Name: 노화와 아밀로이드 병리 동안 시냅틱 얼터 레이션의 연구에 대한 고양이와 트렌스 제닉 마우스의 급성 Hippocampal 조각의 준비 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-03-23T14:15:00.000+00:00
Duration: 14 min 57 s
Description: 학습하세요 노화된 쥐와 트랜스제닉 마우스의 해마 조각을 준비하여 시냅스 기능과 가소성을 연구하는 방법을. 이 기술은 노화 및 아밀로이드 병리 동안 시냅스 변화를 평가하는 데 필수적입니다.

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NIH 그랜트 AG027297, 켄터키 척수 및 머리 부상 연구 신뢰에서 수상하고, 클레 버그 재단의 선물에 의해 지원 작동합니다.

<ol><li>Norris, C. M., Halpain, S., Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alterations+in+the+balance+of+protein+kinase%2Fphosphatase+activities+parallel+reduced+synaptic+strength+during+aging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Alterations in the balance of protein kinase/phosphatase activities parallel reduced synaptic strength during aging.</a> J Neurophysiol. 80, 1567-1570 (1998).</li>
<li>Norris, C. M., Korol, D. L., Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+susceptibility+to+induction+of+long-term+depression+and+long-term+potentiation+reversal+during+aging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Increased susceptibility to induction of long-term depression and long-term potentiation reversal during aging.</a> J Neurosci. 16, 5382-5392 (1996).</li>
<li>Norris, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampal+%27zipper%27+slice+studies+reveal+a+necessary+role+for+calcineurin+in+the+increased+activity+of+L-type+Ca%282%2B%29+channels+with+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Aging%22%5BJournal%5D)">Hippocampal 'zipper' slice studies reveal a necessary role for calcineurin in the increased activity of L-type Ca(2+) channels with aging.</a> Neurobiol Aging. 31, 328-338 (2010).</li>
<li>Burke, S. N., Barnes, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Senescent+synapses+and+hippocampal+circuit+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Senescent synapses and hippocampal circuit dynamics.</a> Trends Neurosci. 33, 153-161 (2010).</li>
<li>Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+homeostasis+and+modulation+of+synaptic+plasticity+in+the+aged+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Calcium homeostasis and modulation of synaptic plasticity in the aged brain.</a> Aging Cell. 6, 319-325 (2007).</li>
<li>Foster, T. C., Norris, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-associated+changes+in+Ca%282%2B%29-dependent+processes%3A+relation+to+hippocampal+synaptic+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Age-associated changes in Ca(2+)-dependent processes: relation to hippocampal synaptic plasticity.</a> Hippocampus. 7, 602-612 (1997).</li>
<li>Thibault, O., Gant, J. C., Landfield, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expansion+of+the+calcium+hypothesis+of+brain+aging+and+Alzheimer%27s+disease%3A+minding+the+store%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Expansion of the calcium hypothesis of brain aging and Alzheimer's disease: minding the store.</a> Aging Cell. 6, 307-317 (2007).</li>
<li>Demuro, A., Parker, I., Stutzmann, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+signaling+and+amyloid+toxicity+in+Alzheimer+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Calcium signaling and amyloid toxicity in Alzheimer disease.</a> J Biol Chem. 285, 12463-12468 (2010).</li>
<li>Green, K. N., LaFerla, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Linking+calcium+to+Abeta+and+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Linking calcium to Abeta and Alzheimer's disease.</a> Neuron. 59, 190-194 (2008).</li>
<li>Kumar, A., Thinschmidt, J. S., Foster, T. C., King, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+effects+on+the+limits+and+stability+of+long-term+synaptic+potentiation+and+depression+in+rat+hippocampal+area+CA1%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Aging effects on the limits and stability of long-term synaptic potentiation and depression in rat hippocampal area CA1.</a> J Neurophysiol. 98, 594-601 (2007).</li>
<li>Norris, C. M., Halpain, S., Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversal+of+age-related+alterations+in+synaptic+plasticity+by+blockade+of+L-type+Ca2%2B+channels%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Reversal of age-related alterations in synaptic plasticity by blockade of L-type Ca2+ channels.</a> J Neurosci. 18, 3171-3179 (1998).</li>
<li>Norris, C. M., Scheff, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recovery+of+afferent+function+and+synaptic+strength+in+hippocampal+CA1+following+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Recovery of afferent function and synaptic strength in hippocampal CA1 following traumatic brain injury.</a> J Neurotrauma. 26, 2269-2278 (2009).</li>
<li>Sama, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-1beta-dependent+signaling+between+astrocytes+and+neurons+depends+critically+on+astrocytic+calcineurin%2FNFAT+activity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Interleukin-1beta-dependent signaling between astrocytes and neurons depends critically on astrocytic calcineurin/NFAT activity.</a> J Biol Chem. 283, 21953-21964 (2008).</li>
<li>Ye, H., Jalini, S., Mylvaganam, S., Carlen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+large-conductance+Ca%282%2B%29-activated+K%28%2B%29+channels+depresses+basal+synaptic+transmission+in+the+hippocampal+CA1+area+in+APP+%28swe%2Find%29+TgCRND8+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Aging%22%5BJournal%5D)">Activation of large-conductance Ca(2+)-activated K(+) channels depresses basal synaptic transmission in the hippocampal CA1 area in APP (swe/ind) TgCRND8 mice.</a> Neurobiol Aging. 31, 591-604 (2010).</li>
<li>Bear, M. F., Malenka, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+plasticity%3A+LTP+and+LTD%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Synaptic plasticity: LTP and LTD.</a> Curr Opin Neurobiol. 4, 389-399 (1994).</li>
<li>Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+hippocampal+synaptic+plasticity+in+age-related+memory+decline%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Brain+Res+Rev%22%5BJournal%5D)">Involvement of hippocampal synaptic plasticity in age-related memory decline.</a> Brain Res Brain Res Rev. 30, 236-249 (1999).</li>
<li>Foster, T. C., Kumar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Susceptibility+to+induction+of+long-term+depression+is+associated+with+impaired+memory+in+aged+Fischer+344+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Learn+Mem%22%5BJournal%5D)">Susceptibility to induction of long-term depression is associated with impaired memory in aged Fischer 344 rats.</a> Neurobiol Learn Mem. 87, 522-535 (2007).</li>
