잘라. 관에있는 모든를 수집해야합니다. 탯줄을 통해 나머지 collagenase를 밀어 후 20cc 주사기를 첨부하고 적당한 압력을 통해 행크스 밀어. </li><li> 더 평활근 세포가 필요하지 않으면,이 시간에 코드를 폐기하십시오. 그렇지 않으면, 37 ~ 5ml collagenase와 부화와 두 번째 50mL 튜브에 같은 코드를 배치 ° C를 30-60 분. </li><li> 모든 코드가 완료되기 전까지는 튜브를 유지. </li><li> 5 분 ~ 1200 RPM에서 튜브를 스핀. </li><li> 기음 뜨는가 (~ 1-2 ML 제외). T25에 5mls PHEC의 펠렛 +와 플레이트를 Resuspend. </li><li> ° C와 5 % CO 2 밤새 37 알을 품다. </li><li> 그 다음날 뜨는을 제거하고 새로운 미디어 바꿉니다. 많은 RBCs가있다면, M199과 함께 다음 PHEC +를 추가 한 번 씻으십시오. 접시 (1-4 일) 합류 전까지는 평소처럼 잠복기 계속합니다. gelatinized T75으로 가라. </li><li> 일단 T75 세 T75s 분할, 합류합니다. 플라스크마다 두 병을 고정. </li></ol> 참고 : 내피 세포 (unactivated) 조약돌 모양이 있습니다. 몇 사람들이 일반적으로 unactive 상태로 돌아가려면 통과 후 내피 세포가 때로는 바로 격리 후 (길고 뾰족한) 활성화됩니다. 대청소 <ol><li> 아주 조심스럽게, 샵스 컨테이너에 바늘 폐기. </li><li> 큰 생물 학적 주사기 용기에 배출. </li><li> 작은 생물 학적 가방에 모든 조직을 넣어. -20에서 닫기 가방 동결 ° 소각까지. </li><li> 적어도 10 분 virucide의 모든 악기를 만끽해보세요. </li><li> / 표백 비커를 낭비 부화 미디어를 추가합니다. 적어도 10 분 앉아 보자. </li><li> 생물 학적 폐기물로 벤치 패드를 폐기하십시오. </li><li> 비커, 벤치 위 vircide와 물 목욕 덮개의 내부와 외부를 스프레이. 10 분 앉아서 후 닦아냅니다. </li><li> 따뜻한 물을 비커와 악기를 씻어과 (그들이 녹을 않도록 악기를 얼룩) 건조 랙 만요. </li><li> 싱크대 아래 소독 폐기물의 배출. </li><li> 냉장고에 사용되지 않은 미디어를 반환합니다. </li><li> 생물 학적 폐기물의 장갑 폐기. </li></ol>

<table><tbody><tr><td>0.1% Collagenase</td><td></td><td></td><td>탯줄당 10 mL, 37 &amp;deg;C로 가온</td></tr><tr><td>조직 배양 플라스크</td><td></td><td></td><td>T75, 탯줄당 1개</td></tr><tr><td>Hanks 배지</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>가위</td><td></td><td></td><td>멸균</td></tr><tr><td>비커</td><td></td><td></td><td>멸균</td></tr><tr><td>50 mL 튜브</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

인간 제대 베인 내피 세포의 절연 (huvec)

Isolation of Human Umbilical Vein Endothelial Cells (HUVEC)

Angiogenesis는 angiogenic 자극에 대한 응답으로, 새로운 선박은 기존 vasculature에서 만들어지는 복잡한 다단계 프로세스입니다. 이 단계는 다음과 같습니다 코드, 루멘 형성, 문합, 새로운 지하 막 형성에 세포외 기질, EC의 정렬에 내피 세포의 지하 막, 증식 및 마이 그 레이션 (돋아) (EC)의 저하. 시험 관내 assays의 많은이 과정을 연구하기 위해 개발하지만, 대부분의 전용 angiogenesis의 특정 단계를 모방하고, morphologically 혈관 종종 생체내에서 선박과 유사하지되었습니다. 여기서 우리는 인간 제대 정맥 EC와 섬유아 세포를 이용 체외의 angiogenesis 분석에 최적화된 보여줍니다. 중요한 것은이 모델 recapitulates angiogenesis의 핵심 초기의, 그리고 선박 편광 EC 둘러싸인 세포 특허 루멘을 표시합니다. 선박 쉽게 위상 대조 및 시간 경과 현미경으로 관찰하고, 다운 스트림 애플 리케이션을위한 순수한 형태로 복구할 수 있습니다.

