효소로 코팅된 미세전극 어레이를 사용한 In vivo 실시간 글루타메이트 모니터링

두

개골이 노출된 상태에서 정위 고정 프레임에 고정된 마취된 마우스로 시작합니다.

두개골 기준점을 식별한 다음 대상 좌표를 표시합니다.

표시 주위에 구멍을 뚫고 뼈 플랩을 제거하여 뇌 조직을 노출시키고 표면을 청소합니다.

글루타메이트 산화효소 효소로 코팅된 다중 전극 어레이 또는 MEA와 마이크로피펫을 정위 프레임에 부착합니다.

회로를 완성하기 위해 뇌와 액체 접촉을 유지하면서 기준 전극을 MEA에서 멀리 놓습니다.

마이크로피펫에 글루타메이트 용액을 채웁니다.

이제 MEA와 마이크로피펫을 뉴런과 성상세포가 풍부한 뇌 조직으로 낮춥니다. MEA의 기준선 전기 신호를 기록합니다.

글루타메이트 용액을 주입하여 MEA를 포함하는 세포외 공간의 글루타메이트 수치를 빠르게 증가시킵니다.

MEA의 글루타메이트 산화효소는 글루타메이트를 산화시켜 전기 신호를 생성합니다.

성상세포가 글루타메이트를 흡수함에 따라 세포외 글루타메이트 수치가 감소하여 신호가 감소하고 실시간 글루타메이트 모니터링이 가능합니다.

이 절차에서 동물을 정위 고정 장치에 넣고 에어 바를 사용하여 머리를 안정시킵니다. 동물이 고정되어 있고 머리가 움직이지 않는지 확인하십시오. 그런 다음 멸균 면 어플리케이터를 사용하여 눈 연고를 바릅니다. 그런 다음 트리머로 머리를 면도하고 작은 수술용 가위를 사용하여 귀 근처의 털을 제거합니다. 그런 다음 요오드와 알코올을 두피에 세 번 번갈아 가며 바릅니다. 그런 다음 두피 중앙을 절개하고 피부를 펴십시오.

멸균 면봉 팁으로 혈액을 흡수하고 과산화수소를 도포하여 브레그마와 람다의 출현을 촉진합니다. bregma와 lambda의 등쪽-복부 및 내측-외측 좌표를 측정하여 머리가 올바른 위치에 있는지 확인하십시오. bregma의 좌표를 0으로 설정하고 대상 좌표를 표시합니다. 다음으로 표시 주위를 뚫습니다. 그런 다음 MEA를 헤드 스테이지에 부착합니다. 피펫에 원하는 첫 번째 용액을 다시 채웁니다. 배출되는 용액을 검사할 수 있도록 용액 없이 피펫에 틈을 두십시오.

그런 다음 튜브를 유리 마이크로피펫에 부착합니다. MEA가 첨부된 bregma를 찾아 좌표를 0으로 설정합니다. MEA를 원하는 좌표로 이동하고 팁이 뇌에 닿을 때까지 MEA를 천천히 내립니다. 다음으로, 등쪽-복부 좌표를 0으로 만든 다음 MEA를 뇌로 천천히 낮춥니다. 기준 전극을 MEA에서 멀리 떨어진 위치에 배치하여 회로를 완성하기 위해 뇌와 여전히 액체 접촉