<li>Hsu, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alterations+in+the+balance+of+protein+kinase+and+phosphatase+activities+and+age-related+impairments+of+synaptic+transmission+and+long-term+potentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Alterations in the balance of protein kinase and phosphatase activities and age-related impairments of synaptic transmission and long-term potentiation.</a> Hippocampus. 12, 787-802 (2002).</li>
<li>Vouimba, R. M., Foy, M. R., Foy, J. G., Thompson, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((17beta-estradiol+suppresses+expression+of+long-term+depression+in+aged+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Bull%22%5BJournal%5D)">17beta-estradiol suppresses expression of long-term depression in aged rats.</a> Brain Res Bull. 53, 783-787 (2000).</li>
<li>Abdul, H. M., Furman, J. L., Sama, M. A., Mathis, D. M., Norris, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NFATs+and+Alzheimer%27s+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">NFATs and Alzheimer's Disease.</a> Mol Cell Pharmacol. 2, 7-14 (2010).</li>
<li>Abdul, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cognitive+decline+in+Alzheimer%27s+disease+is+associated+with+selective+changes+in+calcineurin%2FNFAT+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Cognitive decline in Alzheimer's disease is associated with selective changes in calcineurin/NFAT signaling.</a> J Neurosci. 29, 12957-12969 (2009).</li>
<li>Anantharaman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beta-amyloid+mediated+nitration+of+manganese+superoxide+dismutase%3A+implication+for+oxidative+stress+in+a+APPNLH%2FNLH+X+PS-1P264L%2FP264L+double+knock-in+mouse+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Beta-amyloid mediated nitration of manganese superoxide dismutase: implication for oxidative stress in a APPNLH/NLH X PS-1P264L/P264L double knock-in mouse model of Alzheimer's disease.</a> Am J Pathol. 168, 1608-1618 (2006).</li>
<li>Gengler, S., Hamilton, A., Holscher, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+plasticity+in+the+hippocampus+of+a+APP%2FPS1+mouse+model+of+Alzheimer%27s+disease+is+impaired+in+old+but+not+young+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Synaptic plasticity in the hippocampus of a APP/PS1 mouse model of Alzheimer's disease is impaired in old but not young mice.</a> PLoS One. 5, e9764-e9764 (2010).</li>
<li>Stringer, J. L., Lothman, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+effects+of+extracellular+calcium+concentrations+on+hippocampal+pyramidal+cell+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">In vitro effects of extracellular calcium concentrations on hippocampal pyramidal cell responses.</a> Exp Neurol. 101, 132-146 (1988).</li>
<li>Landfield, P. W., Pitler, T. A., Applegate, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+high+Mg2%2B-to-Ca2%2B+ratios+on+frequency+potentiation+in+hippocampal+slices+of+young+and+aged+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">The effects of high Mg2+-to-Ca2+ ratios on frequency potentiation in hippocampal slices of young and aged rats.</a> J Neurophysiol. 56, 797-811 (1986).</li>
<li>Ames, A. 3rd, Sakanoue, M., Endo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NA%2C+K%2C+CA%2C+MG%2C+AND+C1+CONCENTRATIONS+IN+CHOROID+PLEXUS+FLUID+AND+CISTERNAL+FLUID+COMPARED+WITH+PLASMA+ULTRAFILTRATE%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">NA, K, CA, MG, AND C1 CONCENTRATIONS IN CHOROID PLEXUS FLUID AND CISTERNAL FLUID COMPARED WITH PLASMA ULTRAFILTRATE.</a> J Neurophysiol. 27, 672-681 (1964).</li>
<li>Gant, J. C., Sama, M. M., Landfield, P. W., Thibault, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+and+simultaneous+emergence+of+multiple+hippocampal+biomarkers+of+aging+is+mediated+by+Ca2%2B-induced+Ca2%2B+release%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Early and simultaneous emergence of multiple hippocampal biomarkers of aging is mediated by Ca2+-induced Ca2+ release.</a> J Neurosci. 26, 3482-3490 (2006).</li>
<li>Thibault, O., Hadley, R., Landfield, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+postsynaptic+%5BCa2%2B%5Di+and+L-type+calcium+channel+activity+in+aged+hippocampal+neurons%3A+relationship+to+impaired+synaptic+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Elevated postsynaptic [Ca2+]i and L-type calcium channel activity in aged hippocampal neurons: relationship to impaired synaptic plasticity.</a> J Neurosci. 21, 9744-9756 (2001).</li>
<li>Thibault, O., Landfield, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increase+in+single+L-type+calcium+channels+in+hippocampal+neurons+during+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Increase in single L-type calcium channels in hippocampal neurons during aging.</a> Science. 272, 1017-1020 (1996).</li>
<li>Stutzmann, G. E., Caccamo, A., LaFerla, F. M., Parker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dysregulated+IP3+signaling+in+cortical+neurons+of+knock-in+mice+expressing+an+Alzheimer%27s-linked+mutation+in+presenilin1+results+in+exaggerated+Ca2%2B+signals+and+altered+membrane+excitability%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Dysregulated IP3 signaling in cortical neurons of knock-in mice expressing an Alzheimer's-linked mutation in presenilin1 results in exaggerated Ca2+ signals and altered membrane excitability.</a> J Neurosci. 24, 508-513 (2004).</li>
<li>Stutzmann, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+ryanodine+receptor+recruitment+contributes+to+Ca2%2B+disruptions+in+young%2C+adult%2C+and+aged+Alzheimer%27s+disease+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Enhanced ryanodine receptor recruitment contributes to Ca2+ disruptions in young, adult, and aged Alzheimer's disease mice.</a> J Neurosci. 26, 5180-5189 (2006).</li>
<li>Lee, H. K., Min, S. S., Gallagher, M., Kirkwood, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NMDA+receptor-independent+long-term+depression+correlates+with+successful+aging+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">NMDA receptor-independent long-term depression correlates with successful aging in rats.</a> Nat Neurosci. 8, 1657-1659 (2005).</li>
<li>McNaughton, B. L., Douglas, R. M., Goddard, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+enhancement+in+fascia+dentata%3A+cooperativity+among+coactive+afferents%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Synaptic enhancement in fascia dentata: cooperativity among coactive afferents.</a> Brain Res. 157, 277-293 (1978).</li>
</ol>

