Name: 主动脉原位移植大鼠模型，研究慢性血管病变的发展 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-04T17:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 32 s
Description: 学习大鼠主动脉原位移植模型，用于研究移植血管病变的发展机制。该方法通过PVG至CI品系组合建立可靠模型，帮助科研人员深入理解慢性排斥反应中的新内膜形成过程。

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作者感谢Christiane Pahrmann在组织学方面的工作。
资金
Sonja Schrepfer 已获得德国研究基金会（Deutsche Forschungsgemeinschaft，DFG）的研究资助（SCHR992/3 1 和 SCHR992/4-1）。

从 Charles River（地址：Sandhofer Weg 7, D-97633 Sulzfeld）购买体重约为 250–300 g 的大鼠。 
 移植实验以 PVG 大鼠作为供体，ACI 大鼠作为受体。
大鼠在常规条件下饲养，自由摄取标准大鼠饲料和水。
所有手术器械在使用前均经过灭菌处理。
供体制备：
使用诱导室通过异氟烷（2.5%-3%）麻醉大鼠。
<ol>
 <li> 剃除大鼠腹部和胸部的毛发，将大鼠仰卧放置，并在其口鼻部覆盖面罩以维持麻醉状态。</li>
 <li> 使用聚维酮碘对腹部和胸部区域进行广泛消毒，随后使用80%乙醇，重复此步骤三次。</li>
 <li> 通过夹捏后肢足部检查反射，以确认大鼠已达到足够的麻醉深度。</li>
 <li> 打开腹腔并切开腹主动脉，造成大鼠失血处死。</li>
 <li> 小心打开胸腔，找到降胸主动脉。</li>
 <li> 将胸主动脉从周围组织（如脂肪、神经和食管）中仔细分离出来。</li>
 <li> 使用打孔器切取一段1.5 cm长的主动脉，避免对主动脉组织造成损伤。</li>
 <li> 用冷的无菌生理盐水彻底灌洗主动脉移植物，并将移植物储存在4°C环境中。</li>
</ol>
接收者：
使用诱导室通过异氟烷（2.5%-3%）麻醉大鼠。手术过程中维持体温。
<ol>
 <li> 剃除腹部区域毛发，并涂抹眼膏以防止麻醉期间眼睛干涩。</li>
 <li> 将大鼠仰卧放置，并在其口鼻部覆盖面罩以维持麻醉状态。</li>
 <li> 使用聚维酮碘消毒腹部区域，随后使用80%乙醇，重复此步骤三次。</li>
 <li> 通过夹捏后肢足部检查反射，确认大鼠已达到充分麻醉状态。</li>
 <li> 沿腹中线做切口，分两步分离皮肤和肌肉，打开腹腔。</li>
 <li> 将肠管置于盛有预温无菌生理盐水的无粉手套中，并将手套包裹肠管以防止水分流失。</li>
 <li> 清除覆盖在腹主动脉上的脂肪组织。</li>
 <li> 从肾下区域开始解剖腹主动脉至其分叉处，注意避免损伤血管分支。</li>
 <li> 如有必要，结扎腹主动脉的分支。</li>
 <li> 首先在已解剖出的腹主动脉肾下段使用显微外科夹闭夹，以阻断血流。</li>
 <li> 接着，在腹主动脉分叉附近放置第二个血管夹。</li>
 <li> 在血流完全阻断后，切除一段短的腹主动脉。</li>
 <li> 取出保存在冰上0.9%无菌生理盐水中的供体主动脉移植物，将其修剪至适当长度并置于缺损处。</li>
 <li> 将供体主动脉与受体主动脉连接，使用8-0 Prolene缝线（Ethicon, Norderstedt, Germany）进行连续缝合。先从近端端对端吻合开始。</li>
 <li> 完成远端端对端吻合后，小心打开远端血管夹。</li>
 <li> 若打开远端血管夹后无出血，再小心打开近端血管夹。若缝合处出现出血，应重新夹闭血管夹，找到出血点并用单针缝合止血。</li>
 <li> 腹主动脉远端应可见明显搏动。</li>
 <li> 随后将肠管复位回腹腔内。</li>
 <li> 使用预温的无菌生理盐水冲洗腹腔。</li>
 <li> 使用6-0 Prolene缝线（Ethicon, Norderstedt, Germany）连续缝合腹壁肌层。</li>
 <li> 使用5-0 Prolene缝线（Ethicon, Norderstedt, Germany）连续缝合皮肤。</li>
 <li> 在大鼠仍处于麻醉状态下，皮下注射4–5 mg/kg卡洛芬（Carprofen）。</li>
 <li> 为为此类手术提供充分镇痛，术后3天内将安乃近（metamizol）加入饮水（每100 ml水中加入50 mg安乃近）以进行疼痛管理。</li>
</ol>