이 비디오 프로토콜은 인간의 탯줄에서 인간 제대 정맥 내피 세포 (HUVEC)의 고립과 문화를 보여줍니다. 일단 이러한 세포도 휴스 연구소에 의해 입증 최적화된 섬유소 젤 비드 분석처럼 체외의 angiogenesis의 assays에서 사용할 수 있습니다 고립.

인간 제대 베인 내피 세포의 절연 (HUVEC)

혈관신생은 혈관신생 자극에 반응하여 기존 혈관계로부터 새로운 혈관이 생성되는 복잡한 다단계 과정입니다. 이러한 단계들은...

안녕하세요, 제 이름은 Jager Davis이며 오늘은 HUVEC로 알려진 인간 제대 정맥 내피 세포를 분리하는 방법을 보여드리겠습니다. 다양한 배지를 사용할 예정인데, 우선 정맥에 있을 수 있는 적혈구나 기타 오염 물질을 제거하기 위해 Hank's balanced salt solution을 사용하여 세포를 세척하겠습니다. 둘째로, DPBS에 재현탁한 collagenase를 사용하여 정맥에서 HUVEC를 떼어낼 것이며, 마지막으로 열 불활성화된 FBS와 pen-strep solution이 포함된 M199인 20% EGM-2 medium에 세포를 도말하겠습니다.또한 BD Biosciences의 내피 세포 성장 보충제를 Resus 현탁액에 첨가하겠습니다. 자, 해부용 가위 한 쌍이 준비되었습니다. 이렇게 탯줄을 가로질러 직선으로 절단하겠습니다.다음으로, 탯줄을 정리하겠습니다. 우선 동맥과 정맥을 구분하겠습니다. 동맥 두 개와 정맥 한 개가 있습니다.저는 보통 두 개의 동맥을 통해 동맥을 확인합니다. 동맥이 사용자 쪽을 향해 나오고 있습니다. 여기 하나가 있고, 여기에 또 다른 동맥이 있습니다.보시는 바와 같이 정맥이 탯줄 내부로 들어가 있으며, 바로 그 위치에 버터플라이 바늘을 꽂을 것입니다. 21 gauge, 3/4인치 Accutane 버터플라이 바늘을 사용합니다. 이제 포장을 뜯어주세요.그대로 진행하겠습니다. 다시 한번 동맥들을 확인하겠습니다. 여기 첫 번째 동맥과 두 번째 동맥이 있고, 그리고 정맥이 있습니다.이제 나비바늘을 사용하여 매우 조심스럽게 정맥에 삽입하겠습니다. 이때 어느 정도 저항이 느껴질 수 있습니다. 저는 코드 부분을 약간 비틀면서 동시에 바늘을 밀어 넣는 동작을 반복하며, 나비바늘의 날개가 코드와 수평이 될 때까지 계속 진행합니다. 이렇게 하면 삽입이 완료되며, 이제 클램프로 고정하면 됩니다.이제 20 µL 시린지 두 개에 잉크 20 µL씩을 채우겠습니다. 다음으로, 50 µL 원추형 튜브에 20% effect 5 µL를 채우겠습니다. 이어서, 이 15 µL 원추형 튜브 중 하나에 DPBS 10 µL를 피펫으로 분주하겠습니다.15 mL의 DPBS에 저울로 측정한 10 mg의 콜라게나아제 분말을 첨가하겠습니다. 그 후 튜브 벽에 붙은 분말이 모두 사라질 때까지 튜브를 서너 번 뒤집어 콜라게나아제를 재현탁합니다. 약 5~6회 정도 반복한 다음, 10 mL 시린지에 필터를 장착하여 콜라게나아제를

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

탯줄 코드는 여러 가지 방법으로 부드러운 근육 세포를 분리하는 데 사용됩니다. 이 작품에서 우리는 고립 평활근 세포에 효소 처리를 사용합니다.

인간의 탯줄 아티 평활근 세포 절연 (HUASMC)

우리는 분리하고 심장 밸브 내피 세포 (VEC)의 culturing 순수한 인구를위한 방법을 제공합니다. VEC는 (雨 期) 또는 전단지의 양쪽으로부터 격리하고 즉시 다음과 같은 수 있습니다 기본 중간 세포 (VIC) 격리는 간단합니다.