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이 프로토콜에 제시된 단계는 뇌의 해부가 젊은 성인 쥐처럼, ​​노인 최소한으로 신속하게 효율적으로 수행하는 보험에 가입하는 데 도움이됩니다. 우리는 또한 LTP와 LTD에 자신의 슬라이스 연구를 설정하는 초보자를위한 충분한 세부 사항을 제공합니다. 노화와 신경 기능과 소성의 광고 변경 추가 탐사가 귀하의 목표 중 하나가있다면, 더 배려를받을 자격이 상기에 언급한 건 요즘 적어도 두 개의 다른 방법 론적 문제가있다. 첫째, 여러 실험실 보여주 그 칼슘 2 + : Mg2 ACSF가 hippocampal 조각 2,10,24,25의 유도 시냅스 소성에 표시된 영향을 미칠 수있는 기록에 + 비율. 포유류의 CSF에서 CA 2 + : Mg2 + 비율이 약 (예 : 26를 참조)입니다. 그러나, ACSF 칼슘 2 + : Mg2 + 가까이 2 비율이 일반적으로 시냅스 기능과 소성의 슬라이스 연구에 사용됩니다. 초기 연구에서는 이러한 행위는 아마 LTP의 유도를 최적화하기 위해 적응되었다, 그때 이후 모든 소성 연구를위한 루틴이되었습니다. 그러나, 이러한 행위 때문에 칼슘의 연결 2 + 규제에 잘 특징 차이 고령화 및 광고 연구에 문제가있을 수 있습니다. 특히, CA 2 + 유입 및 / 또는 칼슘 2 + 유도된 칼슘 2 + - 릴리스의 연결을 활성화 3,27-31 동안 세 쥐 및 / 또는 광고 모델 마우스에서 고가입니다. LTD의 유도는 ACSF 칼슘 2 + 수준의 미묘한 변화에 특히 민감합니다. Mg2 가까이 두 + 비율이 성인에 강력한 회사를 감찰하러 온 적도에서 : 2mM 칼슘 2 + 2 MM Mg2 +, 노인,하지만이 성인 동물 젊은 없습니다 LTD에서 일반적으로 결과 중에 칼슘 2를 사용하는 연구 +를 사용하여 우리의 프로토콜, 32 세 쥐에서 감소 회사와 함께 나이 차이 2,10 또는 부재. 이러한 관찰은 노인과 젊은 성인 동물 + 종속 소성 칼슘 2 비교하면 조심스럽게 ACSF 칼슘 2 + 및 Mg2 + 수준을 고려하는 필요성을 강조 표시합니다. 두 번째 방법 론적 문제는 postsynaptic 탈분극 33 시냅스 강도 가능 노화 / 유전자형의 차이에 LTP의 강한 의존성에 관한. 전형적인 LTP 실험, 기본 및 LTP의 자극 강도는 일반적으로 반 최대한의 (또는 3 분기 최대한) EPSP 진폭을 생산하도록 조정됩니다. 잠재적인 문제는 세 쥐와 APP/PS1 쥐가 일반적으로베이스 라인 EPSP 가치도 세 쥐와 APP/PS1 생쥐에 작은 것입니다 즉, 자신의 젊은 및 / 또는 야생 타입 대응에 상대적으로 시냅스 강도를 감소 보여주는 것입니다. 작은 EPSPs는 LTP 33 유도를위한 확률 감소의 결과로, LTP의 자극 동안 적은 탈분극로 번역 수도 있습니다. 때문에 잠재적인 혼란, 그것이 동물들이 처리량 적자, 소성 적자 또는 둘 모두를 전시 여부를 확인하기가 어렵습니다. 즉, 세 및 / 또는 APP/PS1 생쥐에서 LTP 유도 메커니즘 (NO 소성 적자) 기능 그대로 수 있지만 충분 이러한 조건 하에서 (처리량 적자) 자극. 처리량 및 소성에 대한 메커니즘에 대한 메커니즘은 특정 pharmacologic 치료에 매우 다르게 반응 수도 있으므로이 구분은 중요합니다. 우리는 이전 LTP의 자극에 대한 모든 조각에 걸쳐 동일한 수준 (예 : 1 MV)로 EPSP 진폭을 정규화하여 LTP 유도에 감소 처리량의 영향을 최소화하려고합니다. 다른 전략뿐만 아니라 효과 (LTP의 자극 동안 그룹 전체의 막 잠재력을 맞춰야 전압 또는 전류 클램프의 예 사용), 이러한 동물 모델에서 LTP를 조사 때 고려해야 수 있습니다.

