0 조회수 • 1:28 분 • March 4th, 2025
정의된 사후 간격으로 뇌내 광견병 바이러스에 감염된 마우스에서 고정된 뇌 절편을 수집합니다.
이 바이러스는 대뇌 피질의 피라미드 뉴런을 감염시키며, 발현된 바이러스 단백질은 봉입체(inclusion body)로 알려진 세포질 내 과립 구조 내에 국한됩니다.
절편을 염화암모늄으로 처리하여 고정으로 인한 반응기를 중화하고 배경 염색을 최소화합니다.
과산화수소에 절편을 담궈 내인성 과산화효소를 비활성화하고 비특이적 신호를 줄입니다.
세제가 포함된 차단 용액을 적용하여 세포막을 투과화하고 비특이적 결합 부위를 마스킹합니다.
바이러스 단백질에 특이적인 1차 항체로 배양합니다.
1차 항체에 결합하는 비오틴 접합 2차 항체로 세척하고 배양합니다.
다시 세척하고 비오틴에 결합하는 과산화효소 접합 아비딘(peroxidase enzyme-conjugated avidin)을 도입한 다음, 효소가 착색된 산물로 전환하는 발색 기질을 주입합니다.
현미경을 사용하여 바이러스 단백질을 포함하는 면역반응성 봉입체를 시각화합니다.
사후 검시 시간이 증가함에 따라 신경 세포의 저하와 봉입체의 소멸이 분명해집니다.