JoVE 실험 백과사전
신경과학
0 조회수 • 2:37 분 • August 29th, 2025
해마 뉴런이 디자이너 약물 또는 DREADD에 의해서만 활성화되는 디자이너 수용체를 발현하는 유전자 변형 마우스로 시작하십시오.
이러한 조작된 수용체는 내인성 분자에는 반응하지 않으면서 합성 시험 약물에 선택적으로 반응합니다.
스트레스를 최소화하고 절차에 적응시키기 위해 정기적으로 마우스를 목덜미십시오.
다음으로, 마우스의 무게를 측정하여 정확한 약물 복용량을 계산합니다.
마우스를 다루는 동안 일주기 방해를 방지하기 위해 희미한 빨간색 표시등을 사용하십시오.
마우스를 부드럽게 쥐어짜서 고정시킵니다.
피펫을 사용하여 시험 약물 용액을 취하고 팁에 물방울을 형성합니다. 이제 눈에 접근
하여 물방울을 표면에 놓습니다.
마우스를 홈 케이지로 되돌립니다. 약물 전달을 여러 번 반복합니다.
약물은 눈을 통해 흡수되어 뇌로 들어갑니다.
그런 다음 혈액-뇌 장벽을 통과하여 해마 영역에 도달합니다. 나중에 DREADD 수용체에 결합하고 뉴런을 활성화하여 정밀하고 비침습적인 신경 조절을 가능하게 합니다.
반복적인 CNO 전달의 경우, 주사 후 4주부터 시작하여, 점안액 투여 전 3-4일 동안 매일 3분 동안 각 마우스를 찡그리게 하여 동물을 취급에 적응시킨다. 마우스가 취급에 익숙해지면, 체중 농도 킬로그램당 1밀리그램의 CNO를 달성하기 위해 전달될 적절한 양의 CNO를 결정하기 위해 각 마우스의 무게를 측정합니다.
비활성 단계에서 불이 꺼지기 2시간 전에 준비된 CNO 용액 1-3마이크로리터를 P10 마이크로피펫에 넣고 목덜거림을 통해 마우스를 고정합니다. 피펫 팁에 안정적인 물방울이 형성될 때까지 용액을 천천히 배출하고 피펫 팁이 마우스의 눈에 닿지 않고 용액이 전달될 때까지 물방울을 각막에 조심스럽게 가깝게 가져옵니다. 그런 다음 다음 동물의 눈에 CNO 점안액을 바르기 전에 마우스를 홈 케이지로 되돌립니다.
마우스 활성 단계에서 CNO를 전달해야 하는 경우 적절한 동물 취급 및 CNO 전달을 위해 희미한 빨간색 표시등이 있는지 확인하십시오.