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> 어부 </td><td> BP358 - 1 </td></tr><tr><td> KCl </td><td> 어부 </td><td> BP366 - 500 </td></tr><tr><td> KH 2 PO 4 (일염기의) </td><td> 시그마 </td><td> P5379 - 100G </td></tr><tr><td> MgSO 4 </td><td> 시그마 </td><td> M2643 - 500G </td></tr><tr><td> CaCl 2 (이수화물) </td><td> 시그마 </td><td> C3306 - 250G </td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td> 어부 </td><td> S233 - 500 </td></tr><tr><td> C 6 H 12 O 6 (덱스 트로 오스) </td><td> 어부 </td><td> BP350 - 1 </td></tr></tbody></table> 표 1. 시약이 필요 <table border="1"><tbody><tr><td> 장비의 명칭 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> Erlenmeyer Flasks </td><td> 어부 </td><td> FB - 500-2000 FB - 500-1000 </td><td></td></tr><tr><td> 수족관 버블러 </td><td></td><td></td><td> oxygenating 미디어에 사용됩니다. 대부분의 애완 동물 상점에서 사용 가능 </td></tr><tr><td> 50 ML 유리 비이커 </td><td> 어부 </td><td> 02 - 540G </td><td> ACSF의 뇌 storarge에 대한 </td></tr><tr><td> Parafilm </td><td> 어부 </td><td> 13-374-10 </td><td></td></tr><tr><td> 스몰 애니멀 기요틴 </td><td> 세계 정밀 계측기 (WPI) </td><td> DCAP - M </td><td></td></tr><tr><td> 플랫 종이 타월 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> # 11 피더서 외과 블레이드 </td><td> 어부 </td><td> 08-916 - 5B </td><td></td></tr><tr><td> 비비 뼈 가위 </td><td> 파인 과학 도구 (FST) </td><td> 16044-10 </td><td></td></tr><tr><td> Lempert Rongeurs </td><td> Roboz </td><td> RS - 8321 </td><td> 쥐에 사용 </td></tr><tr><td> 프리드먼 - 피어슨 Rongeurs </td><td> FST </td><td> 16020-14 </td><td> 마우스 또는 쥐에 사용 </td></tr><tr><td> 해마 도구 </td><td> FST </td><td> 10099-15 </td><td></td></tr><tr><td> 숟가락 </td><td></td><td></td><td> 플라스틱 찻숟가락 할 것입니다 </td></tr><tr><td> 주걱 </td><td> 어부 </td><td> 21-401 - 25A </td><td> 주걱 </td></tr><tr><td> 외과 홍채 가위 </td><td> FST </td><td> 14058-09 </td><td></td></tr><tr><td> 플라스틱 전송 pipets </td><td> 어부 </td><td> 13-711-43 </td><td></td></tr><tr><td> 110mm 왓먼 필터 용지 </td><td> 어부 </td><td> 09 - 805E </td><td> 왓먼 고양이. 1001-110 </td></tr><tr><td> 유리 페트리 접시 </td><td> 어부 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Leica VT1000P 매뉴얼 마이크로톰 진동 </td><td> Vibratome </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 0.1mm FA ​​- 10 깃털 S 블레이드 </td><td> 테드 펠라 </td><td> 121-9 </td><td> 0.1mm FA ​​- 10 깃털 S 블레이드 </td></tr><tr><td> Borosilicate 유리 파스퇴르 Pipet (고무 전구 포함) </td><td> 어부 </td><td> 13-678 - 20A </td><td> 조각 전송 : 도움말은 큰 여는 부러 및 열 광택입니다 </td></tr><tr><td> 35mm Polysterine 문화 요리 </td><td> 코닝 </td><td> 430588 </td><td> 절개 후 슬라이스를 수집하기 위해 사용 </td></tr></tbody></table> 표 2. 도구 및 해부를위한 자료 <table border="1"><tbody><tr><td> 장비 / 재료 </td><td> 회사 </td><td> 댓글 (옵션) </td></tr><tr><td> 홀딩 챔버 </td><td> 사용자가 내장 </td><td></td></tr><tr><td> P - 97 수평 피펫 풀러 </td><td> 서터 악기 (주) </td><td></td></tr><tr><td> 진동 절연 테이블 </td><td> 기술 제조 주식 회사 (TMC) </td><td></td></tr><tr><td> 패러데이 케이지 </td><td> 사용자가 만든 </td><td></td></tr><tr><td> 히프 권총과 Pyrex 흡인기 바틀 (제품 # 1220 - 1L) </td><td> 코닝 </td><td></td></tr><tr><td> 레귤레이터와 중력 - contolled IV 세트 (제품 # 2C8891) </td><td> 백스터 </td><td></td></tr><tr><td> 중앙 진공 라인 </td><td></td><td> 가장 현대적인 실험실에서 사용 가능 </td></tr><tr><td> 95% O 5분의 2 %의 CO 2 기체 혼합물 </td><td> 스코틀랜드 사람T - 그로스 주식 회사 </td><td></td></tr><tr><td> TygonTM 랩 튜브 O 2 / CO 2 전달 </td><td> 피셔 사이 언티픽 </td><td> 무독성, 비 산화, 다양한 크기의 제공됩니다. </td></tr><tr><td> 이클립스 E600FN 현미경 </td><td> 니콘 </td><td> infared 필터 및 GFP, DS - Red2 필터 근처 10X와 40x 목표와 </td></tr><tr><td> 쿨 스냅 ES 디지털 카메라 </td><td> Photometrics </td><td> 쿨 스냅 ES 디지털 카메라 </td></tr><tr><td> 형광 조명기을 X - 인용 </td><td> EXFO </td><td> 형광 조명기을 X - 인용 </td></tr><tr><td> 현미경 플랫폼 </td><td> 시스키유 </td><td> 사용자가 조립 </td></tr><tr><td> RC - 22 잠수함 기록 챔버 (제품 # 64-0228) </td><td> 워너 인 스트 루먼트 (WI) </td><td> P - 1 플랫폼 무대 어댑터 (워너에서 제품 # 64-0277)이 필요합니다 </td></tr><tr><td> TC2BIP 2/3Ch 온도 컨트롤러 </td><td> 셀 Microcontrols </td><td> TC2BIP 2/3Ch 온도 컨트롤러 </td></tr><tr><td> 4 축 매뉴얼 미니의 속이는 사람 </td><td> 시스키유 </td><td></td></tr><tr><td> 플래티넘 이리듐 와이어 (0.002)을 (항목 # PTT0203) </td><td> WPI </td><td></td></tr><tr><td> A365 자극 아이 솔 레이터 </td><td> WPI </td><td> A365 자극 아이 솔 레이터 </td></tr><tr><td> 700b 앰프를 Multiclamp </td><td> 액슨 인 스트 루먼트 </td><td></td></tr><tr><td> Digidata 1322A A / D 변환기 </td><td> 액슨 인 스트 루먼트 </td><td></td></tr><tr><td> PClamp 소프트웨어 </td><td> 액슨 인 스트 루먼트 </td><td></td></tr><tr><td> 개인용 컴퓨터 (펜티엄 4) </td><td> 작은 골짜기 </td><td></td></tr></tbody></table> 표 3. 전기 생리학 장비 및 재료

