JoVE 실험 백과사전
신경과학
0 조회수 • 1:23 분 • March 4th, 2025
루이소체(Lewy bodies, LB)를 포함하는 병든 인간 뇌 조직의 재수화된 부분을 예로 들어 보겠습니다.
과산화수소 용액으로 배양하여 내인성 과산화효소를 억제하고 비특이적 염색을 방지합니다.
구연산염 완충액의 섹션을 가열하여 LB의 알파-시누클레인 항원결정기를 제거합니다.
비특이적 항체 결합을 방지하기 위해 차단제를 적용합니다.
과잉 차단제를 제거하고 알파-시누클레인을 표적으로 하는 1차 항체로 절편을 배양합니다.
결합되지 않은 항체를 씻어냅니다.
1차 항체에 결합하는 비오틴화된 2차 항체를 적용합니다.
과도한 항체를 제거하십시오.
비오틴화된 2차 항체에 결합하는 스트렙타비딘-비오틴-과산화효소 복합체를 추가합니다.
묶이지 않은 복합체를 씻어냅니다.
과산화효소(peroxidase)와 반응하는 착색 기질을 적용하여 갈색 침전물을 형성합니다.
여분의 기판을 제거하십시오.
counterstain으로 처리하여 핵을 파란색으로 착색하여 현미경으로 신경 세포질의 LB 내에 있는 갈색 염색된 알파-시누클레인에 대한 대비를 향상시킵니다.