Detection of Phosphorylated Tau Proteins in Mouse Brain Samples Using Western Blot Analysis

doi:10.3791/23390

웨스턴 블롯 분석을 사용한 마우스 뇌 샘플에서 인산화된 타우 단백질 검출

Encyclopedia of Experiments
Neuroscience

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Detection of Phosphorylated Tau Proteins in Mouse Brain Samples Using Western Blot Analysis

웨스턴 블롯 분석을 사용한 마우스 뇌 샘플에서 인산화된 타우 단백질 검출

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01:25 min

March 4, 2025

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Transcript

프로테아제 억제제와 세제가 들어있는 추출 완충액에 있는 쥐의 뇌 조직으로 시작합니다.

조직을 균질화하여 단백질을 완충액으로 방출합니다. 프로테아제 억제제는 프로테아제 활성을 차단하여 단백질 분해를 방지합니다.

원심분리기를 사용하여 단백질과 함께 상등액을 수집합니다.

단백질을 변성시키기 위해 세제와 환원제를 포함하는 로딩 버퍼를 추가합니다.

대조군과 샘플에서 단백질을 SDS-PAGE 젤에 로드합니다. 전기장을 가하여 단백질을 뚜렷한 띠로 분리합니다.

전기영동 후 단백질 밴드를 멤브레인으로 옮깁니다.

무지방 우유가 함유된 완충액으로 멤브레인을 처리하여 비특이적 상호 작용 부위를 차단합니다.

인산화된 타우 단백질에 특이적으로 결합하는 1차 항체로 배양합니다.

효소 접합 2차 항체로 세척 및 배양합니다.

효소와 반응하는 기질을 추가하여 광 신호를 생성하여 인산화된 타우 단백질을 확인합니다.

대조군과 비교하여 샘플의 강렬한 발광 대역은 신경퇴행성 병리학을 암시합니다.