노화와 아밀로이드 병리 동안 시냅틱 얼터 레이션의 연구에 대한 고양이와 트렌스 제닉 마우스의 급성 hippocampal 조각의 준비

Preparation of Acute Hippocampal Slices from Rats and Transgenic Mice for the Study of Synaptic Alterations during Aging and Amyloid Pathology

쥐 hippocampal 슬라이스 준비 아마 포유류의 시냅스 기능과 소성 조사를위한 가장 광범위하게 사용되는 도구입니다. 해마는 쥐와 생쥐에서 빠르고 쉽게 추출하여 슬라이스는 산소 인공 뇌척수의 시간 동안 가능한 유지하실 수 있습니다. 또한, 기본 electrophysisologic 기술은 쉽게 hippocampal 조각의 시냅스 기능의 조사에 적용하고 인지적 손상에 가장 적합한 생체의 일부를 제공하고 있습니다. hippocampal 슬라이스는 학습과 기억에 관련된 신경 소성 메카니즘 연구 특히 인기가있다. hippocampal 조각 (또는 부족 그것의)에서 시냅스 효능의 장기 potentiation과 우울증 (LTP와 LTD)의 유도에 변경이 자주 cognitively 장애인 동물 및 / neurologic 표현형을 설명하기 위해 또는 행동의 메커니즘을 평가하는 데 사용됩니다 nootropic 화합물. 이 문서는 우리가 두뇌 노화와 알츠하이머 질환 (AD) 1-3과 관련된 시냅스 변경의 연구를위한 유전자 변형 쥐 및 생쥐에서 hippocampal 조각 준비 사용하는 절차를 설명합니다. 세 쥐 및 광고 모델 마우스의 사용은 그들의 연구에 젊은 쥐 및 / 또는 마우스를 사용하여 익숙한 연구자 도전의 고유한 집합을 표시할 수 있습니다. 세 쥐들이 두뇌 추출 및 / 또는 절개를 지연하고 따라서 시냅스 기능과 소성의 실제 나이 차이를 부정하거나 과장 수있는 젊은 쥐 및 생쥐보다 두꺼운 두개골과 강하다는 결합 조직을 보유하고 있습니다. 노화와 아밀로이드 병리도 다시 physiologic 평가에서 그려진 모든 inferences을 복잡 절개 절차 동안 지속 hippocampal 손상을 더욱 심하게하다 수 있습니다. 여기, 우리는 이러한 문제를 최소화하기 위해 절개 절차 동안 촬영한 단계에 대해 설명합니다. &quot;건강&quot;과 쥐 및 생쥐에서 &quot;건강에 해로운 &#39;조각 인수 시냅스 응답의 예는 물론 대표적인 시냅스 소성 실험으로 제공됩니다. 이러한 동물 모델 (예 : 레코딩 솔루션 구성 요소, 자극 매개 변수)에 시냅스 기능에 다른 방법 론적 요소의 가능한 영향도 설명합니다. 이 문서의 초점은 생리를 슬라이스에 세 쥐와 유전자 변형 마우스, 초보자의 사용에있는 동안 쥐 모델의 다양한 사용하여 자신의 연구를 시작하려면 여기를 충분한 세부 사항을 찾을 수 있어야합니다.

이 문서는 뇌의 노화 및 알츠하이머 질환 같은 나이와 관련된 neurodegenerative 질병와 관련된 시냅스 변경의 연구를위한 유전자 변형 쥐 및 생쥐에서 hippocampal 조각 준비 절차를 설명합니다.

노화와 아밀로이드 병리 동안 시냅틱 얼터 레이션의 연구에 대한 고양이와 트렌스 제닉 마우스의 급성 Hippocampal 조각의 준비

설치류 해마 슬라이스 제작법은 아마도 포유류의 시냅스 기능과 가소성을 연구하는 데 가장 널리 사용되는 도구일 것입니다. ...

