0 조회수 • 1:30 분 • March 4th, 2025
세포 사멸과 DNA 단편화를 특징으로 하는 세포사멸(apoptosis)을 겪고 있는 뉴런을 포함하는 사전 고정, 탈파라핀 및 재수화된 관상 동맥 뇌 절편으로 시작합니다.
TUNEL 분석을 사용하여 세포사멸 세포사멸을 검출하려면 효소 proteinase-K로 뇌 절편을 처리합니다.
Proteinase-K는 뉴런에 들어가 DNase를 비활성화하여 DNA 분해를 방지합니다.
슬라이스를 헹구어 잔류 효소를 제거합니다.
형광 염료 표지된 deoxyuridine triphosphates(dUTP)와 말단 deoxynucleotidyl transferase 또는 TdT 효소가 포함된 완충액을 추가한 다음 배양합니다.
DNA 단편이 풍부한 세포사멸 뉴런에서 TdT 효소는 이러한 형광 dUTP를 DNA 단편의 자유 3'-하이드록실 그룹에 부착합니다.
대조적으로, 건강한 뉴런의 DNA는 표지되지 않은 상태로 남아 있습니다.
건강한 뉴런과 자가사멸 뉴런의 DNA에 결합하여 핵을 파란색으로 염색하는 핵 염료인 DAPI로 조직을 염색합니다.
시각화 시 파란색 형광과 녹색 형광을 모두 포함하는 뉴런은 뇌 조직에서 자가사멸 세포 사멸을 확인합니다.