JoVE 실험 백과사전
신경과학
0 조회수 • 1:30 분 • March 4th, 2025
우뇌 반구로 가는 혈류가 제한된 쥐를 예로 들어 BBB 손상을 입힙니다.
손상된 BBB를 교차하여 뇌에 도달하는 형광단 태그가 붙은 알부민을 정맥 주사합니다.
화학적으로 고정된 뇌 단면을 얻습니다.
비특이적 항체 결합을 방지하기 위해 차단 버퍼를 추가합니다.
형광단 태그가 지정된 알부민을 표적으로 하는 과산화효소 접합 항체를 적용합니다.
과산화효소가 전자 밀도가 높은 침전물로 변환하는 발색성 기질을 추가합니다.
오스뮴 테트록사이드를 도입하여 막 지질을 고정하고 대비를 향상시킵니다.
알코올 농도가 증가하는 부분을 탈수하십시오.
핵산 및 단백질에 결합하여 대비를 증가시키는 우라닐 아세테이트를 추가합니다.
알코올 농도를 증가시켜 다시 탈수하고 수지 포매를 위해 프로필렌 옥사이드로 마무리합니다. 섹션을 레진에 끼웁니다.
발색체로 염색된 영역을 현미경으로 식별하고 절제합니다.
이 섹션을 레진에 다시 삽입하고 초박형 슬라이스를 준비합니다.
전자 현미경(EM) 그리드에 슬라이스를 장착합니다.
세포외 기질 대비를 향상시키기 위해 구연산납을 함유한 염색제.
EM을 진행하여 BBB 무결성을 검사합니다.