척수 손상을 연구하기 위해 신생아 쥐의 피질 척수 뉴런에 표적 바이러스 전달

외과적으로 노출된 경추 척수가 있는 마취된 신생아 쥐부터 시작합니다.

이 쥐는 디자이너 수용체와 형광 단백질을 암호화하는 전행성 바이러스를 주입했으며, 이 바이러스는 뇌의 체성 운동 피질에 있는 피질척수로(CST) 뉴런을 표적으로 삼습니다.

척추 동맥을 사용하여 척수의 정중선을 식별합니다.

재조합효소를 암호화하는 역행성 바이러스가 포함된 유리 바늘을 CST 축삭 말단이 상주하는 표적 척추층 뒤에 배치합니다.

바늘을 척수에 넣고 바이러스를 주입합니다.

바이러스가 확산되도록 한 다음 천천히 바늘을 빼내고 절개 부위를 봉합합니다.

바이러스는 CST 축삭 말단으로 들어가 역행하여 세포체로 이동하여 재조합효소를 발현합니다.

이 효소는 전행성 바이러스에 의해 전달되는 이식유전자를 활성화하여 이중 감염된 뉴런에서만 디자이너 수용체와 형광 단백질의 발현을 허용합니다. 이 방법을 사용하면 척수 손상에서 CST 뉴런의 표적 분석이 가능합니다.

척수에 직접 주사하는 경우 유리 주사 바늘의 끝을 사용하여 척수 동맥을 식별하여 척수의 정중선을 근사화합니다.

그런 다음 대략적인 정중선에서 C5 박판 바로 뒤쪽에 바늘을 놓고 이를 기준점으로 사용합니다. 그런 다음 마이크로 매니퓰레이터를 사용하여 바늘을 오른쪽으로 0.3mm 옆으로 움직이고 바늘이 척수 표면에 닿을 때까지 바늘을 내립니다.

이 깊이에서 바늘을 척수에 0.6mm 깊이 집어넣습니다. Cre 재조합효소 유전자를 운반하는 레트로 아데노 관련 바이러스 2 1마이크로리터를 분당 250나노리터로 주입합니다. 그런 다음 바이러스가 척수로 확산될 때까지 2분 동안 기다렸다가 천천히 바늘을 빼냅니다.