설치류의 해마 슬라이스는 포유류의 시냅스 기능 및 가소성 연구에 빈번하게 사용됩니다. 본 영상에서는 젊은 쥐보다 두개골이 더 두껍고 결합 조직이 더 질긴 노령 쥐와 생쥐로부터 슬라이스를 얻고 연구하는 프로토콜을 선보입니다. 이러한 특징들은 뇌 추출 및 절단 과정을 지연시킬 수 있으며, 결과적으로 시냅스 기능 및 가소성에 나타나는 실제 연령별 차이를 부정하거나 과장하게 만들 수 있습니다.또한, 노화 및 아밀로이드 병증은 해부 과정 중 발생한 해마 손상을 악화시켜 생리적 평가로부터 도출되는 추론을 더욱 어렵게 만들 수 있습니다. 본 시연에서는 이러한 문제를 최소화하기 위해 추출 및 해부 과정에서 취한 조치들에 대해 논의합니다. 우선, 뇌를 신속하게 추출하여 얼음이 담긴 차갑고 칼슘 함량이 낮은 인공 뇌척수액에 넣습니다.그 후 해마 영역을 얼음이 채워진 차가운 해부대 위에서 조심스럽게 제거하고, 진동 절편기를 사용하여 해마 절편을 제작한 뒤 산소가 공급된 칼슘 함유 A CSF에서 배양합니다. 마지막으로 해마의 여러 하위 영역에서 시냅스 전위와 전류를 유도하고 기록하며, 얻어진 결과는 노화 및/또는 알츠하이머 유사 병증이 시냅스 기능과 가소성에 미치는 영향을 보여줍니다. 이 기술의 적절한 활용은 노화 관련 인지 기능 저하 및 알츠하이머병으로 인한 치매 연구에 중요한 의미를 갖습니다.이는 시냅스 기능 장애가 이러한 임상 증상의 가장 초기 바이오마커 중 하나이기 때문에 본 절차를 통해 이를 입증하고자 함입니다. 오늘은 실험실의 책임연구자인 Chris Norris 박사가 커다란 싱크대 옆에서 진행하겠습니다. 뇌 제거 및 해마 분리를 위한 해부 영역을 준비하십시오.접은 종이 타월, 11번 메스 날, BB 가위, 골 겸자(bone forceps) 및 fine surgical tool사의 특수 이중 스패튤라인 해마 도구를 준비하십시오. 또한 소형 수술용 가위, 얇은 플라스틱 스패튤라, 페이퍼 피펫, watman 여과지, 얼음이 채워진 100mm 유리 페트리 접시, 플라스틱 스푼, 그리고 일부 해동된 칼슘 제거 CSF(뇌척수액)가 담긴 비커를 배치하십시오. 파라핀으로 덮인 CSF를 준비하십시오.쥐의 안락사(참수) 후, 최대한 신속하게 뇌를 적출해야 합니다. 머리를 종이 타월 위에 놓고, 메스를 사용하여 비골에서 후두골까지 두피 중앙을 빠르게 절개합니다.피부 근육을 완전히 절개하여 두개골 봉합선이 완전히 드러나게 하십시오. 머리를 단단히 잡고 정중선 봉합선을 따라 후두판, 두정판 및 전두판을 절개하십시오. 이때 아래쪽 가위가 두개골 내면에 밀착되도록 유지하여 뇌에 닿지 않게 주의하십시오.이는 의도치 않은 패임 현상을 방지하는 데 매우 중요합니다. 다음 슬라이드입니다. 왼쪽 두정판 아래로 Ron 鉗子(포셉)를 넣고 조(jaw)를 함께 조인 다음, 위쪽과 앞쪽으로 굴리면서 두정판과 후두판을 떼어냅니다.필요한 경우, Ron-jurors를 사용하여 왼쪽 전두판(frontal plate)도 제거하십시오. 반대쪽 반구에 대해서도 동일하게 반복합니다. 판이 제거되면, Ron-jurors나 가위를 사용하여 측두판(temporal plates)에 부착되어 뇌 표면으로 늘어져 있는 경막(dura mater)을 조심스럽게 당겨 제거하거나 절단하십시오.이제 Ron jurors를 뇌와 오른쪽 측두판 사이에 밀어 넣고, 두개골 쪽으로 압력을 가하며 뇌에서는 멀어지도록 유지합니다. 바스락거리는 소리가 들리거나 느껴질 때까지 측두판을 짜내듯 비틀어 떼어냅니다. 왼쪽 면에도 동일하게 반복합니다.해마 도구 앞쪽으로 넓은 스파툴라를 뇌의 복측 표면과 두개골 바닥판 사이에 밀어 넣어 뇌 아래에 완전히 위치시킵니다. 해마 도구를 사용하여 손상되지 않은 뇌신경을 절단하기 위해 스파툴라를 좌우 및 전후로 몇 번 움직입니다. 뇌를 떠내어 칼슘이 없는 A CSF에 담근 후 파라필름으로 덮어 약 1분 동안 냉각시킵니다.해마를 추출하려면, 스푼을 사용하여 A CSF에서 뇌를 꺼내어 얼음처럼 차가운 페트리 접시 뚜껑 위의 CSF로 적신 watman paper 위에 놓습니다. 메스 날을 사용하여 소뇌와 앞쪽 전두엽의 약 4분의 1을 제거합니다. 이제 대뇌 반구 사이의 틈을 따라 절개하여 두 반구를 완전히 분리합니다.한쪽 뇌반구는 다시 A CSF 슬러시에 넣고, 다른 한쪽은 전두엽의 관상면이 아래를 향하도록 해부대 위에 세웁니다. 이때 흰색의 뇌줄기와 중뇌가 분홍색 또는 회색의 상층 피질과 쉽게 구별되어야 합니다. 중뇌에서 뇌량(calli)의 위치를 찾습니다. 이는 두 개의 흰색 돌기 모양으로 보이며 뇌의 상단에 위치합니다.이 방향에서 가위로 중뇌를 조심스럽게 고정한 다음, spatul라를 calli와 피질 사이에 밀어 넣습니다. 그런 다음 뇌줄기, 중뇌 및 시상을 조심스럽게 떼어냅니다. 결합 조직이나 혈관은 가위로 잘라내야 할 수 있습니다.스패튤라의 날카로운 가장자리를 사용하여 뇌궁(fornix)을 절단합니다. 이는 해마의 전배측 부분에 위치한 흰색 섬유 다발입니다. 가위를 사용하여 뇌줄기, 중뇌 및 시상을 뇌의 나머지 부분에서 완전히 분리하지 않도록 주의하며 천천히 계속 당겨줍니다.이 방향에서 해마 하단에 얕은 쌍곡선을 형성하는 흰색 섬유 다발이 보여야 합니다. 전이 피펫을 사용하여 FIA 아래의 틈새에 A CSF를 조심스럽게 분사하여 해마와 피질을 분리합니다. 이 틈새로 스패튤라를 조심스럽게 밀어 넣고, 가위로 뇌간, 중뇌 및 시상을 단단히 고정한 상태에서 해마를 부드럽게 굴려 떼어냅니다. 해마에 남아 있는 피질, 혈관 및 백질을 조심스럽게 제거합니다.몇 밀리리터의 A CSF로 세척합니다. 트랜스퍼 피펫을 사용하여 CSF 슬러시로 조직을 젖은 상태로 차갑게 유지합니다. 다음으로, 반대쪽 반구를 제거하고 쥐의 해마(hippo Campi)를 절편화하기 위해 해부 과정을 반복합니다.절단 단계와 칼날이 완전히 잠길 수 있도록 vibrato의 저장조에 얼음처럼 차가운 칼슘 없는 A CSF를 채웁니다. 메스를 사용하여 각 해마의 주둥이 쪽(rostral)과 꼬리 쪽(caudal) 끝부분을 절단하고, 각 해마의 치상회(dentate gyrus)가 서로 마주 보도록 주둥이 쪽 표면을 맞대어 세웁니다. 뇌 조직을 마운팅 블록에 접착제로 고정한 후 vibrato의 절단 단계로 옮깁니다.시냅스 생리학 실험의 경우, 400 µm 두께의 절편을 권장합니다. 