판막병 내피 세포의 분리

이 문서는 먼저 제대 정맥 내피 세포로부터 인간을 분리하기위한 절차를 설명하고 유동 조건 하에서 호중구 윤회를 검사하기 위해 이러한 세포를 사용하는 방법을 보여줍니다. 유리의 광학 특성을 가진 고분자로 만들어진 낮은 볼륨 흐름 챔버를 사용하여 희귀 세포 집단의 살아있는 세포 형광 이미징도 가능합니다.

흐름 조건에서 인간 제대 정맥 내피 세포 및 호중구 윤회의 연구에서 이들의 사용 격리

호중구의 부착을 정량하는 방법이보고되어있다. 이 방법은 혈관에서 발생 된 것과 유사한 동적 흐름 환경을 생성한다. 그것은 허용 정제 부착 분자 (리간드) 또는 투명 스트레스 생체 환경 유사한 맥락에서 내피 세포 기질 (HUVEC) 중 하나에 호중구 부착 조사.

인간 호중구 유량 용기 접착 분석

이 프로토콜은 이미징 또는 분자 생물학 실험을 수행하기 위해 마우스 관상 동맥 내피 세포를 분리하는 방법을 공유하기 위해 준비되었습니다.

마우스 관상 내피 세포의 분리

HUVEC(Human Umbilical Vein Endothelial Cell) 배양을 위한 프로토콜, 형광 표지된 미세소관 성장 마커의 일시적 형질주입, 생세포 이미징 및 간기 미세소관 성장 역학의 자동 분석에 대해 자세히 설명합니다.

고해상도 시간 경과 이미징 및 생활 인간 제대 정맥 내피 세포의 미세 소관 역학의 자동 분석

이 프로토콜의 목표는 내 피 뿌리 탯 줄 혈액에서 세포를 분리. 조직 설계 만드는 혈관 및 심장 밸브 구성 및 응용 프로그램의 일부는 biomarker로 심혈 관 위험, 허 혈 성 질환 치료 환자를 식별 하는 데 이러한 세포를 사용 하 여 포함 됩니다.

인간 탯 줄 혈액에서 내 피 조상 세포의 고립

여기, 우리가 특정 표면 마커 및 공초점 형광 현미경 검사 법을 사용 하 여 흐름 체 외에서 매매 하는 monocyte 부분 모집단을 측정 하는 통합된 프로토콜 제시. 이 프로토콜은 다른 특정 표면 마커를 사용 하 여 다른 백혈구 하위 프로로 뿐만 아니라 순차 모집 단계를 탐험 하 사용할 수 있습니다.

생체 외에서 흐름 아래 Monocyte 모집단의 채용의 동시 연구

어렵지만 폐 내피 세포의 분리는 폐 염증 연구에 필수적입니다. 본 프로토콜은 대혈관 및 미세혈관 내피 세포의 고수율, 고순도 단리를 위한 절차를 설명한다.

Microvascular and Macrovascular Endothelial Cell Isolation and Purification from Lung-Derived Samples(폐 유래 샘플에서 미세혈관 및 대혈관 내피 세포 분리 및 정제)

현재 연구는 실시간 세포 분석(RTCA) 시스템을 사용하여 바이러스 감염 중 인간 제대 정맥 내피 세포(HUVEC)의 변화를 모니터링하는 프로토콜을 설명합니다.

임피던스 기반 실시간 세포 분석을 이용한 바이러스 감염 시 인간 제대 정맥 내피 세포의 변화 모니터링

우리는 인간 복재 정맥 내피 세포(hSVEC)를 분리하고 배양하기 위한 프로토콜을 설명합니다. 또한 hSVEC의 기계적 응력을 연구하기 위해 전단 응력과 스트레치를 생성하는 자세한 방법을 제공합니다.

인간 복재 정맥 내피 세포 분리 및 제어된 수준의 전단 응력 및 스트레칭에 대한 노출

배우세요 인간 제대 정맥 내피 세포(HUVEC) 분리 및 배양 방법을 혈관생성 연구에 활용하는 기술입니다. 콜라게나아제와 특수 배지를 사용하여 신뢰할 수 있는 세포 분리 프로토콜을 제공합니다.

인간 제대 베인 내피 세포의 절연 (HUVEC)

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