Name: Murine 발광 생물 간장 Tumour 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-07-17T17:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 23 s
Description: 배우세요 쥐 간 종양 모델 수술 기법을 통해 생체 발광 영상으로 종양 성장을 실시간 모니터링하는 방법을. 이 기술은 간 전이 암 연구와 치료제 평가에 활용됩니다.

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이 작품은 코르크 사우스 의무실 빅토리아 대학 병원 유방 펀드, 아일랜드 암 협회 (CRI07TAN)와 코르크의 암 연구 센터를 통해 투자되었다. 안정 루시페라제을 표현 루이스 폐 세포 라인 박사에서 어떤 선물 Jooss 카린, 세포 Genesys, 주식 회사, 샌프란 시스코, 미국.

소개 간은 종종 전이성 질병의 첫 번째 사이트입니다 고급 질환 환자의 많은 40 30 %에서 확산의 유일한 사이트가 될 수 있습니다. 그러나 전이성 간 종양을 치료하기위한 옵션은 절제술에 적합한 환자의 소수로 몇 가지하고 chemotherapeutics에만 23% 주요 조치. 이 분야에 잠복기 연구는 절연 간 질환을 연구하기 위해 적합한 마우스 모델의 부재에 의해 제한되었습니다. 우리는 안정적으로 균일, 확산 간 metastases을 수립하는 데 사용할 수있는 분할 비장의 접근 방식을 설명합니다. 비장의 절반 절제술은 지라 종양의 성장과 비장의 다른 절반 지라 면역 보호 특성을 유지하기 위해 손상 포털 순환과 함께 반환되는의 결과를 피할 수. 우리가 설명하는 모델은 수행하기 위해 아주 간단하고 단일 절개를 통해 신속하게 수행할 수 있습니다. 종양 세포 라인의 발광 생물 특성은 동물의 희생없이 치료 반응의 정확한 양을 정함 수 있습니다. 프로토콜 I. 셀 준비 <ol><li> 루이스 폐 암종 세포는 37 10 % 태아 송아지 혈청 보충 Dulbecco의 수정된 필수 중간 ° C, 5 % CO 2를 증가하고 trypsinisation 때 하위 합류하여 수확하고 있습니다. </li><li> 세포 혈청 무료로 미디어에 준비되었습니다 Nucleocounter (화학 metec, 덴마크) 200 μl 1 X 10 6 세포의 단일 세포 현탁액을 사용하여 계산되었다. </li></ol> II. 마우스 준비 참고 : 모든 절차는 대학 코크의 윤리위원회에 의해 승인되었습니다. 저희 연구실에서는 마우스를 마취하는 주사용 anesthetics를 사용하여, 또는 하나는 동일한 효과를 달성하기위한 흡입 anesthetics을 사용할 수 있습니다. 우리가 사용하는 마우스 변형은 할런 연구소 (옥스 퍼 드셔, 영국)에서 얻은 사나이 답게 MF1 뉴 / 뉴 변형입니다. 16-22그램 연령 6-8 주간의 무게여 MF1 뉴 / 뉴 생쥐는이 실험에 포함되었습니다. 같은 C57와 Balb / C와 같은 다른 변종도 적절한 종양 세포 라인과 함께 사용할 수 있습니다. <ol><li> Anaesthesia는 100ul 1.5 MG의 케타민을 300 UG의 xylazine의 intraperitoneal 주사에 의해 전달되었다. </li><li> 마취의 깊이는 발가락 핀치를 사용하여 평가됩니다. 발가락 핀치와도 금단 반응이 없어야합니다. </li><li> anesthetized 마우스가 제대로 위치하고 손난로 지워졌을 것입니다. </li><li> 복부는 10 % betadine 솔루션 준비합니다. </li><li> 복부와 외과 사이트는 살균 방식에 draped 있습니다. </li></ol> III. 복부 절개 <ol><li> 작은 subcostal 절개는 피부에 이루어집니다. </li><li> 절개는 2~3cm로 연장됩니다. </li><li> 복벽 근육을 나누어 복막 캐비티가 입력되었습니다. </li></ol> IV. 노출과 비장 학부 <ol><li> 비장은 미리 절단 멸균 거즈에 동원하고 부드럽게 exteriorized입니다. </li><li> 두 4-0 vicryl ligatures는 비장의 중반 몸​​ 주위에 연결되어 있습니다. </li><li> 비장 두 헤미 - spleens을 만드는 두 ligatures 사이에 나눌 수 있습니다. </li></ol> 헤미 - 비장에 전지의 V. 사출 <ol><li> 27 G는 하나 헤미 - 비장에 세포 100 μL 볼륨을 삽입하는 데 사용됩니다. </li><li> Tumour 세포는 10 분 간 도달 주입된 세포의 대부분을위한 충분한 시간을 제공하는 간으로 배수하기 위해 사용할 수 있습니다. </li></ol> VI. 의 절단 헤미 - 비장, 복부 폐쇄 및 복구 <ol><li> 주입 헤미 - 비장이 excised됩니다. </li><li> 다른 헤미 - 비장은 복강에 반환됩니다. </li><li> 근육 계층은 간단한 실행 바늘을 사용하여 4-0 PDS의 봉합과 함께 닫힙니다. </li><li> 복부 피부가 중단 봉합사를 사용하여 4-0 Prolene와 함께 닫힙니다. </li><li> 유체 볼러스가 관리하고 이후 수술 진통제, Carpofen는 (5 밀리그램 / kg) 24 H 포스트 수술에 대한 IP 주입에 의해 관리됩니다. </li><li> 마우스가 마취에서 회복하기 위해 허용 </li></ol> VII. IVIS 전신 발광 생물 이미징 <ol><li> 마우스 주사용 마취제를 사용하여 anesthetized 있습니다. </li><li> Luciferin 기판은 이미징 전에 내부 복막 주사 십분에 의해 주어집니다 </li><li> 생쥐는 무대에 위치하고 IVIS 온 몸이 이미징 시스템을 사용하여 3 분 군데 아르 </li><li> 간장의 발광은 관심이 도구의 영역을 사용하여 측정할 수 </li></ol> VIII. 마우스 간의 노출 <ol><li> 마우스 주사용 마취제를 사용하여 anesthetized 있습니다. </li><li> 옥상 복부 절개는 생체내의 확산 간 전이의 시각화 수 있습니다. </li><li> 마우스는 자궁 전위에 의해 euthanized이며 간장은 추가 분석을 위해 excised 수 있습니다. </li></ol>_upload/1977/1977fig1.jpg "고도는 ="그림 1 "/&gt; 그림 간은 1. 갓 excised murine 치료 및 종양 - 침입. <img src="/files/ftp_upload/1977/1977fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 그림 2.로서 IVIS 온 몸이 이미징에 의해 입증 간장 종양의 성장 속도론.