넓은 입구의 전이 피펫을 사용하여 절편을 얼음처럼 차가운 칼슘 제거 CSF가 담긴 작은 페트리 접시로 옮기십시오.슬라이싱이 완료되면, 슬라이스를 산소화된 칼슘 함유 A CSF가 채워진 보관 챔버로 옮깁니다. 기본 세포외 기록을 수행하기 위해 챔버의 온도를 27°C에서 32°C까지 서서히 올립니다. 급성 슬라이스의 경우, 기록 챔버를 현미경 스테이지 위에 배치하여 예열된 A CSF가 유량 조절기를 통해 중력 공급되고 중앙 진공 라인을 통해 배출되도록 합니다.작은 페인트 브러시를 사용하여 절편을 기록 챔버로 옮겨 A CSF에 잠기게 하고 삽입된 망 위에 올려놓으십시오. 절편이 적응할 수 있도록 10분에서 15분 동안 기다립니다. 절편이 적응하는 동안 자극기 또는 자극 절연기를 켜고 출력을 0으로 낮춥니다.그 다음 자극 전극을 slice의 stratum radiatum 영역 내 ca 2와 ca 3 경계 부근에 배치합니다. 기록 전극을 ca 1 stratum radiatum으로 내려 slice의 표면에 살짝 닿게 합니다. 이때 자극기의 출력 레벨을 중간 정도로 높여줍니다.자극 격리기를 약 150 microamps로 설정합니다. 자극 아티팩트가 기록될 때까지 자극 전극을 작은 간격으로 천천히 내립니다. CA one에서, CA one 반응을 획득하면서 자극 전극과 기록 전극을 모두 일정한 간격으로 계속 천천히 내립니다.clamp X와 같은 소프트웨어 획득 프로그램을 사용하여 fiber volley 및 excitatory postsynaptic potential 진폭이 최대 수준에 도달할 때까지 시냅스 강도 곡선을 구축하십시오. 그런 다음 소프트웨어를 사용하여 다양한 강도의 자극을 전달하고 ca one에서 그에 따른 활성을 기록하십시오. 사용되는 자극 강도의 범위와 수준 수는 FV 또는 EPSP 값에 대해 도식화했을 때 시그모이드 곡선을 생성하기에 충분해야 합니다.다음으로 시냅스 가소성을 조사하기 위해, 1 mV의 반응이 유도되도록 각 슬라이스의 자극 강도를 재설정합니다. 0.033 Hz의 빈도로 EPSP 기저 자극을 시작하십시오. 기울기 값은 장기 강화(LTP) 또는 장기 억제(LTD)를 유도하기 전 최소 20분 동안 안정적으로 유지되어야 합니다.기초선 기간을 기록하려면 clamp X 파라미터 파일을 사용하여 30초마다 자극하고 기록하십시오. 다음으로 LTP를 유도하려면 별도의 파라미터 파일을 열어 100 Hz의 1초 훈련 자극을 주거나, LTD 유도를 위해 200 ms마다 200 Hz의 짧은 버스트 자극을 여러 번 주어 LTP를 유도하십시오. 1 Hz의 속도로 900회의 자극 펄스를 전달하십시오.자극 훈련 후 다시 기선 파라미터 파일로 전환하고 60분 이상 시냅스 반응을 수집합니다. 고주파 및 저주파 자극 전과 자극 60분 후에 얻은 EPSP 기울기 값을 비교하여, 시냅스 강도의 증가로 나타나는 LTP 또는 시냅스 강도의 감소로 나타나는 LTD의 존재 여부를 결정합니다. 이 두 과정은 학습과 기억의 핵심 메커니즘을 반영하는 것으로 널리 알려져 있습니다.여기 두 마리의 APP PS.One 생쥐에서 얻은 서로 다른 두 해마 슬라이스의 대표적인 시냅스 강도 곡선이 제시되어 있습니다. 한 마리의 생쥐에는 새로운 항염증 아데노 부속 바이러스 시약이 처리되었으며, 다른 한 마리에는 대조군 바이러스 시약이 처리되었습니다.처리 조건 전반에 걸쳐 유사한 수의 시냅스 전 섬유가 활성화되었을 때 확인할 수 있습니다. x축에 표시된 것과 같이 그룹들이 유사한 FV 진폭을 보일 때, 시약 a 처리 슬라이스의 곡선이 왼쪽으로 이동하며 이는 더 큰 EPSP 진폭을 나타냅니다. 이 데이터는 제시된 시약 a 처리 슬라이스에서 기저 시냅스 강도가 더 높다는 것을 입증합니다.동일한 절편을 대상으로 수행한 LTP 실험 결과입니다. 100 hertz 자극 전달 후 1시간의 기선(baseline) 기간 동안, 시약 a 절편의 EPSP 기울기 값이 대조군 절편에 비해 훨씬 크게 나타났으며, 이는 대조군 절편과 달리 시약 a 절편에서 LTP가 발생했음을 나타냅니다. 이 그림은 100 hertz 자극 전달 전과 60분 후의 시약 A 및 대조군 마우스 절편에서의 EPSP 파형을 보여줍니다.100 Hz 자극 후 기간 동안의 EPSP 기울기 증가는 시약 A가 처리된 슬라이스에서 매우 뚜렷하게 나타나며, 이는 LTP가 함께 유도되었음을 나타냅니다. 지금까지 제시된 그림의 실험 결과들은 시약 A가 시냅스 강도를 증가시키고 LTP 결손을 개선함을 보여줍니다. PP PS one 마우스에서의 이와 유사한 실험이 고령 쥐의 해마 LACS에서도 수행되었습니다.여기 새로운 항염증제로 처리한 쥐와 대조군 용매 시약으로 처리한 다른 쥐로부터 얻은 두 개의 서로 다른 해마 슬라이스에서 측정된 시냅스 강도 곡선이 제시되어 있습니다. 두 슬라이스의 곡선이 매우 유사하며, 이는 약물 A가 기저 시냅스 강도에 거의 영향을 미치지 않음을 나타냅니다. 이 그림은 동일한 슬라이스에서 수행된 LTD 실험의 결과를 보여줍니다.노화된 쥐의 전형적인 특징으로, vehicle 처리된 슬라이스에서 EPSP 기울기 값은 1 Hz 자극 후 1시간의 기저 기간 동안 감소합니다. 그러나 약물 A 처리 슬라이스의 EPSP 기울기 값은 감소가 거의 없거나 전혀 나타나지 않아 LTD가 부재함을 보여줍니다. 여기는 1 Hz 자극 전과 60분 후의 약물 A 및 vehicle 처리 쥐 슬라이스에서 얻은 EPSP 파형입니다. 1 Hz 자극 후 기간의 EPSP 기울기 감소는 vehicle 슬라이스에서는 매우 뚜렷하지만, 약물 A 슬라이스에서는 그렇지 않음을 함께 확인할 수 있습니다.이 수치들의 결과는 약물 a가 LTD 유도를 차단함으로써 고령 쥐의 가소성 차이를 개선하지만, 기초 시냅스 기능에는 영향을 미치지 않는다는 것을 보여줍니다. 이러한 데이터는 고령 쥐와 알츠하이머 모델 마우스의 시냅스 기능 및 가소성의 여러 매개변수가 실험적 처리에 의해 조절될 수 있음을 보여주며, 실험적 신약 및 시약의 인지 개선 또는 신경 보호 잠재력을 조사하는 데 있어 급성 해마 슬라이스의 유용성을 강조합니다. 이 절차를 수행할 때, 뇌를 추출하는 속도와 전기생리학적 측정을 위해 해마를 박리, 절편 제작 및 처리하는 정밀함과 세심함 사이의 균형을 맞추는 것이 중요함을 기억하십시오.