<ol><li>Deuse, T., Hoyt, G., Koyanagi, T., Robbins, R. C., Schrepfer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+and+Inhibition+But+Not+Reversion+of+Chronic+Allograft+Vasculopathy+by+FK778%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Prevention and Inhibition But Not Reversion of Chronic Allograft Vasculopathy by FK778.</a> Transplantation. 85, 870-877 (2008).</li>
<li>Mennander, A., Tiisala, S., Halttunen, J., Yilmaz, S., Paavonen, T., Hayry, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+rejection+in+rat+allografts.+An+experimental+model+for+transplant+arteriosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Chronic rejection in rat allografts. An experimental model for transplant arteriosclerosis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 11, 671-680 (1991).</li>
<li>Ono, K., Lindsey, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+technique+of+heart+transplantation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thorac+Cardiovasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Improved technique of heart transplantation in rats.</a> J Thorac Cardiovasc Surg. 57, 225-225 (1969).</li>
<li>Poston, R. S., Billingham, M., Hoyt, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapamycin+reverses+chronic+graft+vascular+disease+in+a+novel+cardiac+allograft+model%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Rapamycin reverses chronic graft vascular disease in a novel cardiac allograft model.</a> Circulation. 100, 67-100 (1999).</li>
<li>Schrepfer, S., Deuse, T., Koch-Nolte, F., Krieger, T., Haddad, M., Schäfer, H., Pelletier, M. P., Robbins, R. C., Reichenspurner, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FK778+in+Experimental+Xenotransplantation%3A+A+Detailed+Analysis+of+Drug+Efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Heart+Lung+Transplant%22%5BJournal%5D)">FK778 in Experimental Xenotransplantation: A Detailed Analysis of Drug Efficacy.</a> J Heart Lung Transplant. 26, 70-77 (2007).</li>
</ol>

未声明任何利益冲突。

基于多种原因，我们发现与异位心脏移植模型相比，原位主动脉移植模型是研究移植血管病变（TVP）发展的更为准确的方法： 
在外科技术方面，主动脉移植模型是一种易于实施的方法，仅需完成端对端吻合；而异位心脏移植模型则对外科医生的技术要求更高，被认为是一种更为复杂且容易出错的操作，需要在两条主要血管上完成端对侧吻合。
由于移植性血管病变可在单一确定直径的血管中进行检查，而非在大量大小和结构差异显著的心脏小血管中进行探索，因此组织学标本的分析与测量得到了极大简化，避免了因血管异质性给研究者获取客观可信结果带来的困难。 
受体的胸主动脉可作为正常的对照，其在直径和形态学外观上提供了易于操作且可靠的比较对象；而在异位心脏移植模型中，心外膜或心肌内血管因存在较大的个体间差异，难以进行有效比较。
除了这些发现之外，主动脉同种异体移植物也不太容易发生可能由手术操作引起的破坏性组织学改变。纤维化或梗死可能发生在异位心脏移植组织及其中嵌入的血管内，从而影响其结构，使其不适合进行评估。
<p class="jove_conte...