<ol><li>Kasuya, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+subcutaneous+spleen+reservoir+for+multiple+portal+venous+injections+to+treat+liver+malignancies%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Mouse models of subcutaneous spleen reservoir for multiple portal venous injections to treat liver malignancies.</a> Cancer Res. 65, 3823-3827 (2005).</li>
<li>Liu, Q. Z., Tuo, C. W., Wang, B., Wu, B. Q., Zhang, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+metastasis+models+of+human+colorectal+carcinoma+established+in+nude+mice+by+orthotopic+transplantation+and+their+biologic+characteristic%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Liver metastasis models of human colorectal carcinoma established in nude mice by orthotopic transplantation and their biologic characteristic.</a> World J Gastroenterol. 4, 409-411 (1998).</li>
<li>Li, Z. Y., Ni, S., Yang, X., Kiviat, N., Lieber, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenograft+models+for+liver+metastasis%3A+Relationship+between+tumor+morphology+and+adenovirus+vector+transduction%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Xenograft models for liver metastasis: Relationship between tumor morphology and adenovirus vector transduction.</a> Mol Ther. 9, 650-657 (2004).</li>
<li>Cashman, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+gene+therapy+as+a+neoadjuvant+to+surgical+excision+to+control+metastatic+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Lett%22%5BJournal%5D)">Immune gene therapy as a neoadjuvant to surgical excision to control metastatic cancers.</a> Cancer Lett. , (2008).</li>
</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