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

알츠하이머병 중 하나는 기능은 Aβ의...

β - 아밀로이드 Oligomeric의 준비 1-42</subHippocampal 조각에 시냅틱 소성 장애의>와 유도

출처: McLeod, F., et al. 해마 설치류 뇌 절편의 시냅스 밀도 평가. J. Vis. 특급 (2017). 이 비디오는 컨포칼 면역형광 분석을 사용하여 해마 뇌 절편에서 시냅스 마커를 시각화하는 방법을 보여줍니다. 슬라이스는 시냅스전 및 시냅스후 마커를 표적으로 하는 1차 항체로 면역 염색된 후 형광단 접합 2차 항체로 면역 염색됩니다. 그런 다음 표지된 마커는 공초점 현미경을 사용하여 시각화하여 공동 국소화를 통해 시냅스 구조를 평가합니다.

면역형광을 이용한 마우스 해마 절편의 시냅스 현미경 분석

이 논문은 준비하고 유지하는 완벽한 방법을...

장기 상승 작용으로 매우 안정하고 재현성 기록을위한 향상된 준비 및 해마 마우스 조각의 보존

이 비디오 기사는 설치류의 급성 해마 절편을 사용하여 CA1 피라미드 뉴런에서 시냅스 태깅, 캡처 및 교차 태깅과 같은 장기 가소성과 연관 과정을 연구하기 위한 실험 절차를 설명합니다.

설치류에서 급성 해마 조각을 사용하여 시냅스 태그 / 캡처 및 크로스 캡처 조사

이 프로토콜에서는 최적화 된 N의 구현을 보여 줍니다.-메 틸-D-glucamine (NMDG) 보호 복구 방법의 뇌 조각 준비. 단일 미디어 공식 안정적으로 다양 한 실험적인 응용 프로그램에 대 한 어떤 나이의 동물에서 건강 한 뇌 조각 얻을 하는 데 사용 됩니다.

최적화 된 N를 사용 하 여 급성 뇌 조각의 준비-메 틸-D-glucamine 보호 복구 방법

이 프로토콜 산소 수준 재활용된 버퍼의 작은 볼륨과 침수 급성 hippocampal 조각 활동 종속 시 냅 스가 소성 녹음의 방법 론 적 측면에서의 안정화를 설명 합니다.

급성 Hippocampal 조각에 작은 볼륨 재활용-, 관류-침수 형 챔버 시스템 유지에 시 냅 스가 소성을 기록

정확 하 게 파악 하 고 분석 hippocampal 조각 면역 형광을 사용 하 여 시 냅 스에 대 한 프로토콜은이 문서에 설명 되어.

시 냅 스 밀도 Hippocampal 설치류 두뇌 분할 영역에서의 평가

이것은 조직에 저산소 손상을 줄이기 위해 얼음 차가운 NMDG-aCSF와 함께 경내 관류 및 슬라이스 절단을 활용하는 성인 및 노화 마우스 해마의 급성 슬라이스 준비를위한 프로토콜입니다. 결과 슬라이스는 여러 시간 동안 건강하게 유지되며 장기 패치 클램프 및 필드 레코딩에 적합합니다.

성인과 노화 마우스에서 해마 조각에서 저산소증 최소화

이 문서는 마우스에서 수평 해마 뇌 조각을 얻기 위해 체계적인 프로토콜을 설명하는 것을 목표로합니다. 이 방법론의 목적은 천공 경로 및 이끼 섬유장과 같은 해마 섬유 경로의 무결성을 보존하여 규톨염 자이러스 관련 신경학적 과정을 평가하는 것입니다.

마우스 뇌의 수평 해마 조각

우리는 마우스의 등간 중간 해마에서 급성 슬라이스를 준비하는 프로토콜을 제시한다. 우리는 기록의 품질과 기록 된 뉴런의 형태학적 특징의 보존 측면에서 관상 슬라이스와이 트랜스 버사제 준비를 비교합니다.

성인 마우스의 덴테이트 자이루스에서 전신 기록 및 신경 재건을위한 등산 해마에서 급성 슬라이스의 준비

학습하세요 노화된 쥐와 트랜스제닉 마우스의 해마 조각을 준비하여 시냅스 기능과 가소성을 연구하는 방법을. 이 기술은 노화 및 아밀로이드 병리 동안 시냅스 변화를 평가하는 데 필수적입니다.

노화와 아밀로이드 병리 동안 시냅틱 얼터 레이션의 연구에 대한 고양이와 트렌스 제닉 마우스의 급성 Hippocampal 조각의 준비

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