<table><tbody><tr><td>手术显微镜（25倍放大）</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>异氟烷</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>剃毛器</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>聚维酮碘</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>冰冻0.9%生理盐水</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>预热的0.9%无菌生理盐水</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>眼膏</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>手套</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>显微外科剪刀</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>镊子</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>夹钳</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>8-0缝线（Prolene）</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>6-0缝线（Prolene）</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>5-0缝线（Prolene）</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>卡洛芬</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>美他佐辛</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>棉签</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

原位主动脉移植：一种研究慢性血管病变发生的大鼠模型

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

研究慢性排斥反应的模型对于探讨移植性血管病变（TVP）发生过程中的病理生物学和病理生理学过程至关重要。
用于心血管慢性排斥反应研究的常用动物模型是在实验啮齿类动物中进行的异位心脏移植模型。自Ono和Lindsey（3）发表该技术以来，此模型已广泛应用于各类实验中。为了分析血管中的病变，需要对心脏进行切片，并测量所有血管。
研究心血管领域慢性排斥反应的另一种方法是主动脉移植模型（1, 2）。在原位主动脉移植模型中，可对主动脉进行简便的组织学评估（2）。PVG至ACI模型特别适用于CAV研究，因为急性血管排斥反应在此模型中并非主要的混杂因素，且环孢素A（CsA）治疗无法阻止CAV的发展，这与临床情况相似（4）。该模型需要为期7天的CsA治疗，以防止急性排斥反应，并实现长期存活，同时促进TVP的发生。
该模型还可用于研究异种移植模型中的急性细胞排斥反应和中层坏死（5）。

本视频展示了大鼠原位主动脉移植模型，作为一种研究移植血管病变（TVP）发生的简单模型。

慢性排斥反应的研究模型对于研究移植发展过程中的病理生物学和病理生理学过程至关重要……

本实验的总体目标是建立一种准确且易于实施的模型和方法，用于研究移植性血管病变的发展过程。该目标通过采用PVG至CI品系组合来实现。实验的第二步是获取供体主动脉。该操作的第三步是准备受体。操作的最后一步是将供体的主动脉与受体的主动脉进行吻合。最终，可通过病理组织学方法获得显示新生内膜形成的结果。大家好，我是索尼娅·施韦费尔（Sonya Schwefel），德国汉堡大学心脏中心Thet Eye实验室的移植免疫学教授。我是马尼什·杜博夫（Manish Duboff），同样来自TS Eye实验室。我们的实验室致力于移植免疫学研究。在本视频中，我们将向您介绍原位主动脉移植模型，这是一种简便且有效的模型，用于研究移植血管病变在小鼠中的发生发展。我们实验室利用该手术方法探究心血管移植后的慢性排斥反应问题。在原位主动脉移植模型中，主动脉可方便地进行组织学评估。此外，PVG至CI的模型特别适用于移植性血管病变研究，因为急性血管排斥反应不是主要的混杂因素，且血管病变的发展过程与临床观察结果相似。下面我们开始。本原位主动脉移植手术所用的供体为一只体重约250至300克的PVG大鼠。动物麻醉后，剃除其腹部和胸部的毛发。将大鼠仰卧放置，并在其口鼻部覆盖面罩。为维持麻醉状态，先用聚维酮碘广泛消毒腹部和胸部区域，随后使用80%乙醇。接着，通过轻捏大鼠后肢足部检查其反射反应。确认其已充分麻醉后，通过打开腹腔并在腹主动脉上剪开一个小孔来放血处死大鼠。小心打开胸腔以暴露胸降主动脉。从周围组织（如脂肪、神经和食管）中分离胸主动脉。使用手术剪在不损伤主动脉组织的情况下，截取一段1.5厘米长的主动脉。用冷生理盐水充分灌洗主动脉移植物，并将移植物置于4°C保存。该原位主动脉移植手术的受体为一只体重约250至300克的ACI大鼠。开始手术前，剃除麻醉大鼠腹部区域的毛发，并涂抹眼膏以防止麻醉期间眼睛干涩。将大鼠仰卧位放置，并在其口鼻部覆盖面罩以维持麻醉状态。接着，使用聚维酮碘对腹部区域进行消毒，随后使用80%乙醇。通过夹住后肢脚部以确认大鼠已充分麻醉后，沿腹壁正中线做切口，依次切开皮肤和肌肉，打开腹腔。共两步。打开腹腔后，将肠管置于盛有生理盐水的手套中。将手套折叠包裹肠管，以防止水分流失。清除覆盖在腹主动脉上的脂肪组织。从肾下区域开始解剖腹主动脉至其分叉处，注意避免损伤血管的分支。如有必要，在解剖腹主动脉后结扎其分支。首先，在腹主动脉的肾下段使用显微外科夹闭合血管，以阻断血流。接下来，在主动脉分叉处附近放置第二个止血钳。在血流阻断后，切除一段较短的主动脉。然后取用先前保存在冰上0.9%生理盐水中的供体主动脉移植物。将其修剪至适当长度，并置于主动脉的缺损处。使用连续的8-0聚丙烯缝线将供体主动脉与受体主动脉吻合，从近端端对端吻合处开始缝合。完成远端端对端吻合后，小心打开远端血管夹。接下来，小心打开颅部夹具。