간 전이의 연구에 대한 생체내 모델로 신뢰성의 개발은 새로운 치료 전략의 도래와 함께 중요한 증가되고있다. 새로운 전략의 정확한 연구를위한 동물 모델을 수행하기 위해 상대적으로 쉽게해야, 전이의 상당수를 형성 전이성 폭포의 모든 단계를 포함하고 전이성 세포의 제한된 수의의 감지 및 카운팅 수있는 기자 시스템을합니다. 로 설명한 분할 비장의 접근 방식은 단일 작업과 관련된하고 carcinomatosis 및 포털 정맥 혈전증 1 매우 낮은 위험과 균일한 확산 간 전이를 설정하는 법을 배워야 비교적 쉬운 기법입니다. 이 헤미 - spleens에 비장의 분단 한 헤미 - 비장에 종양 세포의 주입을 허용합니다. Tumour 세포는 포털 순환을 입력하고 전이성 폭포의 첫 번째 단계를 흉내낸, 간 여행. 주입 헤미 - 비장의 절단은 지라 종양의 성장과 다른 헤미 - 비장의 반환을 피할 동물이 이전 절차했다 지라 면역 속성의 보존을 보장합니다 .. 이 모델은 종양의 종류의 다양한 활용 수 있습니다. 루이스...

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D6429</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>케타민(Ketamine)</td><td>V&amp;eacute;toquinol</td><td></td><td></td></tr><tr><td>자일라진(Xylazine)</td><td>V&amp;eacute;toquinol</td><td></td><td></td></tr><tr><td>카프로펜(Carprofen)</td><td>V&amp;eacute;toquinol</td><td></td><td></td></tr><tr><td>비덴(Videne)</td><td>Ecolab</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vicryl 4-0 봉합사</td><td>Ethicon Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PDS 4-0 봉합사</td><td>Ethicon Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Prolene 4-0 봉합사</td><td>Ethicon Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Firefly 루시페린(Luciferin)</td><td>Biosynth International, Inc</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

murine 발광 생물 간장 tumour 모델

Murine Bioluminescent Hepatic Tumour Model

이 동영상은 이후 발광 생물 이미징으로 분석 수있는 마우스 모델에서 간 metastases의 설립을 설명합니다. Tumour 세포는 비장의 각 절반 작은 꽃자루 그대로 혈관을두고 두로 비장과 분할의 동원을 통해 지역화된 간 종양을 유발하는 간을 위해 특별히 관리하고 있습니다. constitutively 반딧불의 루시페라제 유전자 (luc1)를 표현 루이스 폐 암종 세포는 다음 10 분 후 resected 하나 헤미 - 비장에 주사를하고 있습니다. 다른 헤미 - 비장은 그대로 왼쪽 복부에 반환됩니다. 간 종양의 성장은 IVIS 온 몸이 이미징 시스템을 사용 bioluminescence 이미징에 의해 모니터할 수 있습니다. IVIS를 사용하여 종양 성장의 양적 이미징이 가능한 종양 세포의 정확한 quantitation를 제공합니다. Tumour 세포 죽음과 약물 치료로 인한 괴사는 발광 생물 신호의 감소에 의해 초기 표시됩니다. 이 마우스 모델은 전이성 종양 세포의 생존과 성장을 기본 메커니즘을 조사 가능하며 간 전이의 치료제의 평가에 사용될 수 있습니다.

이 문서는 생쥐에 orthotopic 발광 생물 간 종양의 유도, 그리고 라이브 온 몸이 발광 이미징을 사용하여 간장에 국한 종양 성장의 후속 분석을 위해 절차를 설명합니다.

Murine 발광 생물 간장 Tumour 모델

이 영상에서는 생물 발광 이미징(bioluminescent imaging)을 통해 사후 분석이 가능한 마우스 모델의 간 전이 생성 방법을 설명합니다. 종양 세포는...

