0 조회수 • 1:22 분 • March 4th, 2025
용해 완충액에 있는 인간의 뇌 조직으로 시작합니다.
균질화기로 조직을 균질화하여 뇌 기능에 필수적인 글루탐산 탈카르복실라제 또는 GAD 효소 동형을 포함한 단백질을 방출합니다.
균질산염을 얼음 위에서 배양한 다음 원심분리기를 사용하여 파편을 펠릿으로 만듭니다. 단백질 함유 상등액을 수집합니다.
단백질을 변성시키기 위해 세제와 환원제가 포함된 로딩 버퍼를 추가합니다.
이 샘플과 분자 마커를 그래디언트 SDS-PAGE 겔과 전기영동에 로드하여 단백질을 뚜렷한 띠로 분리합니다.
겔의 단백질을 멤브레인 시트에 전기로 블롯팅합니다.
불특정 바인딩을 방지하기 위해 차단 에이전트를 추가합니다.
수용성 GAD 이성질체에 결합하는 GAD-동형(isoform) 특이적 1차 항체로 배양합니다.
결합되지 않은 항체를 제거하려면 세척하십시오.
형광 표지된 2차 항체로 배양합니다.
다시 씻고 이미징 시스템에서 단백질 밴드를 시각화합니다.
형광을 통해 GAD 밴드를 검출하고 마커를 사용하여 분자량 차이를 확인합니다.