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主动脉原位移植大鼠模型，研究慢性血管病变的发展

我们介绍一种技术，即将小鼠腹主动脉的一段原位移植到同种异体或同系受体肾动脉下方。该技术在需要移植大小均一的大动脉的研究中具有优势。...

小鼠原位主动脉移植在血管疾病研究中的应用

我们描述了一种小鼠主动脉移植术的实验方案。该方案的目的是提供一种可用于研究动脉中与同种免疫反应相关的病理过程及治疗策略的模型，以及由此引发的动脉改变，这些改变是导致器官移植失败的重要因素。...

异体免疫诱导的血管排斥反应与移植性动脉硬化的鼠类模型

将聚氨酯导管插入主动脉管腔并结扎缝合主动脉，可因外膜滋养血管灌注不足而引起慢性缺氧。本文介绍了一种新型的腹主动脉瘤（AAA）动物模型，其特征与人类腹主动脉瘤相似。...

通过阻断外膜滋养血管灌注建立腹主动脉瘤的啮齿动物模型

本文介绍了一种在小鼠颈部分异位主动脉移植模型中应用无缝合套管技术的小鼠异位主动脉移植方案。该模型可用于研究慢性移植物血管病变（CAV）的潜在病理机制，并有助于评估新的治疗药物以预防其发生。...

采用改良无缝合套管技术的小鼠颈动脉主动脉移植模型

我们描述了一种大鼠异位腹腔心脏移植模型，该模型对现有策略进行了改进，从而简化了手术操作。此外，我们还介绍了一种通过耳部注射活体心肌细胞建立的新型排斥反应模型，可在大鼠中进一步开展移植免疫学分析。...

大鼠异位心脏与心肌细胞移植的免疫学模型

本文介绍了一种大鼠部分异位骨肌皮瓣移植方案及其在中期随访中的潜在结果。...

大鼠部分异位后肢移植模型

本方案描述了一种在肾包膜下移植主动脉瓣瓣叶的简单高效方法，可用于研究心脏瓣膜的同种异体反应性。...

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我们演示了如何建立将肺动脉根部植入降主动脉的小鼠模型，以模拟Ross手术。该模型可用于评估肺动脉自体移植物在体循环位置下的中长期重塑情况，为开发促进其适应性的治疗策略提供基础。...

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大鼠原位肾移植模型有助于研究肾同种异体移植物排斥反应的机制。本模型采用肾植入的端对端吻合以及输尿管-膀胱的端对侧“隧道”法吻合技术，在不影响下肢血液供应和静脉回流的前提下，提高了受体的存活率。...

一种用于肾移植排斥反应研究的大鼠原位肾移植模型

本研究展示了一种可重复的大鼠异位腹腔心脏移植技术，初学者可学习并实施该技术。此外，通过进行大鼠异位腹腔心脏移植并在供体心脏获取后使用导丝损伤其主动脉瓣，可建立一种新型的大鼠主动脉瓣反流模型。...

改良大鼠异位腹腔心脏移植术及新型主动脉瓣反流模型

本研究展示了一种由内皮-间充质转化诱导纤维化的动物模型，该模型见于重度主动脉瓣狭窄或左心发育不良综合征等先天性心脏缺陷，可用于进行详细的组织学组织评估、调控信号通路的鉴定以及治疗方案的测试。...

用于研究内皮-间充质转化的新生大鼠异位心脏移植模型

学习大鼠主动脉原位移植模型，用于研究移植血管病变的发展机制。该方法通过PVG至CI品系组合建立可靠模型，帮助科研人员深入理解慢性排斥反应中的新内膜形成过程。

原位主动脉移植：一种研究慢性血管病变发生的大鼠模型

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