여러분, 안녕하세요. 제 이름은 Simon Regenron입니다. 저는 여기 아일랜드에 있는 암 연구 센터의 외과 레지던트 중 한 명입니다.오늘은 간 전이를 유도하는 외과적 기술에 대해 보여드리겠습니다. 신경세포 모델에서 간은 전이가 흔히 일어나는 부위이며 암 관련 사망의 주요 원인입니다. 진행된 간 질환을 앓고 있는 환자 중 외과적 절제술이 가능한 환자는 극소수에 불과합니다.따라서 이 질환의 치료를 위한 새로운 치료법이 필요합니다. 간 전이의 많은 동물 모델들은 임상 환경과 유사한 질환을 유발하지 못합니다. 오늘 제가 보여드릴 모델은 임상적으로 유의미한 모델이며, 배우기가 비교적 쉽고 성공률이 매우 높습니다.이 모델은 비장을 두 개의 반비장으로 나누는 과정을 포함합니다. 한쪽 반비장은 종양 세포를 접종하는 데 사용됩니다. 이 종양 세포들은 문맥 순환을 통해 간으로 이동합니다.나머지 반측 비장은 면역학적 특성을 유지하도록 그대로 둡니다. 사용 중인 세포주는 루시페레이스(luciferase)를 안정적으로 발현하여, 생체 내(in vivo) 종양 성장의 생물발광 분석이 가능합니다. 따라서 이 모델을 통해 간 질환 치료제의 비침습적 모니터링이 가능해질 것입니다.그럼 오늘의 실험 절차를 시작하겠습니다. 필요한 기구로는 해부용 가위, 니들 홀더, 작은 포셉 2개, 10번 메스, 피부 봉합용 5-0 프롤린(proline) 봉합사, 복막층 봉합용 4-0 PIA 봉합사, 비장 절제용 3-0 Vicryl 타이, 식염수, 마취제 주입용 29G 인슐린 바늘, 종양 세포 현탁액 주입용 26G 인슐린 바늘, 무혈청 배지에 현탁된 종양 세포, 주사 가능한 마취제, 피부 마커, 미리 절단된 멸균 거즈 스왑이 있습니다. 오늘 사용할 마우스 모델은 Athymic MF1 누드 마우스입니다.적절한 종양 세포주와 함께 C 57 및 BC와 같은 다른 모델을 사용할 수 있습니다. 실험실에서는 주입형 전신 마취제와 함께 가열 패드를 사용합니다. 발가락 꼬집기(toe pinch)를 통해 마취 깊이를 평가합니다.발가락을 집었을 때 발가락 회피 반사가 나타나지 않아야 합니다. 무릎 크기의 마우스를 적절한 위치에 놓고 테이프로 고정하며, 복부를 Betadine으로 소독하고 멸균 방식으로 드레이핑합니다. 갈비뼈 아래를 절개하여 복강으로 진입한 후, 비장을 확인하고 외부로 노출시킵니다.미리 잘라둔 멸균 거즈를 사용하여 마우스의 나머지 부위로부터 비장을 분리합니다. 두 개의 혈관경(vascular pedicles) 사이에 두 개의 수직 결찰사를 통과시켜 조심스럽게 묶어줍니다. 비장을 동일한 크기의 두 개의 반비장(hemi spleens)으로 나눕니다.한쪽 반비장(hemi spleen)을 종양 세포 접종에 사용합니다. 누출을 방지하기 위해 종양 세포를 반비장에 천천히 주입합니다. 종양 세포는 문맥 순환을 통해 이동하여 간에 도달합니다.10분간 배양한 후, 주입된 반측 비장을 적출하고 나머지 반측 비장은 복강 내로 다시 되돌려 놓습니다. 흡수성 봉합사와 연속 봉합법을 사용하여 복강을 폐쇄하고, 비흡수성 5-0 프로린 봉합사를 사용하여 피부를 봉합합니다. 회복 과정은 통상적인 절차에 따라 수행합니다.2D ivus 영상을 사용하여 간 질환의 진행 과정을 시간에 따라 평가할 수 있습니다. 이전과 동일하게 마우스에 마취를 실시하고, Lucifer 기질을 복강 내로 투여합니다. 마우스를 37 °C 챔버 내의 스테이지 위에 놓습니다.영상 촬영은 3분 동안 수행되며, 발광이 검출된 마우스의 중첩 영상이 생성됩니다. 처리 3주 후, 복부를 절개하여 미만성 간 질환이 확인되었습니다. 결론적으로, 이 기술은 간 국소 전이 종양 세포 성장의 유도를 가능하게 하며, 발광 영상을 통해 종양 성장의 시각화 및 정량화가 가능하고 치료 반응 평가에 응용될 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

루시페라제 - 수정된 인간의 뇌 종양의 xenografts은 종양 성장과 bioluminescence 이미징을 사용하여 치료에 대한 응답의 후속 모니터링과 athymic 생쥐에 intracranially 설정할 수 있습니다. 생존 분석과 함께, bioluminescence 모니터링 뇌 종양 치료를위한 고려되는 요법의 사전 임상 시험을위한 필수적인 연구 도구입니다.

Bioluminescence 이미징을 사용하여 종양 성장과 치료에 반응 이후 분석 Intracranial 뇌종양의 Xenografts 구축

hypoxia inducible 인자 - 1α 활동 Bioluminescence 이미징은 유방암 뇌 전이의 마우스 모델에서 종양 intracranial hypoxia 개발을 모니터에 적용됩니다.

유방암 뇌 전이의 종양 Hypoxia 역학 생체내의 Bioluminescence 이미징에서는 마우스 모델에서

이 비디오는 종양 진행의 비침습적 모니터링을 위해 국소 세포 전달 및 생체 내 생물 발광 이미징을 위해 Matrigel을 활용하는 췌장암의 정소성 모델을 보여줍니다. 정소성 모델은 신유전 및 이종 이식 모델 모두에 적합하며 원발성 췌장 종양의 성장 및 전이에 대한 새로운 항암 치료제의 영향을 조사하기 위한 전임상 시험에 사용할 수 있습니다.

생물 발광 직소성 췌장암 마우스 모델: 마우스의 암 진행을 모니터링하기 위한 비침습적 기술

근원:마리나 아란테스 라디키1, 빅터 카를로스 멜로1,빅토리아 파스 마차도1, 마르시아 크리스티나 올리베이라 다 로샤1, 자클린 바즈 데 올리베이라1, 루아나 크리스티나 카마르고1,2, 루이스 알렉상드르 뮐만1, 리카르도 벤테스 아제베도1, 소니아 나이르 바오1, 주앙 파울로 피게이로 롱고11브라질리아 대학교 생물과학연구소, 2브라질리아대학교 심리학연구소 기초심리과정학과이 비디오는 루시페라아제 발현 유방 선암종 세포를 암컷 마우스에 주입하고 생물발광 신호를 모니터링하여 시간 경과에 따른 원발성 및 전이성 종양 성장을 평가함으로써 생체 내에서 종양 진행을 추적하는 절차를...

암컷 마우스 모델에서 유방 종양 진행의 생물발광 이미징

출처: Clark, AJ, et al. 교모세포종에 대한 면역적격 동물 모델의 생물발광 영상. J. Vis. 경험. (2016년)이 비디오는 루시페라아제 발현 종양 세포와 루시페린을 사용하여 종양 성장을 비침습적으로 정량화하는 면역 적격 마우스 모델에서 교모세포종 진행을 추적하기 위한 생물 발광 이미징을 보여줍니다.

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췌장암 생물학의 개선 이해는 매우 췌장암을 치료하는 더 나은 치료 옵션의 개발을 가능하게하기 위해 필요합니다. 이러한 요구를 해결하기 위해, 우리는 사용하여 암 진행의 비 침습 모니터링을 허용 췌장암의 동소 모델을...

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GL261 신경교종 세포는 교모세포종의 유용한 면역 역량 동물 모델을 제공합니다. 이 프로토콜의 목표는 생체 내 생물 발광 이미징을 사용하여 두개내 종양 성장을 모니터링하기 위한 적절한 기술을 시연하고, 종양 면역학 연구를 위한 루시페라제 변형 GL261 세포의 유용성 및 교모세포종 치료를 위한 면역 요법 접근법을 검증하는 것입니다.

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생물 발광 영상은 종양과 전이를 지역화 잘 알려진 도구이지만, 이러한 이미지의 정량화는 종종 복잡한 계산 및 특정 장비를 필요로한다. 우리는 더 계산을 요구하지 않으며, 종양 부담과 치료 반응이 마우스 모델에서 관찰 할 수 있도록 정확한 획득 상태에 기초하여, 사용하기 쉬운 luminoscore 방법을 설명한다.

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